非梗阻性無精子癥患者附性腺標志物變化分析

鄧順美 張欣宗 龐韜

[摘要]目的 通過對正常生育男性和非梗阻性無精子癥患者精液常規(guī)分析與精漿附性腺標志物的檢測，探討非梗阻性無精子癥患者附性腺生化標志物的變化。方法 選取2018年3～8月于廣東省計劃生育專科醫(yī)院門診就診的38例非梗阻性無精子癥患者作為非梗阻性無精子癥組，另選取同期于廣東省計劃生育專科醫(yī)院進行生殖健康體檢合格的有正常生育力的30例男性志愿者作為正常對照組。禁欲2～7 d后均手淫取精，精液完全液化后，常規(guī)檢測精液量、精漿附性腺標志物（包括精漿果糖、精漿中性α-葡糖苷酶和精漿鋅含量）。結(jié)果 非梗阻性無精子癥組患者的精液量[2.6（0.2，5.9）ml]低于正常對照組[3.8（2.2，6.3）ml]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。非梗阻性無精子癥組患者的精漿果糖含量[36.0（0.1，141.5）μmol/一次射精]低于正常對照組[75.9（22.4，154.4）μmol/一次射精]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。非梗阻性無精子癥組患者的精漿中性α-葡糖苷酶活性[26.8（0.4，95.7）mU/一次射精]低于正常對照組[61.1（7.8，193.9）mU/一次射精]，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。兩組的精漿鋅含量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論 非梗阻性無精子癥患者與正常生育男性相比，除生精功能障礙外，還同時存在不同程度的附睪和精囊腺功能下降。

[關(guān)鍵詞]非梗阻性無精子癥;精漿果糖;精漿中性α-葡糖苷酶;精漿鋅;人類精液

[中圖分類號] R698.2 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-4721（2019）12（b）-0038-04

[Abstract] Objective To investigate the changes of biochemical markers of accessory sex gland in non-obstructive azoospermia patients by routine analysis of semen and detection of accessory sex gland markers in seminal plasma of normal fertile men and non-obstructive azoospermia patients. Methods A total of 38 patients with non-obstructive azoospermia were selected as the non-obstructive azoospermia group， and 30 male volunteers with normal fertility who passed the reproductive health examination were selected as the normal control group from March to August 2018 in the Outpatient Clinic of Guangdong Family Planning Specialty Hospital. After abstinence for 2 to 7 days， the semen sample were obtained by masturbation. After complete liquefaction of semen， semen volume and semen accessory gland markers （including seminal fructose， seminal neutral α-glucosidase and seminal zinc）， were routinely measured. Results The semen volume of the non-obstructive azoospermia group （2.6 [0.2， 5.9] ml） was lower than that of the normal control group （3.8 [2.2， 6.3] ml）， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The content of seminal fructose in the non-obstructive azoospermia group （36.0 [0.1， 141.5] μmol/ejaculation） was lower than that in the normal control group （75.9 [22.4， 154.4] μmol/ejaculation）， the difference was statistically significant （P<0.05）. The activity of seminal neutral α-glucosidase in the non-obstructive azoospermia group （26.8 [0.4， 95.7] mU/ejaculation） was lower than that in the normal control group （61.1 [7.8， 193.9] mU/ejaculation）， the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no significant difference in seminal zinc content between the two groups （P>0.05）. Conclusion Compared with normal fertile men， non-obstructive azoospermia patients have not only spermatogenic dysfunction， but also decreased epididymis and seminal vesicle gland function in varying degrees.

[Key words] Non-obstructive azoospermia; Seminal fructose; Seminal neutral α-glucosidase; Seminal zinc; Human semen

流行病學資料顯示，已婚育齡夫婦人群中不孕不育發(fā)病率為10%～15%，是繼心腦血管病和腫瘤之后困擾人類健康的第三大疾病[1]。因男性因素引起的不育占50%，其中無精子癥約占男性不育的10%[2]。無精子癥可分為梗阻性無精子癥和非梗阻性無精子癥，非梗阻性無精子癥是由于睪丸生精功能障礙引起的無精子癥。患者附睪、輸精管及射精管等輸精管道通暢無梗阻。睪丸病理檢查常表現(xiàn)為唯支持細胞綜合癥和各級生精細胞阻滯。精液分析檢查時，該類患者表現(xiàn)為精液中無精子。精液中除了精子等各種有形成分外，還含有各種各樣的無機鹽和生物大分子，這些成分主要來源于輸精管道的上皮細胞和各種附性腺，有些還為精子運動提供能量[3-5]。作為非梗阻性無精子癥患者，他們除了睪丸生精功能障礙之外，其附性腺功能是否也同時存在功能變化，尚不得而知。本研究采集廣東省計劃生育專科醫(yī)院的38例正常生育男性和30例非梗阻性無精子癥患者的精液標本，檢測兩組精液的附性腺標志物，旨在探討非梗阻性無精子癥患者的附性腺功能變化，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2018年3～8月于廣東省計劃生育專科醫(yī)院門診就診的38例非梗阻性無精子癥患者作為非梗阻性無精子癥組，患者年齡22～37歲，平均（30.47±4.25）歲。另選取同期于廣東省計劃生育專科醫(yī)院進行生殖健康體檢合格的有正常生育力的30例男性志愿者作為正常對照組，患者年齡22～40歲，平均（30.60±5.07）歲。兩組的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

非梗阻性無精子癥診斷標準：精液常規(guī)分析無精子，睪丸活檢仍未見精子，果糖陽性，排除輸精管道梗阻。正常對照組納入標準：精液常規(guī)檢查量≥1.5 ml者;精子濃度≥15×106/ml者;前向運動精子≥32%者;正常形態(tài)精子百分率≥4%者;已有1歲以內(nèi)小孩者。非梗阻性無精子癥組和正常對照組排除標準：有性傳播性疾病和遺傳病者。本研究經(jīng)廣東省計劃生育專科醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核及同意，所有參與研究者均知曉本研究情況并簽署知情同意書。

1.2試劑與儀器

精漿果糖定量、精漿中性α-葡糖苷酶和精漿鋅檢測試劑盒由深圳市博銳德生物科技有限公司提供;血球計數(shù)池、全自動生化分析儀購置于深圳市博銳德生物科技有限公司。

1.3方法

1.3.1精液常規(guī)與精子形態(tài)學分析 ?非梗阻性無精子癥患者和正常生育男性均禁欲2～7 d后手淫取精，標本放置37℃水浴箱，等待液化。精液完全液化后，采用《人類精液檢查與處理實驗室手冊》（第5版）推薦的血球計數(shù)池檢測精子濃度[6]。制備深20 μm的精子濕片，在400倍視野評估前向運動精子，運用拉薄技術(shù)制備精子涂片，采用世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的改良巴氏染色法檢測精子形態(tài)[6]。對于非梗阻性無精子癥患者的精液標本，先進行顯微鏡初檢，如任一濕片均未見精子，則混勻精液標本，取1 ml精液，以3000 g離心15 min，棄上清，沉淀混勻，取10 μl，蓋上22 mm×22 mm蓋玻片，制備20 μm深的精子濕片，在400倍的相差顯微鏡下檢查。如仍未見精子，則離心剩余精液標本，收集精液上清-20℃下貯存。正常生育男性精液采用同樣的離心方法處理上清。

1.3.2精漿附性腺標志物檢測方法 ?精漿果糖定量、精漿中性α-葡糖苷酶活性和精漿鋅含量檢測均采用WHO主編的《人類精液檢查與處理實驗室手冊》（第5版）推薦的方法[6]，進行分析檢測。

1.4觀察指標

常規(guī)檢測兩組實驗對象的精液量、精漿附性腺標志物（包括精漿果糖、精漿中性α-葡糖苷酶和精漿鋅含量）。

1.5統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布計量資料的均值用均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，不符合正態(tài)分布的計量資料以中位數(shù)四分位數(shù)間距[M（P25，P75）]表示，兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

非梗阻性無精子癥組患者的精液量、精漿果糖濃度和精漿中性α-葡糖苷酶活性均低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），兩組的精漿鋅含量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表1）。

3討論

不育男性精液經(jīng)離心沉淀后，進行顯微鏡檢查，連續(xù)3次均未發(fā)現(xiàn)精子，果糖陽性，精液pH值檢測≥7.0，排除輸精管道阻塞方可診斷為非梗阻性無精子癥。引起非梗阻性無精子癥的因素很多，一方面，體細胞染色體異常，如Klinefelter綜合征（又稱先天性睪丸發(fā)育不全或原發(fā)性小睪丸證）、唐氏綜合征（又稱21-三體綜合征）、8三體（又稱Warkany綜合征）及47XYY綜合征（又稱YY綜合征或超雄綜合征）都會出現(xiàn)不同程度的睪丸生精障礙。Y染色體微缺失，如AZF缺失，常表現(xiàn)為無精子癥或嚴重少精子癥。生殖細胞染色體異常、隱睪、先天性無睪癥等也是引起無精子癥的主要先天性因素。另一方面，各種化療、放療、營養(yǎng)缺乏、內(nèi)分泌失常、精索靜脈曲張和各種環(huán)境有害因素常引起繼發(fā)性睪丸生精障礙性無精子癥。各種各樣的先天性因素和繼發(fā)性因素在引起睪丸生精障礙的同時，是否也會對生殖系統(tǒng)的附性腺功能產(chǎn)生影響，尚不得而知。本研究試圖通過精液分析，精漿生化標志物檢測，分析探討非梗阻性無精子癥患者附性腺功能的改變。

常規(guī)檢測正常生育男性組和非梗阻性無精子癥患者組精液的相關(guān)參數(shù)，包括精液量、精子濃度、前向運動精子百分率、正常形態(tài)精子百分率，運用《人類精液檢查與處理實驗室手冊》第5版推薦的方法檢測精漿果糖濃度、精漿鋅含量和精漿中性α-葡糖苷酶活性，分析比較檢測結(jié)果，探索非梗阻性無精子癥患者的附性腺功能變化。本研究結(jié)果提示，正常生育男性組與非梗阻性無精子癥組精漿鋅含量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），提示兩者在精漿鋅含量上無明顯差異，非梗阻性無精子癥患者的前列腺分泌功能仍處于正常水平。但是本研究結(jié)果提示，非梗阻性無精子癥組患者的精液量、精漿果糖濃度和精漿中性α-葡糖苷酶活性均低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。已知精液由精子、細胞和精漿組成，精液體積主要由精漿決定，大約三分之二的精漿由精囊腺分泌，而且精液果糖也是精囊腺的特異性標志物，是精子運動的能量來源，直接參與精子獲能和受精。精子軸絲收縮依賴三磷酸腺苷（ATP）供給能量，而ATP可由果糖分解代謝產(chǎn)生，故精漿果糖含量降低，將使精子活動力減弱，影響受精率。本研究結(jié)果提示，非梗阻性無精子癥組患者的精液量、精漿果糖濃度均低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示非梗阻性無精子癥患者的精液量、精漿果糖含量均顯著下降，表明該類患者除睪丸生精功能障礙之外，精囊腺分泌功能也存在下降趨勢。附睪是男性生殖系統(tǒng)的重要附性腺器官，生精小管產(chǎn)生的精子在附睪中停留一段時間，并經(jīng)歷一系列成熟變化，才能獲得運動能力、識別卵子透明帶能力和與卵子結(jié)合的能力，達到功能上的成熟[7]。附睪上皮細胞還分泌肉毒堿、中性α-葡糖苷酶等附睪特異性標志物。中性α-葡糖苷酶可催化精子糖原降解，供給精子代謝與運動能源，精子成熟、獲能及受精過程伴有比較活躍糖基反應都與此酶活力有關(guān)。有研究報道，精漿中性α-糖苷酶活性與精子前向運動性及受精能力之間有顯著正相關(guān)性[8]。這些特異性標志物的變化不同程度地反映附睪分泌功能的改變[9-10]。已有相關(guān)研究顯示[11]，少弱精子癥患者不僅存在睪丸生精功能的變化，而且伴有附睪功能的改變，主要反映在精漿中性α-葡糖苷酶活性顯著降低。附睪特異蛋白酶抑制劑（EPPIN）表達與精子濃度、精子活力成顯著負相關(guān)，它能結(jié)合精囊蛋白（semenogelin，Sg）和纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)n），通過在精子表面形成的外殼蛋白抑制精子獲能及精子的活動性[12]。既往研究發(fā)現(xiàn)，睪丸蔞縮所致的無精子癥患者精液中肉毒堿濃度處于低水平狀態(tài)[13]。精漿中性α-葡糖苷酶活性與精子活力之間有顯著的正相關(guān)性，與不運動精子成顯著負相關(guān)性，提示該酶活性與精子前向運動能力有關(guān)[14-15]。本研究結(jié)果提示，非梗阻性無精子癥患者的精漿中性α-葡糖苷酶活性低于正常生育男性組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示睪丸的生精功能與附睪的功能是密切相關(guān)的，即睪丸生精功能低下引起的無精子癥患者，同時還伴有附睪功能的低下。Mahmoud等[16]在研究附睪功能性標志物時發(fā)現(xiàn)，精漿中性α-葡糖苷酶活性與精子濃度成顯著正相關(guān)，這些研究也從另一個側(cè)面得出了與本研究同樣的結(jié)論，即睪丸生精功能與附睪功能密切相關(guān)，引起睪丸生精功能障礙的因素，也會引起附睪分泌功能的下降。然而，這種關(guān)系的機制仍然不清楚，還有待于進一步研究。

綜上所述，非梗阻性無精子癥患者既存在生精功能障礙，同時還伴有附睪和精囊腺分泌功能下降，精漿附睪和精囊腺特異性標記物中性α-葡糖苷酶活性和果糖含量檢測可以不同程度地反映睪丸生精功能狀況。

[參考文獻]

[1]Povey AC，Stocks SJ.Epidemiology and trends in male subfertility[J].Hum Fertil，2010，13（4）：182-188.

[2]蒲軍，吳小侯，唐偉，等.640例無精子癥病因分析[J].重慶醫(yī)科大學學報，2010，35（2）：317-319.

[3]Hashemi HH，Behhampour N，Nejabat M，et al.Impact of seminal plasma trace elements on human sperm motility parameters[J].Rom J Intern Med，2018，56（1）：15-20.

[4]Asghar BH，Heydar D，Eisa T，et al.Effects of zinc deficiency on impaired spermatogenesis and male infertility：the role of oxidative stress，inflammationand apoptosis[J].Hum Fertil，2018，21：1-12.

[5]Waheed MM，Meligy AMA，Dhalam SA，et al.The relationship between seminal plasma and serum trace elements and semen parameters of dromedary camels[J].Reprod Domest Anim，2018，53（6）：1367-1374.

[6]世界衛(wèi)生組織編.國家人口和計劃生育委員會科學技術(shù)研究所譯.人類精液檢查與處理實驗室手冊[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：7-86.

[7]熊承良，商學軍，劉繼紅，等.人類精子學[M].1版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：31.

[8]Elzanaty S，Maim J，Giwercmen A.Duration of sexual abstinence：epidermal and accessory sex gland secretion and their relationship to sperm motility[J].Hum Reprod，2005，20（1）：221-225.

[9]吳明章，曾超文，張君慧，等.男性生殖病理學[M].1版.上海：上海科學普及出版社，1998：158.

[10]Zopfgen A，Priem F，Sudhoff F，et al.Relationship between semen quality and the seminal plasma compenont scarnitine，α-glucosidase，fructose，citrate and granulocyteelastase in infertile men compared with a normal population[J].Hum Reprod，2000，15（4）：840-845.

[11]鄧順美，文任乾，黃建初，等.少弱精子癥與精漿附性腺標志物的相關(guān)性分析[J].中國男科學雜志，2004，18（6）：17-19.

[12]Zhang X，F(xiàn)ang J，Xu B，et al.Correlation of epididymal protease inhibitor and fibronectin in human semen[J].PLoS One，2013，8（12）：e82600.

[13]劉群龍.無精及少弱精子癥研究進展[J].現(xiàn)代診斷與治療，2008，19（2）：84-88.

[14]Elzanaty S，Malm J，Giwercmen A.Duration of sexual abstinence：epidermal and accessory sex gland secretion and their relationship to sperm motility[J].Hum Reprod，2005，20（1）：221-225.

[15]Cornwall GA.New insights into epididymal biology and function[J].Hum Reprod Update，2009，15（2）：213-227.

[16]Mahmoud AM，Geslevich J，Kint J，et al.Seminal plasma α-glucosidase activity and male infertility[J].Hum Reprod，1998，13（3）：591-595.

（收稿日期：2019-06-06 ?本文編輯：孟慶卿）