日立7600-210檢測系統對血糖檢測的性能驗證

常 凡，侯永彬，黃利君，刁奇志

(重慶醫科大學附屬永川醫院檢驗科，重慶 402160)

空腹血糖(GLU)是診斷糖尿病、低血糖及監測糖尿病療效的重要指標，因此，測量結果是否精準對于臨床的診療至關重要。根據《醫療機構臨床實驗室管理辦法》[1]和《醫學實驗室認可準則》的要求[2]，臨床實驗室在檢測系統用于測量之前必須對檢測系統的主要分析性能進行驗證或確認，擬證實其能夠滿足預期用途。目前，許多實驗室在進行性能驗證時，僅對檢測系統的不精密度、不正確度、線性范圍進行了驗證，對于試劑與校準品為同一品牌，與設備品牌不一致的檢測系統(“ABB”模式)及測量低值具有臨床意義的項目，這往往是不夠的，建議增加檢出限、分析干擾及臨床可報告范圍的建立或驗證。本文以本科實驗室檢測系統測量血糖為例，對以上性能指標進行獨立驗證。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 儀器：日立7600-210全自動生化分析儀。試劑：校準品由四川邁克生物科技有限公司提供(批號：0717031)，高、低濃度質控品由RANDOX公司提供(批號：高濃度913UE、低濃度1180UN)。本科不同血糖濃度患者血液標本。

1.2方法

1.2.1按試劑說明書提供的校準周期進行校準，每分析批均檢測室內質控，質控在控時，數據有效，否則，重新檢測。

1.2.2精密度驗證 根據CLSI EP15-A3文件[3]，選取2份不同濃度的標本，每天重復檢測4次，連續檢測5 d，收集檢測結果，計算批內精密度和日間精密度。評價標準：批內精密度<1/4 CLIA′88允許總誤差(TEa)、日間精密度<1/3 CLIA′88 TEa。

1.2.3正確度驗證 以一個完整周期的原衛生部臨檢中心室間質評的合格率(2017年3、6、9月)作為評價依據。判斷標準：室間質評合格率≥80%，正確度可以接受。

1.2.4可報告范圍驗證

1.2.4.1線性范圍 收集小于或等于廠商聲明線性范圍中下限濃度的標本(L)及大于或等于上限濃度的標本(H)，將H和L樣品按:5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H配制混合，形成系列梯度濃度樣品。每個濃度水平重復測定2次,計算測定均值。評價標準：以X表示各樣品的理論濃度值，以Y表示各樣品的實測值，得出散點圖。若所有實驗點呈明顯直線趨勢，用直線回歸對數據進行統計，得直線回歸方程Y=bX+a，對截距a與0進行差異性檢驗：t=|a-0|/s,s為截距a的標準差。評價標準：r2>0.95，斜率b在1.00±0.03范圍內，t

1.2.4.2臨床可報告范圍 選取接近項目測量范圍上限的標本做1∶2、1∶4、1∶5、1∶8、1∶10、1∶19稀釋得到系列濃度標本,根據稀釋倍數計算預期值(理論值);每份標本重復測定3次,計算測定均值。評價標準：測定均值與預期值的偏差≤1/2 TEa的最大稀釋倍數乘以稀釋前的濃度即為臨床可報告范圍。

1.2.5檢測限 因廠商未給出檢出限的聲明，因此參照CLSI EP17-A2文件及前期試驗方案[4-5]建立檢出限：(1)空白限(LoB)的建立：使用去離子水作為空白樣本，每天檢測12個空白樣本1次，連續測定5 d，共計60個檢測數據；(2)檢出限(LoD)的建立：根據LoB值，用低濃度患者混合血漿配制5個濃度范圍在1～5倍LoB的樣本，分裝于12只EP管中，-20 ℃保存。每日測量2批，連續6 d，獲得60個數據；(3)定量檢出限(LoQ)的建立：依據室間質量評價的允許誤差，GLU測量的TEa為10%，在不考慮分析偏差的條件下，TEa=2CV，CV為變異系數，如果低濃度樣本的CV≤1/2 TEa，則LoQ=LoD；反之,則需要繼續配制更高倍數LoB濃度的樣本進行重復檢測，CV剛好小于1/2 TEa時的濃度即為LoQ值。檢測結果使用SPSS24.0統計軟件檢驗是否符合正態分布，再選擇參數或者非參數方法進行計算[6]。

1.2.6干擾實驗 根據廠商聲明：血紅蛋白(Hb)、維生素C(VitC)、膽紅素(BIL)、三酰甘油(TG)干擾物濃度分別不大于5.0 g/L、0.5 g/L、700 μmol/L、20 mmol/L。將分析樣本分為2份，一份樣本根據廠商聲明的最大干擾物濃度加入相應量的干擾物質作為實驗樣本，另一份樣本加入不含干擾物的溶劑作為對照樣本，重復測量2次，取均值計算二者的偏差，如偏差≤1/2 CLIA′88 TEa(10%)，則廠商的聲明得到驗證。

2 結 果

2.1精密度評價 GLU濃度1批內CV及日間CV分別為0.46%和0.69%，濃度2批內CV及日間CV分別為0.59%和0.72%，2個濃度的批內精密度均小于1/4 CLIA′88 TEa(2.50%)，日間精密度均小于1/3 CLIA′88 TEa(3.30%)，且均小于廠商聲明的批內精密度(3.70%)和日間精密度(4.20%)。

2.2正確度評價 對2017年原衛生部室間質評一個完整周期(3、6、9月)的GLU回報成績數據進行評價，結果見表1，3次室間質評合格率均達100.00%，因此，檢測系統的正確度可以接受。

表1 正確度驗證結果

2.3可報告范圍驗證 線性范圍驗證結果顯示，GLU檢測的回歸方程為Y=0.984X+0.152，r2=0.999，t=1.29(*t

2.4檢測限

2.4.1LoB 空白樣本檢測結果經檢驗呈非正態分布，故使用非參數方法[6]估計第95百分位數(PctB)的值，LoB=[NB(ρ/100)+0.5]=[60×(95/100+0.5)]=57.5位置的結果，即第57個和第58個結果數據的均值。第57和第58位置均為0.01 mmol/L，故LoB=0.01 mmol/L。

2.4.2LoD 低濃度樣本檢測結果經統計軟件檢驗呈非正態分布，使用非參數方法估計LoD，即LoD=LoB+DSβ，DSβ是低濃度樣本測定值中位數的值與低濃度樣本的第5百分位數值的間距，低濃度樣本中位數為0.04，第5百分位數值=(60×0.05+0.5)=第3.5秩號的值=0.02，DSβ=0.04-0.02=0.02，故LoD=0.03 mmol/L。

表2 己糖激酶法檢測GLU低濃度樣本的日間CV

2.5干擾實驗 Hb、VitC、BIL、TG 4種干擾物質在廠商聲明的干擾濃度所引起的結果偏差分別為2.21%、0.44%、2.20%、7.78%，均小于10.00%(1/2 TEa)，誤差可以接受，廠商聲明得到驗證，見表3。

表3 實驗樣本與對照樣本均值偏差數據表

3 討 論

檢測系統是由檢測設備、試劑、校準品組成的一個完整系統，分為“AAA”“ABB”和“ABC” 3種情形，其中“AAA”是檢測設備、試劑、校準品均為同一個生產廠家，是嚴格意義上的配套系統；“ABB”是試劑、校準品為同一個生產廠家，而檢測設備來自不同生產廠家，但試劑及校準品聲明適用于該檢測設備，日常工作中常把其當成配套系統對待；而“ABC”屬于檢測設備、試劑、校準品均來源于不同生產廠家，屬于非配套系統。配套系統性能驗證應該包括不精密度、不正確度及可報告范圍，而非配套系統性能驗證指標應包括測量正確度、精密度、不確定度、抗干擾能力、LoD和LoQ、測量區間、生物參考區間。

雖然“ABB”常被當做配套系統對待，但嚴格意義上，它并不屬于配套系統，因此，在性能驗證方面，常建議除了驗證配套系統的3個參數外，還應對系統的抗干擾能力、LoD及LoQ進行驗證，特別是對于低值有臨床意義的項目尤為重要。本研究的檢測系統屬于“ABB”，且血糖低值對于診斷低血糖及療效評價具有重大臨床意義，因此，除了驗證配套系統性能參數外，本研究還對抗干擾能力、LoD及LoQ進行了驗證或建立。

在性能指標中，精密度反映的是操作人員變化、儀器日間變化及實驗室環境變化等導致的方法性能的改變[7]，精密度越高，重復性越好；正確度表示測量值與約定真值的一致程度。本研究檢測系統的批內及日間不精密度分別小于1/4 CLIA′88 TEa和1/3 CLIA′88 TEa，2017年原衛生部室間質評一個完整周期的合格率均為100.00%，因此，該檢測系統的不精密度及正確度可以接受。據CNAS-CL38應用說明要求[8]：非配套分析系統應采用有證參考物質、正確度控制品等進行正確度驗證。如上述方式無法實現，可通過參加適宜的能力驗證或者室間質評，用最近一個完整周期內的成績合格率來證明實驗室檢測結果的可信度。可報告范圍驗證包括線性范圍(測量區間)和臨床可報告范圍驗證。臨床可報告范圍為樣本通過濃縮或稀釋后，在測量誤差可接受的情況下，能夠報告的最大測量范圍。一些實驗室在性能驗證中只對線性范圍進行驗證，卻忽略了臨床可報告范圍的驗證[9]。本研究中選取的高值或低值標本濃度范圍大于廠商聲明的線性范圍，驗證所得的線性范圍大于廠商聲明的范圍，廠商聲明的線性范圍全部得到驗證。因廠商的血糖試劑說明書中未對LoQ作出聲明，因此，本研究根據CLSI EP17-A2文件程序，結合前期研究結果[10-13]，建立了該檢測系統檢測GLU的LoQ為0.08 mmol/L，遠低于3.89 mmol/L的血糖參考范圍下限，符合實驗室診斷低血糖的預期用途，可以接受。抗干擾能力驗證結果表明在廠商聲明的Hb、VitC、BIL、TG 4種干擾物最大干擾濃度處，所引起的測量偏差均小于1/2 TEa(10.00%)，廠商聲明的抗干擾能力可以接受。但TG所引起的偏差較接近可允許誤差臨界值，提示應警惕乳糜樣本對檢測結果的干擾。雖有研究證明采用超高速離心消除乳糜微粒的干擾，但分離后的血清對某些項目的檢測仍存在一定影響[14]。因此，對于乳糜標本，建議實驗室拒收，并要求臨床重采樣本送檢。

4 結 論

日立7600-210檢測系統廠商聲明的性能參數在本實驗室均得到了復現且可以接受，能夠滿足臨床檢驗的預期用途。對于“ABB”這種嚴格意義上的非配套檢測系統模式及測量結果具有臨床意義的項目的性能驗證除包含精密度、正確度、可報告范圍的驗證外，還需要對檢測限及抗干擾能力進行建立或驗證。