肺結(jié)核患者血清OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3的水平變化特點及意義

武艷霞

(鄭州市第六人民醫(yī)院結(jié)核科/河南省傳染病醫(yī)院結(jié)核科，河南 鄭州450002)

流行病學(xué)研究證實，我國2010-2017年每年肺結(jié)核的平均發(fā)病率可達(dá)484～653/1萬人左右[1]。臨床上肺結(jié)核的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊叻喂δ苷系K的發(fā)生，增加了多器官功能衰竭的發(fā)生風(fēng)險[2，3]。

對于肺結(jié)核患者的病情評估具有重要的意義，其能夠指導(dǎo)臨床上抗結(jié)核治療，并可以為停藥時機或者預(yù)防隨訪工作提供參考。血清學(xué)指標(biāo)能夠在肺部感染性疾病的診斷和治療過程中發(fā)揮作用。血清中骨橋蛋白（OPN）不僅能夠參與到鈣磷代謝過程，同時還能夠誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，增加炎癥性信號通路的激活，導(dǎo)致肺部組織的炎癥性損傷[4]；γ-干擾素（IFN-γ）、可溶性白細(xì)胞介素2受體（sIL-2R）的表達(dá)，能夠通過影響到樹突狀細(xì)胞的抗原提呈功能，導(dǎo)致CD4+T淋巴細(xì)胞功能狀態(tài)的改變，影響肺結(jié)核患者的自身免疫狀態(tài)[5]；可溶性T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（sTIM-3）的表達(dá)，能夠通過結(jié)合T淋巴細(xì)胞膜表面的球蛋白，抑制T淋巴細(xì)胞的活化，降低機體的自身免疫功能[6]。為了揭示OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 的表達(dá)與肺結(jié)核的關(guān)系，從而為臨床上肺結(jié)核患者的病情評估提供參考，本次研究選取我院2015年1月至2017年12月收治的90例確診肺結(jié)核患者，探討了OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3的表達(dá)及其與患者病情的相關(guān)性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2015年1月至2017年12月收治的90例確診肺結(jié)核患者（肺結(jié)核組）、同期的90例健康體檢對象作為對照組。

肺結(jié)核組，年齡21～75歲，平均49.6±17.2歲，男 56 例、女 34 例，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）21.2±2.9kg/m2；根據(jù)X線檢測結(jié)果：肺部有空洞患者30例、無空洞患者60例；經(jīng)痰涂片檢查：陽性41例、陰性49例。對照組，年齡19～75歲，平均47.6±18.2歲，男 51 例、女 35 例，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）21.5±3.1kg/m2。兩組研究對象的年齡、性別、BMI比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴肺結(jié)核的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會 《肺結(jié)核的診斷和治療指南（2015）版》中的標(biāo)準(zhǔn)；⑵患者年齡 19～75 歲；⑶患者經(jīng)PPD試驗、痰涂片檢查、胸片等確診；⑷對照組為健康體檢對象；⑸本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴肺部惡性腫瘤；⑵慢阻肺、哮喘、支氣管擴張或其他類型的感染性疾病；⑶精神、認(rèn)知功能障礙患者；⑷嚴(yán)重的糖尿病、高血壓；⑸近2周使用抗生素、免疫調(diào)節(jié)劑、糖皮質(zhì)激素；⑹甲狀腺功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病。

1.2 檢測方法 采用ELISA檢測血清中OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3濃度：采集患者的靜脈血3ml，自然凝固后，采集上清液，，加入 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3單抗，標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3會與單抗結(jié)合，PBS液體洗滌5min。按照1：500的比例加入羊標(biāo)志的一抗5ml，4℃放置過夜，PBS緩沖液洗滌3次，每次5min，加入鼠來源的二抗 （1：1000）2ml， 室溫放置 2h，PBS液體洗滌5min。加入顯色底物，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色，加終止液變黃。在450nm處測 OD 值，OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 檢測試劑盒購自羅氏公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計量數(shù)據(jù)表述采用（）表示，正態(tài)分布檢驗方法采用pp圖和qq圖；計量資料兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；P值＜0.05說明差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，統(tǒng)計軟件采用SPSS 16.0版本。

2 結(jié)果

2.1 肺結(jié)核組和對照組的血清 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3水平比較 肺結(jié)核組患者的血清OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3水平均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；見表 1。

表1 肺結(jié)核組和對照組的血清 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 水平比較（）

表1 肺結(jié)核組和對照組的血清 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 水平比較（）

組別 n OPN（pg/ml）IFN-γ（pg/ml）sIL-2R（ng/ml）sTIM-3（ng/ml）肺結(jié)核組對照組t值P值90 90 663.9±282.6 356.4±130.2 9.376 0.000 248.9±55.7 148.6±24.9 15.596 0.000 349.8±88.1 220.4±56.7 11.717 0.000 14.30±4.13 7.68±2.95 12.374 0.000

2.2 空洞型與非空洞型肺結(jié)核患者血清OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3水平比較 空洞型肺結(jié)核組患者的血清OPN、IsTIM-3水平均高于非空洞型組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；空洞型與非空洞型肺結(jié)核患者的IFN-γ、sIL-2R水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；見表 2。

2.3 痰涂片陽性與陰性肺結(jié)核患者血清OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3水平比較 痰涂片陽性的肺結(jié)核組患者的血清 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3水平均高于痰涂片陰性的肺結(jié)核患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；見表 3。

表2 空洞型與非空洞型肺結(jié)核患者血清 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 水平比較（）

表2 空洞型與非空洞型肺結(jié)核患者血清 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 水平比較（）

胸片結(jié)果 n OPN（pg/ml）IFN-γ（pg/ml）sIL-2R（ng/ml）sTIM-3（ng/ml）空洞非空洞t值P值30 60 748.1±210.7 622.6±270.5 2.224 0.029 258.2±52.6 242.1±54.8 1.331 0.187 355.1±83.2 347.2±86.8 0.413 0.681 17.26±3.92 12.58±3.38 5.868 0.000

表3 痰涂片陽性與陰性肺結(jié)核患者血清 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 水平比較（）

表3 痰涂片陽性與陰性肺結(jié)核患者血清 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 水平比較（）

痰涂片結(jié)果 n OPN（pg/ml）IFN-γ（pg/ml）sIL-2R（ng/ml）sTIM-3（ng/ml）陽性陰性t值P值41 49 741.2±257.8 599.5±219.0 2.820 0.006 294.5±53.1 192.7±52.6 9.104 0.000 389.1±83.8 311.6±75.3 4.619 0.000 17.11±3.62 11.05±3.98 7.494 0.000

3 討論

結(jié)核桿菌的感染或者自身免疫力的下降，均能夠增加肺結(jié)核患者的病情進(jìn)展，導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)不良臨床結(jié)局的發(fā)生[7]。特別是在合并有自身T淋巴細(xì)胞功能紊亂的患者中，肺結(jié)核的發(fā)病率和其他臟器組織累及的風(fēng)險可進(jìn)一步的上升[8，9]。現(xiàn)階段臨床上缺乏對于肺結(jié)核患者病情評估的可靠性指標(biāo)，雖然胸部CT檢查能夠在肺結(jié)核的診療和治療效果評估過程中發(fā)揮作用，但一項囊括了227例樣本量的肺結(jié)核影像學(xué)檢查分析研究可見，CT檢查評估肺結(jié)核的病情仍然存在一定的局限，其評估患者病情轉(zhuǎn)歸的一致性率仍然不足55%[10]。血清學(xué)指標(biāo)的探討，能夠為肺結(jié)核患者的治療預(yù)后或者病情評估提供依據(jù)。

OPN可通過多種病理機制促進(jìn)肺部組織局部炎癥性因子的激活，增加了炎癥信號通路MAPK的上調(diào)程度，加劇肺部組織的損傷程度；IFN-γ不僅能夠參與到肺部的炎癥性損傷過程，同時還能夠調(diào)控T淋巴細(xì)胞的活性，抑制樹突狀T淋巴細(xì)胞的抗原提呈功能，導(dǎo)致CD4+T淋巴細(xì)胞的免疫功能相對抑制[11]；sIL-2R作為炎癥性相關(guān)指標(biāo)，其能夠通過結(jié)合IL-2，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的富集，增加其釋放中性粒細(xì)胞酶，促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞的凋亡和壞死[12]；sTIM-3能夠調(diào)控自然殺傷性T淋巴細(xì)胞的活性，降低其對于結(jié)核桿菌的吞噬和清除能力。同時基礎(chǔ)方面的研究還認(rèn)為，sTIM-3的上升能夠抑制免疫球蛋白的活性，降低其對于結(jié)核桿菌的毒性殺傷作用。部分研究者探討了OPN或者IFN-γ的表達(dá)與肺結(jié)核的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)OPN或者IFN-γ的表達(dá)可明顯上升[11]，但缺乏對于相關(guān)指標(biāo)與不同病理類型或者痰培養(yǎng)結(jié)果肺結(jié)核的相關(guān)性研究。

本次研究對于肺結(jié)核患者體內(nèi)的血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在肺結(jié)核患者中，OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3的表達(dá)濃度明顯上升，高于健康對照人群，差異較為明顯，提示了 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3的高表達(dá)，均能夠參與到肺結(jié)核的發(fā)生發(fā)展過程中。通過匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 的高表達(dá)主要通過影響到下列幾個方面，進(jìn)而促進(jìn)肺結(jié)核的發(fā)生[13，14]：⑴OPN的上升能夠?qū)е麦w內(nèi)單核細(xì)胞或者巨噬細(xì)胞的激活，增加了其對于肺泡上皮細(xì)胞的損傷；⑵IFN-γ、sIL-2R的表達(dá)上升，能夠?qū)е耇淋巴細(xì)胞的應(yīng)答水平的下降，抑制了機體對于結(jié)核桿菌的清除能力；⑶sTIM-3的上升，能夠?qū)е伦匀粴訲淋巴細(xì)胞的活性下降，導(dǎo)致細(xì)胞免疫的功能不足。陳驥等[15]研究者也發(fā)現(xiàn)，在肺結(jié)核患者中，OPN的表達(dá)濃度可平均上升30%以上，特別是在合并有明顯的肺外結(jié)核的患者中，OPN的表達(dá)上升更為明顯。在空洞性肺結(jié)核患者中，可以發(fā)現(xiàn)OPN、sTIM-3的表達(dá)上升更為明顯，提示了二者可能在促進(jìn)病灶組織的溶解或者空洞形成方面發(fā)揮了重要的作用，這主要由于OPN、sTIM-3的表達(dá)上升，能夠進(jìn)一步促進(jìn)病灶組織中心區(qū)域細(xì)胞干酪樣壞死的形成和中心區(qū)域肺組織的溶解吸收，進(jìn)而促進(jìn)了肺結(jié)核空洞的形成。但部分研究者認(rèn)為，OPN的表達(dá)與肺結(jié)核患者的空洞形成并無明顯的關(guān)系[4]，不同的研究之間存在一定的差異，考慮可能與OPN檢測的時機或者空洞型肺結(jié)核患者的病情差別較大有關(guān)。痰涂片陽性的肺結(jié)核組患者，其傳染性較強，結(jié)核桿菌的擴增傾向較為明顯，其體內(nèi)的OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 均明顯高于痰涂片陰性的患者，差異較為明顯，提示了相關(guān)指標(biāo)還與結(jié)核桿菌的感染狀態(tài)有關(guān)，能夠在一定程度上評估肺結(jié)核的傳播風(fēng)險。

綜上所述，在肺結(jié)核患者中，OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3的表達(dá)明顯上升，同時在空洞型肺結(jié)核患者中，OPN、sTIM-3的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的上升，另外 OPN、IFN-γ、sIL-2R、sTIM-3 的表達(dá)與肺結(jié)核的傳染狀態(tài)密切相關(guān)。