黃芩有效成分的含量測(cè)定技術(shù)

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黃芩來(lái)源于唇形科植物黃芩的干燥根，是傳統(tǒng)的藥食兼用天然植物，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎之功效。現(xiàn)代研究表明，黃芩中的有效成分主要是黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等。近年來(lái)，科研工作者針對(duì)黃芩中有效成分含量測(cè)定開(kāi)展研究和應(yīng)用，并取得諸多有價(jià)值的研究成果。綜述黃芩有效成分含量測(cè)定研究進(jìn)展，為進(jìn)一步開(kāi)展黃芩相關(guān)研究提供參考。

1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是中藥材有效成分含量測(cè)定的常用方法，具有精密度高、分離效能高等優(yōu)點(diǎn)。李因澤等采用HPLC色譜法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地黃芩中的黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、去甲漢黃芩苷、千層紙素A苷含量。采用Agilent?Zorbax?SB-C18色譜柱（250?mm×4.6?mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度為流動(dòng)相，流速1.0?mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280?nm，柱溫30?℃。黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、去甲漢黃芩苷、千層紙素A苷的線性關(guān)系良好，平均回收率在98.70%～99.17%之間。

2 反相高效液相色譜法

顏梅等采用反相高效液相色譜法測(cè)定黃芩中5種黃酮苷元成分含量。去甲漢黃芩素、黃芩素、漢黃芩素、白楊素、千層紙素A的進(jìn)樣量分別在0.018?0～0.108?0、0.378?0～2.268?0、0.094?5～0.567?0、0.022?5～0.135?0、0.035?4～0.212?4μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系;精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD<3%;加樣回收率分別為98.72%、101.80%、99.25%、98.71%、99.05%。

3 近紅外光譜法

近紅外光譜是一種快速無(wú)損檢測(cè)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于天然藥物檢測(cè)，具有速度快、樣品處理簡(jiǎn)單、對(duì)樣品沒(méi)有污染等特點(diǎn)。

王曉虹等結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)用近紅外光譜法對(duì)黃芩中總黃酮含量進(jìn)行快速、無(wú)損定量分析。采集25份黃芩樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)，按紫外—可視分光光度法測(cè)定各黃芩樣品的總黃酮含量，再建立用樣品近紅外光譜預(yù)測(cè)總黃酮含量的定量分析模型，比較不同預(yù)處理方法及光譜區(qū)間對(duì)模型預(yù)測(cè)精度的影響。確定模型預(yù)測(cè)精度的交叉驗(yàn)證均方根為1.18%，決定系數(shù)（R2）為0.81，殘留預(yù)測(cè)偏差（RPD）為2.34。

成東霞以黃芩苷含量為特征指標(biāo)，探索應(yīng)用近紅外光譜、高效液相色譜鑒定黃芩質(zhì)量。研究結(jié)果表明：“矢量校正+一階導(dǎo)數(shù)預(yù)處理方法”為最優(yōu)處理方法，采用本預(yù)處理方法建模得到最優(yōu)模型，模型的決定系數(shù)（R2），校正標(biāo)準(zhǔn)差（SEC）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）分別為93.67%，1.08，12.00%，使用32個(gè)檢驗(yàn)集進(jìn)行檢驗(yàn)，得到?jīng)Q定系數(shù)（R2），預(yù)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)差（SEP）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）分別為89.07%，1.19，12.46%。用已知含量的黃芩樣品進(jìn)行準(zhǔn)確性檢測(cè)，確定模型可靠準(zhǔn)確。

4 超高效液相色譜法

超高效液相色譜法借助于HPLC的理論及原理，涵蓋小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積、快速檢測(cè)手段等全新技術(shù)，增加分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。與傳統(tǒng)HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，縮短分析時(shí)間，減少溶劑用量。

連中學(xué)等建立UPLC測(cè)定黃芩藥材中9種黃酮類成分含量的方法時(shí)，采用Waters?Acquity?BEH?C18色譜柱（50?mm×2.1?mm，1.7μm），以甲醇（A）-乙睛（B）-0.1%甲酸水溶液（C）為流動(dòng)相，流速0.3?mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為278?nm和325?nm，柱溫30?℃。9種黃酮類化合物在12?min內(nèi)達(dá)到基線分離，線性關(guān)系良好（r≥0.9991）。

5 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)將色譜的高鑒別性能和質(zhì)譜的高分離特點(diǎn)完美結(jié)合，實(shí)現(xiàn)色譜和質(zhì)譜互補(bǔ)，是比較先進(jìn)的現(xiàn)代分析技術(shù)，具有分離能力高、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣和專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)，符合現(xiàn)代藥物分析研究對(duì)高精密度和準(zhǔn)確度分析方法的需求。

謝彤等采用超高效液相-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）的方法，采用Thermo?BDS?Hypersil?C18（2.1?mm×100?mm，2.3?μm）色譜柱進(jìn)行色譜分離，柱溫為40?℃，乙腈（A）和0.1%甲酸水（B）梯度洗脫，流速0.25?mL/min，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的方法進(jìn)行質(zhì)譜掃描。白楊素、黃芩素、芹菜素、木蝴蝶素A、漢黃芩素、黃芩苷、漢黃芩苷、木蝴蝶苷A的定量范圍分別為0.975～62.5，4.875～2?500，0.975～62.5，0.097?5～12.5，

0.048?83～6.25，4.875～2?500，0.488?3～250，0.488?3～250?ng/mL，在該范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;8種指標(biāo)性黃酮成分的回收率（n=6）分別為98.75%，96.44%，101.13%，99.41%，102.26%，98.45%，96.75%，99.42%;檢測(cè)方法的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性良好。

6 紅外光譜三級(jí)鑒別法聯(lián)合高效液相色譜-質(zhì)譜法

IR-TL法可在增大樣品光譜分辨率的基礎(chǔ)上逐級(jí)放大相似光譜之間的差異，實(shí)現(xiàn)對(duì)成分復(fù)雜的樣品的區(qū)分。HPLC-MS法綜合HPLC分離能力和MS分辨能力，其MS檢測(cè)器是一種高靈敏度、高分辨的檢測(cè)器，不需要色譜分離即可準(zhǔn)確定量，適于一些含量較低或者極性相近的成分分析。

趙勝男等研究不同生長(zhǎng)期春秋兩季采收黃芩藥材中有效成分種類及含量的差異，以高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS）分析藥材中6種黃酮類成分（千層紙素A、白楊素、黃芩素、漢黃芩素、黃芩苷、漢黃芩苷）含量的變化。IR-TL分析結(jié)果顯示，不同生長(zhǎng)期黃芩所含黃酮類、苷類、糖類、酯類等成分均有所不同，其中二年生黃芩中的苷類物質(zhì)含量最高、藥材質(zhì)量更穩(wěn)定;不同采收期對(duì)上述指標(biāo)成分含量有較大影響，其中二年生春季采收樣品的整體含量高于同年份秋季采收樣品。

7 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜二極管陣列檢測(cè)法

毛細(xì)管電泳技術(shù)兼有電泳和色譜技術(shù)的雙重優(yōu)點(diǎn)，具有高效、高速、高靈敏度、高自動(dòng)化，以及樣品和試劑耗用量少等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于中藥成分含量分析研究。

韓樂(lè)等建立膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜二極管陣列檢測(cè)法（MEKC-DAD）同時(shí)測(cè)定不同批次黃芩及其炮制品中黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、千層紙素A及芹菜素含量。6個(gè)黃酮的濃度與峰面積的線性關(guān)系良好（r>0.9990）;加樣回收率為96.20%～103.6%。用此法測(cè)定黃芩中6個(gè)黃酮類成分含量，得到滿意結(jié)果。

8 結(jié)語(yǔ)

黃芩中有效成分含量測(cè)定方法有高效液相色譜法、反相高效液相色譜法、近紅外光譜法、超高效液相色譜法、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)、紅外光譜三級(jí)鑒別法聯(lián)合高效液相色譜-質(zhì)譜法和膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜二極管陣列檢測(cè)法等。其中，多種色譜法聯(lián)用效果檢測(cè)速度高、靈敏度高、試劑耗用量少，檢測(cè)效果最佳。

收稿日期：2019-10-26

作者簡(jiǎn)介：樊志強(qiáng)（1986—），男，講師，從事中藥提取及化學(xué)成分研究。

參考文獻(xiàn)

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[2]?王曉虹，朱曉偉.基于近紅外光譜的黃芩總黃酮含量快速無(wú)損檢測(cè)方法研究[J].內(nèi)蒙古教育，2018（16）：32-33.

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[4]?連中學(xué)，劉玉，柴俊雯，等.UPLC法同時(shí)測(cè)定黃芩中9種黃酮類成分的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2017，24（5）：604-606.

[5]?趙勝男，劉素麗，徐楊璐，等.紅外光譜三級(jí)鑒別法聯(lián)合高效液相色譜-質(zhì)譜法研究不同采收期黃芩藥材的質(zhì)量[J].中國(guó)藥房，2019，30（12）：1669-1674.

Research?Progress?on?the?Determination?of?Active?Components

of?Scutellaria?Baicalensis

FAN?Zhiqiang

（Benxi?Chemical?Industry?School，?Benxi?Liaoning?117004，?China）

Abstract：?Methods?for?the?determination?of?active?components?in?scutellaria?scutellaria?baicalensis?include?high?performance?liquid?chromatography，?reversed-phase?high?performance?liquid?chromatography，?near?infrared?spectroscopy，?ultra?high?performance?liquid?chromatography，?ultra?high?performance?liquid?chromatography-tandem?mass?spectrometry，?etc.?This?paper?reviewed?the?research?progress?on?the?determination?of?active?components?in?scutellaria?baicalensis，?in?order?to?provide?references?for?further?studies?on?scutellaria?baicalensis.

Key?words：?scutellaria?baicalensis;?effective?component;?content?determination;?Chromatography