四川、西藏產(chǎn)野生當(dāng)歸揮發(fā)油成分的GC-MS分析

廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院，廣東 清遠(yuǎn) 511500

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸[Angelicasinensis(Oliv.) Diels]的干燥根，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便的功效[1]。揮發(fā)油是當(dāng)歸的有效成分之一，研究表明當(dāng)歸揮發(fā)油中含有藁本內(nèi)酯、正丁烯內(nèi)酯、當(dāng)歸酮、月桂烯等多種成分，具有廣泛的藥理活性。近年來當(dāng)歸揮發(fā)油在心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、腦神經(jīng)系統(tǒng)和抗腫瘤方面的相關(guān)研究取得了較好的成績[2]。

當(dāng)歸主產(chǎn)于我國西北和西南海拔1800～3000 m的高寒地區(qū)，根據(jù)產(chǎn)地的不同又有秦歸(產(chǎn)甘肅、陜西)、云歸(產(chǎn)云南)和川歸(產(chǎn)四川)之分，其中甘肅岷縣為當(dāng)歸的道地產(chǎn)區(qū)。張宏意等[3]2008年通過實地調(diào)查甘肅、四川、云南、湖北、青海和西藏林芝等當(dāng)歸產(chǎn)區(qū)，發(fā)現(xiàn)野生資源稀少。孫紅梅等[4]通過對當(dāng)歸藥材資源調(diào)查與分析發(fā)現(xiàn)，由于需求量的增加，生態(tài)環(huán)境的破壞，導(dǎo)致野生資源匱乏，目前現(xiàn)在市場上流通的當(dāng)歸藥材商品均為栽培品種。本研究通過分析對比西藏林芝和四川平武的野生當(dāng)歸揮發(fā)油中的成分和含量，對比其差異性，以期為當(dāng)歸野生藥用植物資源的開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材 西藏林芝野生當(dāng)歸采于海拔 3100 m左右的灌木林下，土壤類型為灰棕色土壤，PH值微堿性；四川平武野生當(dāng)歸實地采于海拔 2700 m左右的灌木林下，土壤類型為棕色土壤，PH值微堿性。采集時間為2018年9月，經(jīng)廣東藥科大學(xué)張宏意博士鑒定為傘形科植物當(dāng)歸[Angelicasinensis(Oliv.) Diels]。分離根莖葉，除去須根和泥沙，待水分稍蒸發(fā)后，置于40℃烘箱中，烘48 h后粉碎過40目篩。

1.2 儀器 烘箱；粉碎機(jī)；電熱套; 揮發(fā)油測定器; 冷凝管; 膠管；HP5890GC/HP5972MS氣/質(zhì)聯(lián)用儀；賽多利斯—sartor ious/BP210D電子天平；島津AY120托盤電子分析天平(稱量樣品)；具塞錐形瓶；HH—6恒溫水浴鍋；國家統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩：40目，孔徑0.45 mm，浙江上于縣杜浦江山篩具廠。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理 分別稱取兩地野生當(dāng)歸粉末50克(40目)，置于2000 mL圓底燒瓶中，加入800 mL蒸餾水，置揮發(fā)油測定器中，共水蒸餾提取8 h，靜置30 min，收集得到黃褐色透明油狀物，封裝備用。取兩地當(dāng)歸揮發(fā)油樣品，用島津AY120托盤電子分析天平精密稱定10 mg，用三氯甲烷溶解使?jié)舛葹?0 mg/mL，作為樣品供試液備用。

1.3.2 色譜條件儀器 HP5890GC/HP5972MS 氣/質(zhì)聯(lián)用儀；色譜柱: Cp sil 5CB(Varian) 30 m×0.25 mm×0.25 μm (100%苯甲基硅氧烷)；柱溫: 50℃保持6 min，2℃/min升溫至100℃保持10 min，1℃/min升溫至160℃，2℃/min升溫至220℃保持15 min；運行146 min；載氣：He氣；柱Flow=1.0 mL/min ；進(jìn)樣方式：不分流；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣口溫度：280℃。

1.3.3 質(zhì)譜條件 離子源為EI；電離電壓: 70 ev；電子倍培電壓:1 882 mV ；質(zhì)譜Temp=171℃；Vacuum:65 mTorr ；溶劑延時:6 min；質(zhì)譜掃描范圍:50～550 amu；質(zhì)量范圍：50～550 m/z；樣品經(jīng)峰純度檢測: Wiley 138譜庫檢索。

1.3.4 樣品定性、定量分析 分別取兩地野生當(dāng)歸揮發(fā)油樣品供試液，精密吸取1 μL，按“1.3”項下色譜條件和質(zhì)譜條件進(jìn)樣測定，得到相應(yīng)的質(zhì)譜圖，與 Wiley 138譜庫標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖進(jìn)行對比分析，確認(rèn)兩地野生當(dāng)歸揮發(fā)油各成分，用峰面積歸一化法計算出各組分相對百分含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 揮發(fā)油含量 取兩地野生當(dāng)歸各50 g粉末，照《中國藥典》(2015版)(通則2204乙法)項下?lián)]發(fā)油測定法測定揮發(fā)油含量，結(jié)果西藏林芝野生當(dāng)歸揮發(fā)油含量為1.22%(mL/g)，四川平武野生當(dāng)歸揮發(fā)油含量為1.16%(mL/g)。

2.2 揮發(fā)油成分 通過對西藏林芝野生當(dāng)歸揮發(fā)油中各成分 GC—MS 分析，檢出的各成分與 Wiley 138譜庫標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖進(jìn)行對比分析，檢測到35 個色譜峰，鑒定出22種化合物，總含量占總檢出峰的 91.699 % (色譜圖如圖 1 所示，化學(xué)成分見表 1)。其中含量最多的是2-氫正丁烯基苯酞(70.184%)，其次是正丁烯基苯酞(9.288%)，另外含量較多的還有十八碳二烯酸(3.171%)、十六烷酸(2.761%)、1.2-二烯基環(huán)丙烷(2.122%)，石竹烯(1.428%)等，其他成分含量則較低(低于1%)。

四川平武野生當(dāng)歸揮發(fā)油中檢出的各成分與 Wiley 138譜庫標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖進(jìn)行對比分析，檢測到35 個色譜峰，鑒定出17種化合物，總含量占總檢出峰的 97.675 % (色譜圖如圖 2 所示，化學(xué)成分見表 1)。其中含量最多的是2-氫正丁烯基苯酞(92.551%)，其次是正丁烯基苯酞(3.037%)，其他成分含量則較低(低于1%)。

通過對西藏林芝和四川平武兩地產(chǎn)野生當(dāng)歸揮發(fā)油成分的GC—MS分析對比(見表1)，發(fā)現(xiàn)兩地?fù)]發(fā)油中共有8種相同的成分，分別是：β-羅勒烯、1，3-異苯并呋喃二酮、石竹烯、(+-)-裸丁二烯、β-法尼烯、β-紅沒藥烯、正丁烯基苯酞和2-氫正丁烯基苯酞；8種共同成分相對含量分別占總成分的81.709%(西藏林芝)和96.17%(四川平武)。

表1 西藏林芝和四川平武野生當(dāng)歸揮發(fā)油化學(xué)成分檢索結(jié)果對比

另外，西藏野生當(dāng)歸中還含有1-α-松油醇、9-甲基-十一碳烯、1-苯基辛酮、γ-欖香烯、β-蛇床烯、 1,3-苯二氧、4-甲氧-6-(2-丙烯基)、法尼烯、 1.2-二烯基環(huán)丙烷、十五烷酸、十六烷酸、十八碳二烯酸甲酯、13-二十二烯酸甲酯、十九烷酸甲酯、13-二十二烯酸甲酯等成分；四川平武野生當(dāng)歸中還含有2,4,6-三甲基-1,3-苯二胺、2,4,5-三甲基苯甲醛、1-苯基戊酮、(+)-香樹烯、喇叭烯、β-雪松烯、斯巴醇、2.3-二氫四甲基苯駢吡咯等成分。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，西藏林芝野生當(dāng)歸揮發(fā)油的含量和成分比四川平武的多；而在所有成分中，含量最多的是2-氫正丁烯基苯酞，且四川平武的2-氫正丁烯基苯酞(92.551%)比西藏林芝(70.184%)的多；另外，在本研究中，西藏林芝和四川平武野生當(dāng)歸揮發(fā)油中都未檢測出藁本內(nèi)酯，有文獻(xiàn)曾報道過用水蒸汽蒸餾法提取當(dāng)歸揮發(fā)油會破壞藁本內(nèi)酯的結(jié)構(gòu)，使其分解產(chǎn)生其他物質(zhì)[5-6]；也有研究表明當(dāng)歸揮發(fā)油很不穩(wěn)定，主要成分藁本內(nèi)酯在室溫容易異構(gòu)化[2]；還有研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸屬于短日照植物，較長的日照不利于以藁本內(nèi)酯為主的揮發(fā)性成分含量增加[7]；因此，造成兩地野生當(dāng)歸揮發(fā)油中的成分和含量差異及未檢測出藁本內(nèi)酯這一結(jié)果的原因還有待進(jìn)一步研究。