靈芝中有效成分提取方法

任奕

摘要：根據靈芝多糖提取研究進展，綜述熱水提取法、超聲波提取法、微波提取法、超聲輔助酶解提取法、高壓熱水提取法、連續動態逆流提取法等提取方法的原理、特點和工藝條件，為開展靈芝有效成分提取提供借鑒。

關鍵詞：靈芝多糖;提取工藝;熱水;超聲波

中圖分類號：R284.2????文獻標識碼：A????文章編號：1674-1161（2019）06-0047-02

靈芝（Ganoderma?Lucidum?Karst）是孔菌科真菌靈芝的子實體，為我國傳統的藥食兼用的大型真菌，其孢子、菌絲和子實體均可利用，具有祛病延年、滋補強壯的作用?，F代研究表明：靈芝多糖是靈芝屬真菌菌絲體的次生代謝產物，存于靈芝屬真菌的菌絲體和子實體中，具有清除體內自由基、提高機體免疫力、降血糖等功效，是靈芝扶正固體的主要活性成分。根據靈芝多糖提取研究進展，對靈芝多糖的提取工藝進行總結歸納，為靈芝多糖的開發利用提供借鑒和參考。

1 靈芝多糖的提取

1.1 熱水提取法

熱水提取法是提取靈芝多糖傳統方法，提取時間長、能耗大、得率低、活性差。

杜鵬瑤探討熱水提取法提取樹舌靈芝多糖的最佳提取工藝。在單因素試驗的基礎上，運用響應面法優化提取的樹舌靈芝多糖（GASP）各項參數。提取時間、提取溫度、液料比均對樹舌靈芝多糖提取率有顯著影響，順序為提取時間>液料比>提取溫度。最佳工藝條件為：提取溫度77?℃、提取時間138?min、液料比27∶1（m?L∶g），多糖提取率為2.57%±0.05%。

王會賓等以超臨界CO2萃取過靈芝孢子油后的靈芝孢子粉為原料，利用響應面設計試驗優化靈芝孢子多糖的熱水浸提工藝條件。在單因素試驗的基礎上，以多糖提取率為響應值，利用Box-Behnken試驗確定最佳提取工藝：提取溫度91?℃，提取時間3.3?h，液料比15.8∶1?（mL∶g），多糖提取率達3.69%，與理論值相對誤差0.33%。

1.2 超聲破碎輔助法

超聲波輔助提取利用超聲波的空化作用、機械作用和熱效應等加速細胞內有效物質的釋放、擴散和溶解，提取效率高，提取時間短，避免高溫對有效成分的影響。

田淑雨等對超聲破碎輔助提取靈芝多糖工藝進行優化，通過比較靈芝多糖的抗氧化活性，體外篩選最優抗氧化活性部位。用乙醇分級沉淀法獲得靈芝多糖GLP40、GLP60、GLP80，比較其對DPPH、羥自由基（·OH）的清除活性和還原力。響應面優化試驗所得的最佳提取條件為：液料比25∶1（mL/g）、超聲時間60?min、超聲功率760?W，靈芝多糖的提取得率為3.60%，GLP40、GLP60、GLP80多糖比例為45∶29∶26，具有一定的抗氧化活性;其中，GLP80清除DPPH自由基的能力最強，GLP40清除羥自由基能力最強，GLP60還原力最強。

1.3 微波輔助法

微波萃取法被廣泛應用于中草藥有效成分提取，對多糖的提取分離具有良好效果，且對具有顯著生物活性的多糖成分具有選擇性。

賈少杰等以日本靈芝子實體為試材，在單因素試驗的基礎上，采用響應面分析方法對微波輔助法提取靈芝多糖工藝進行優化。微波輔助法最佳工藝為：微波功率374?W，提取時間23min，液料比15∶1?mL/g，浸提次數2次，多糖提取率達到4.62%。

田淑雨等通過熱水浸提法（H-GLP）、超聲清洗輔助提取法（U1-GLP）、超聲破碎提取法（U2-GLP）、微波輔助提取法（M-GLP）、酶輔助提取法（E-GLP）等5種提取方式提取靈芝粗多糖，并用苯酚-硫酸法測定總糖含量、二硝基水楊酸法測定還原糖含量。提取率大小順序為M-GLP>E-GLP>U2-GLP>H-GLP>U1-GLP，其中M-GLP的提取率最高，為3.98%;其多糖含量為46.80%，還原糖含量為5.36%。

1.4 超聲輔助酶解法

超聲輔助酶解法是在利用酶解破壞細胞壁的同時引入超聲提取技術，最大限度地提高靈芝多糖的提取率。

鄭丹婷等以總多糖得率為指標，采用超聲輔助纖維素酶法提取靈芝子實體粉末中的多糖類化合物。在單因素試驗的基礎上，利用Box-Behnken中心組合法得到最優提取工藝條件：超聲提取時間28?min，料液比1∶36，酶解時間68?min，靈芝多糖得率7.57%。

1.5 高壓熱水提取法

高壓熱水提取法利用高壓對細胞的破碎作用，促進熱水從胞內溶出多糖，簡單可行，適用性強，適于大工業生產。

操麗麗等以靈芝子實體超微粉為原料，研究提取溫度、提取時間和料液比在高壓熱水條件下對靈芝多糖提取，以及多糖提取液對DPPH自由基清除率的影響。采用正交試驗優化的工藝條件為：料液比1∶50?g/mL、提取溫度125?℃下提取30?min，一次高壓熱水提取靈芝多糖提取率達4.54%?？寡趸瘜嶒灲Y果表明，靈芝多糖對DPPH自由基有一定的清除能力，且與多糖質量濃度存在一定量效關系。

1.6 連續動態逆流提取法

連續動態逆流提取技術是在多個提取單元之間，通過藥材和溶劑的合理濃度梯度排列和相應的流程配置，結合物料的粒度、提取單元數和提取溫度，以循環組合的方式對物料進行提取。此法具有最大限度轉移藥材中有效成分的優點。

田文妮采用連續動態逆流水提醇沉法提取赤靈芝多糖時，以赤靈芝為原料，以熱水回流提取法為對照，對比多糖提取得率和抗氧化活性。連續動態逆流提取濃度平衡后40?min取樣，赤靈芝多糖得率（23.07%）最高，是對照組的2.26倍。赤靈芝多糖對羥自由基、超氧自由基、DPPH自由基具有很強的清除能力，接近VC的抗氧化能力。當赤靈芝多糖質量濃度為2.5?mg/mL時，對OH、O2-和DPPH清除率分別為75.3%，75.3%，74.3%，比熱水回流提取的赤靈芝多糖提高33.5%，52.4%，8.6%。

1.7 亞臨界水提取法

亞臨界水提取技術是在一定壓力下，將水加熱到100?℃以上臨界溫度374?℃以下，通過調節溫度控制介電常數改變水的極性。此法具有提取時間短、提高率高、能耗低、綠色無毒、后續分離純化方便等優點。

鄧辰辰等通過單因素和正交試驗考察亞臨界水提取靈芝多糖的最佳試驗條件。優選出最佳提取條件為：亞臨界水溫度150?℃，料液比（g/m?L）1∶12，浸提時間為5?min，提取壓力5?MPa，靈芝多糖得率2.15%。與傳統的熱水浸提法比較，亞臨界水提法可明顯縮短提取時間和降低成本，且得率更高。

2 結語

靈芝多糖的提取方法有傳統提取法、超聲波提取法、微波提取法、超聲輔助酶解提取法、高壓熱水提取法、連續動態逆流提取法、亞臨界水提取法等。傳統提取法提取靈芝多糖收率較低，提取液中雜質較多，生產周期較長;超聲波提取、高壓熱水提取等現代提取法提取靈芝多糖時提取率高，提取物純度高，生產周期短，操作簡單。靈芝是一類傳統的藥食兩用的天然植物，具有一定的藥用價值和保健價值，而多糖類成分是靈芝的有效成分。開展靈芝多糖提取工藝研究，對靈芝資源的進一步開發利用具有重要意義。

收稿日期：2019-10-26

作者簡介：任 奕（1985—），女，碩士，講師，從事生物工程及天然藥物化學成分提取純化研究。

參考文獻

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Method?on?Extraction?the?Active?Ingredients

from?Ganoderma?Lucidum

REN?Yi

（Benxi?Chemical?Industry?School，?Benxi?Liaoning?117019，?China）

Abstract：?According?to?the?research?progress?of?polysaccharide?extraction?from?ganoderma?lucidum，?this?paper?summarizes?the?principles，?characteristics?and?technological?conditions?of?hot?water?extraction，?ultrasonic?extraction，?microwave?extraction，?ultrasound-assisted?enzymatic?hydrolysis?extraction，?high?pressure?hot?water?extraction?and?continuous?dynamic?countercurrent?extraction，?in?order?to?provide?references?for?the?extraction?of?active?ingredients?from?ganoderma?lucidum.

Key?words：?ganoderma?lucidum?polysaccharides;?extraction?process;?hot?water;?ultrasonic?wave