5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性與同型半胱氨酸相關性研究

逯曉輝 張彤 王前明

在我國，人群具有較高的血漿同型半胱氨酸（Hcy）水平，如果合并高血壓，那么其就具有更高的Hcy水平[1]。相關醫學研究表明[2]，很多疾病均和Hcy關系密切，在高血壓等心腦血管疾病的影響因素中，高Hcy水平是危險因素。相關醫學學者認為[3]，如果原發性高血壓患者具有較高的Hcy水平，那么其就為H型高血壓。本研究對廈門大學附屬第一醫院2018年8月—2019年2月心內科住院和門診心血管疾病患者202例的臨床資料進行了統計分析，對廈門地區5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性調查及其與同型半胱氨酸水平相關性進行了研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取廈門大學附屬第一醫院2018年8月—2019年2月心內科住院和門診心血管疾病患者202例，其中男性141例，女性61例，平均年齡（62.36±13.36）歲。

1.2 納入和排除標準

納入標準：（1）均為漢族；（2）均知情同意。排除標準：（1）未檢測血漿同型半胱氨酸；（2）重癥監護病房患者。

1.3 方法

1.3.1 MTHFR基因型測定 運用聚合酶鏈式反應－限制性酶切片斷長度多態性（P C R－R F L P）分析方法，PCR擴增引物序列正向、反向分別為5′－C T C T G T G C T A A C C T G T A G C－3′、5′－C T G G T A C G A C C T C A G C T A A C－3′。在37℃的溫度下用HinfI酶切PCR產物，2% 瓊脂糖凝膠電泳對酶切結果進行觀察，CC基因型患者無HinfI酶切位點，Hinf I酶切后只有一條產物帶，長度為274 bp；CT基因型、TT基因型患者酶切產物分別有3條帶、2條帶，長度分別為46 bp、228 bp、274 bp，46 bp、228 bp。

1.3.2 Hcy測定 清晨8:00-10:00將兩組患者的2 mL空腹靜脈血采集下來，EDTA-K2抗凝，1 h內在4℃的溫度下進行10 min的離心，將速率設定為3 000 r/min，將上層血漿分離出來，在-20℃的低溫下放置保存，3個月內測量。運用高效液相色譜法對Hcy進行測定，正常值≤15 μmol/L，Hhcy的診斷標準為Hcy＞15 μmol/L[4]。

1.4 統計學分析

計量資料用（x-±s）表示，用t檢驗；計數資料用率表示，用χ2檢驗。多元線性回歸分析血漿Hcy水平和MTHRF C667T不同基因型，采用SPSS 21.0，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 不同性別患者的一般資料比較

男性患者的年齡顯著高于女性（P＜0.05），身體質量指數顯著低于女性（P＜0.05），MTHFR C677T基因型CC+CT型比例顯著高于女性（P＜0.05），但男性、女性患者的CC型、CT型、TT型比例之間的差異不顯著（P＞0.05）。具體見表1。

2.2 血漿Hcy水平和MTHRF C667T不同基因型的多元線性回歸

男性、女性TT基因型患者的血漿Hcy水平均顯著高于CC基因型、CT基因型（P＜0.05），但CC基因型、CT基因型患者的血漿Hcy水平之間的差異均不顯著（P＞0.05）。對混雜因素進行調整前后男性、女性TT基因型患者的血漿Hcy水平均顯著高于CC基因型（P＜0.05），對年齡、身體質量指數進行調整后CC基因型、CT基因型患者的血漿Hcy水平之間的差異均不顯著（P＞0.05）。具體見表2。

3 討論

很多疾病均和N5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶（N5,10-MTHFR）C677T基因多態性關系密切，同時，在Hcy代謝過程中，MTHFR是關鍵酶，血漿Hcy代謝在其活性消失或減弱的情況下失常，進而引發高同型半胱氨酸血癥（Hhcy）[5-9]。現階段，很多相關醫學研究均報道了很多疾病和MTHFRC677T基因多態性、Hc y水平的相關性，但是卻較少有相關醫學研究報道心腦血管疾病和MTHFRC677T基因多態性、Hc y水平的相關性。相關醫學研究表明[10-12]，在高血壓人群H型高血壓、Hcy升高的遺傳因素中，MTHFR基因C677T純合突變可能占有重要地位，同時有性別差異存在。本研究結果表明，男性患者的年齡顯著高于女性（P＜0.05），身體質量指數顯著低于女性（P＜0.05），但男性、女性患者的CC型、CT型、TT型比例之間的差異不顯著（P＞0.05）。男性、女性TT基因型患者的血漿Hc y水平均顯著高于CC基因型、CT基因型患者（P＜0.05），但CC基因型、CT基因型患者的血漿Hcy水平之間的差異均不顯著（P＞0.05）。對混雜因素進行調整前后男性、女性TT基因型患者的血漿Hc y水平均顯著高于CC基因型、CT基因型（P＜0.05），對年齡、身體質量指數進行調整后CC基因型、CT基因型患者的血漿Hcy水平之間的差異均不顯著（P＞0.05），和上述相關醫學研究結果一致。

表1 兩組患者的一般資料比較

表2 血漿Hcy水平和MTHRF C667T不同基因型的多元線性回歸（ x- ±s）

綜上所述，廈門地區5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因C677T純合突變可能是同型半胱氨酸水平升高的重要遺傳因素，同時有性別差異存在。