支氣管哮喘患兒血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α表達關系及意義

范改煥，禹香菊，趙憲文

(鄭州市第九人民醫院，河南 鄭州 450053)

支氣管哮喘（bronchial asthma）又簡稱為哮喘，是臨床呼吸科常見的由多種細胞或細胞成分同時參與的呼吸道慢性炎癥疾病，當患者接觸到刺激性因素時，可呈現出氣促、喘息、劇烈咳嗽、胸悶等氣道阻塞的癥狀[1，2]。隨著環境污染加重與全球氣候變化，臨床上支氣管哮喘病例明顯增多，而支氣管哮喘最常見于學齡期兒童，而研究顯示IgE分泌增多是導致哮喘的誘因之一[3]，現筆者探究支氣管哮喘患兒血清IgE和痰液基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）、TNF-α表達關系，旨在探討通過檢測患兒痰液MMP-9、TNF-α表達情況動態監測患兒病情變化情況的臨床應用可能。現報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月-2017年8月我院收治確診為支氣管哮喘患兒60例，所有患兒均符合中華醫學會呼吸病學分會哮喘學組.支氣管哮喘防治指南(2016年版)診斷標準[4]，并根據中華醫學會兒科學分會呼吸學組兒童支氣管哮喘診斷與防治指南[5]按照不同發病程度分為哮喘發作組與哮喘靜息組各30例，入選標準：⑴2～8歲；⑵無免疫性疾病；⑶無心肝腎腦等器官嚴重疾病；⑷患兒家屬均簽署知情同意書。排除標準：⑴除支氣管哮喘外，合并患有其他肺部疾病或肺部感染疾病；⑵入組前1周內服用其他影響檢測質變的藥物；⑶無法配合本實驗采樣的患兒。其中哮喘發作組患兒男 15 例，女 15 例，平均年齡（5.40±1.26）歲；哮喘靜息組患兒男16例，女14例，平均年齡（5.23±1.47）歲。本實驗經本院醫學倫理委員會同意。

1.2 方法

1.2.1 血液采集與IgE檢測方法 所有患兒均于入院時采取5ml晨起空腹靜脈血，3000r/min高速離心后取上清液，采用ImmunoCAP100 PhadiaAB Sweden分析儀分析患兒血清IgE水平并記錄。

1.2.2 患兒痰液MMP-9、TNF-α表達情況檢測方法 哮喘發作組患兒于入院后喘息發作24h內進行誘導痰，哮喘靜息組患兒則在臨床癥狀消失且未見哮鳴音消失后48h進行誘導痰操作，所得痰液中挑取肉眼可見粘液的痰栓，收集至無菌器皿中，加入2倍痰量的1%二硫蘇糖醇（DTT）渦旋震蕩混勻后進行水浴孵育，孵育結束后采用2000r/min離心，取上清液，采用ELISA法檢測其中的MMP-9、TNF-α 表達情況，其中 MMP-9、TNF-α 相關ELISA試劑盒均購自深圳晶美生物工程有限公司。

1.3 統計學方法 采用SPSS 22.0進行數據統計學分析，其中計量資料以均數±標準差的形式表示并采用兩獨立樣本均數t檢驗進行組間比較，采用Spearman相關分析法分析支氣管哮喘患兒痰液MMP-9、TNF-α表達水平與血清IgE水平的關系，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α表達情況比較 哮喘發作組患兒血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α表達水平明顯高于哮喘靜息組患兒的（P＜0.05），結果見表 1。

表1 兩組患者血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α 表達情況比較（）

表1 兩組患者血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α 表達情況比較（）

組別 例數 血清IgE水平(KU/L)MMP-9（ng/ml）TNF-α（ng/ml）哮喘發作組哮喘靜息組T值P值30 30 231.10±88.61 103.44±32.18 7.417 0.000 372.14±78.09 135.55±61.32 13.051 0.000 38.92±8.41 21.06±6.17 9.379 0.000

2.2 分析支氣管哮喘患兒血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α表達水平的關系 采用Spearman相關性分析結果顯示，支氣管哮喘患兒痰液MMP-9、TNF-α表達水平與血清IgE水平呈正相關關系（r=0.457，r=0.671，P＜0.05）。

3 討論

研究發現支氣管哮喘發病時主要的病理改變特征包括氣道炎癥和氣道重構，是一種多種細胞因子參與的慢性氣道炎癥性疾病，研究發現支氣管哮喘患兒多有特應癥背景史，機體在接觸過各種自然過敏原后，機體免疫系統產生過敏原特異性IgE[6，7]，當機體再次接觸到過敏原時，哮喘患者氣道黏膜上的B淋巴細胞產生敏原特異性IgE并與DC細胞表面特異性受體結合激活患者氣道黏膜上的嗜酸性粒細胞、肥大細胞等釋放炎癥活性介質，進一步引發支氣管血管充血、支氣管痙攣、組織炎癥等一系列反應，導致哮喘急性發作[8，9]。歐陽長法等[10]通過比較支氣管哮喘患者與健康受試者之間總lgE及免疫分子表達的區別，發現支氣管哮喘患者系統變應原過篩總陽性率94.7%，其中吸入變應原陽性率70.8%，食物變應原陽性率29.2%，吸入變應原的致敏性較食物變應原強，且總lgE與血清IL-13水平呈正相關關系，總lgE與血清IL-2、IFN-γ水平呈負相關關系。本實驗研究中，哮喘發作組患兒血清中IgE水平明顯高于哮喘靜息組患兒的，與上述觀點一致。

但通過檢測血清中IgE水平對患兒病情及發作程度進行動態監測是不實際的，多次進行抽血檢驗不僅對患兒身體傷害，也讓家屬產生抵觸心理，現筆者通過探究患兒痰液中MMP-9、TNF-α與患兒血清中IgE水平的關系，以期探尋一種更為有效簡便動態監測患兒病情的途徑，本實驗結果顯示，哮喘發作組患兒痰液MMP-9、TNF-α表達水平明顯高于哮喘靜息組患兒的，且采用Spearman相關性分析結果顯示，支氣管哮喘患兒痰液MMP-9、TNF-α表達水平與血清IgE水平呈正相關關系，說明通過監測患兒痰液MMP-9、TNF-α表達水平亦可有效提示患兒病情程度，其中MMP-9是屬于基質金屬蛋白酶家屬中的Ⅳ型膠原酶，主要有血管內皮細胞或中性粒細胞、巨噬細胞合成分泌[11]，在細胞外基質的降解重建過程中起作用，哮喘患者發病過程中，炎癥反應被激發后促進了MMP-9的合成與分泌，導致氣道上細胞外基質被過度降解，導致氣道重塑[12，13]。Barbaro MP 等[14]通過測量60名哮喘患者和20名健康對照者的呼氣中MMP-9，pH和NO水平以及痰中炎性細胞，發現哮喘受試者呼出的MMP-9增加，且嚴重哮喘患者呼出氣MMP-9濃度明顯高于輕度至中度哮喘患者，提示了測量哮喘患者呼出氣中MMP-9識別哮喘的嚴重階段的可行性，但由于本院器材有限，故選取患兒痰液中MMP-9水平作為觀察指標之一。TNF-α是一種多細胞合成分泌并具有廣泛生物活性的前炎癥因子之一[15]，哮喘發生時可促進炎性介質的釋放，并加重哮喘病情，Hardyman MA等[16]研究發現TNF-α降低跨上皮電阻并增加熒光葡聚糖通透性，導致緊密連接處occludin和claudin的丟失，并增加內源性IL-6，IL-1β，IL-8和促MMP-9釋放，導致支氣管上皮細胞屏障功能障礙。故筆者將這兩者作為觀察指標，研究表明支氣管哮喘患兒急性發作期血清IgE和痰液MMP-9、TNF-α表達水平明顯升高，故檢測患兒痰液中MMP-9、TNF-α水平可作為一種更為有效簡便動態監測患兒病情的途徑。