實驗室小鼠腹主動脈血液采集的優缺點

王曉娜

（沈陽沈化院測試技術有限公司，遼寧沈陽 110000）

1 材料與方法

1.1 實驗動物

5周齡SPF等級小鼠80只，雌雄各40只。

1.2 實驗器材

采血針、酒精棉球、采血管、CO2麻醉罐、解剖板、手術剪、鑷子等。

1.3 麻醉方法

采用CO2麻醉法麻醉，將小鼠放入麻醉罐中，麻醉到適當深度（身體松弛，呼吸深而緩）后取出，取出后將其罩在麻醉面罩下。

1.4 消毒方法

將麻醉后的小鼠腹部朝上固定于解剖板上，用固定針固定其四肢，用0.9 %生理鹽水將動物腹部皮毛噴濕。

1.5 采血過程

采血時間選擇在上午空腹進行，拿取采血管，從生殖器上部至劍狀軟骨，用手術剪呈“V”字型開腹，右手取一張潔凈濾紙輕輕將腸管推向動物身體左側，充分暴露出中間粉紅色腹主動脈，將采血針針尖斜面朝下向心臟方向刺入腹主動脈，進針速度要迅速，進針手不可亂動，保持針尖水平防止滾針，見采血針內有回血左手立即將采血管插入采血針尾部，采血量達到檢測需求方可拔出采血針。依據檢測要求選擇相應的抗凝劑，含有抗凝劑的采血管在采血后應該立即上下顛倒混勻，若采集時間稍長則需要邊采血邊搖管，使血液與抗凝劑充分混合，防止血液凝固，注意動作要輕緩。采血過程中不斷觀察小鼠，麻醉面罩要根據小鼠狀態取下或罩上，采血后，用手術剪剪斷動物腹腔大血管，充分放血，將潔凈濾紙蓋在其上面防止血液亂濺。

2 注意事項

2.1 麻醉深度

觀察小鼠狀態，麻醉深度要掌握好（CO2濃度為50 %～80 %，O2濃度為20 %左右），因為CO2麻醉法容易蘇醒，所以根據麻醉程度和采血時間選擇是否需要持續麻醉，若需要，把面罩罩在動物口鼻處，持續通入CO2與O2的混合氣體。

2.2 掌握正確進針方法

小鼠動脈沒有大鼠清晰，所以進針一定要仔細，進針要平，勿要扎穿，若試驗需要檢測指標多并需要換采血管，換管要小心，勿將采血針帶出，帶抗凝劑的采血管要及時搖勻防止血液凝固。

3 結果

（1）80只小鼠平均每只采血量在2.0 ml左右；血常規與生化測試量足夠；

（2）每只小鼠大約采血時間在2min左右；

（3）測試指標滿足要求，動物發生溶血情況極少；

（4）小鼠臟器完整，不影響后期解剖。

4 討論

目前，小鼠常用的采血方法有眼眶后靜脈叢采血法、眼球摘除采血法、心臟采血法、剪尾 采血法等[2]，不同的采血方法適用于不同的實驗用途和所需血量。眼眶采血法采血量約為0.2～0.3 ml，可重復采血，但對眼球的損傷是巨大的，不利于后期病理診斷；眼球摘除采血法采血量一般約為0.3～0.4 ml，缺點是不可重復采血，嚴重可導致小鼠失明，并且容易發生感染的情況，可致小鼠死亡，不符合動物福利基本原則；心臟采血法采血量可達0.8 ml，但由于小鼠個體小、心臟小、心臟搏動快，采血時位置不易固定，所以操作難度系數加大；斷尾采血法，雖可以連續多次采血，但每次采血量極少，不到0.1 ml，不適于需要較多血量的實驗。

根據需要妥善地選擇采血方法是實驗成敗的關鍵環節，其方法的優劣主要看采血的數量、質量及操作的難易程度等。不同采集方法對血常規的檢驗結果有不同的影響[3]。而我們實驗室通過大量的試驗證明，腹主動脈采血法采血量大，無需多次采血，對血常規檢測、生化指標檢測、血凝檢測、血液涂片均有顯著性的意義，解決了因采血量不夠而導致所測指標無意義的現象。腹主動脈采血法即采即測，速度快，不費時間，對試驗后續解剖提供很大的幫助。

有相關工作的人員應該知道不當的血液采集方法可能導致血液溶血從而影響檢測的結果，我認為這一般是與采血者的技術分不開的。通常來說眼眶、尾尖等采血方法很容易造成溶血；而頸動靜脈、斷頭、心、腹主動脈等方法采血則發生溶血概率較小。腹主動脈采血法唯一缺點就是對麻醉人員及采血人員的要求極高，不但能夠準確判斷出腹主動脈走向，更能夠通過觀察小鼠狀態立即判斷是否處于最佳采血狀態，深度麻醉將會導致小鼠死亡，麻醉過淺也將導致小鼠在采血過程中蘇醒過來，而我們也通過多次的臨床試驗證明血液測試結果滿足要求，不會出現因采血量不足而有指標測不出來的現象，所以在具備了專業的采血技術之后嘗試腹主動脈采血無疑是最佳的選擇。