成都地區β珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶合并妊娠患者的基因型及表現型分析

王 慧，李 貝，肖雪蓮，童 聞，韓 笑，馬 健

(四川錦欣婦女兒童醫院檢驗科,四川成都 610000)

β珠蛋白生成障礙性貧血(原名地中海貧血，簡稱地貧)是世界上最常見的單基因遺傳性疾病之一，是由于第11號染色體的β珠蛋白基因簇發生缺失或點突變導致血紅蛋白鏈合成缺失或不足，從而引起的以貧血為主要表現的溶血性疾病。目前世界上已發現超過200種β珠蛋白基因變異，國內已報道的有46種突變型和5種缺失型。β地貧表型變化的嚴重程度與其β基因型相關，根據表型不同分為β貧血基因攜帶者、中間型和重型。重型β地貧的溶血和無效造血目前尚無確切有效的、普及的根治方法，患者只能依賴規律輸血和應用鐵螯合劑維持生命，如不治療多會在青少年期死亡。造血干細胞移植雖為根治的主要方法，但手術要求高，配型難，費用巨大，給患者家庭及社會均帶來沉重負擔。面對這一世界公認的公共衛生問題，目前有效預防β地貧的方法是通過產前篩查，對篩查高風險的胎兒進行產前診斷，從而阻止重癥胎兒的出生。β地貧高發于地中海沿岸地區及東南亞一帶，我國地貧主要集中在兩廣、海南、福建及云貴川等南方地區[1-4]。四川成都地區作為地貧高發地，人群中β地貧基因攜帶率雖高，但流行病學調查、產前篩查及產前診斷工作才開始在基層普及。為了了解四川成都地區β地貧合并妊娠患者的表型與基因型特點，本文對2016年3月至2017年6月來本院建檔并確診為β地貧的孕婦進行研究分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年3月至2017年6月來本院建檔并確診為β地貧的孕婦作為研究對象，年齡(28.0±4.5)歲，孕8～15周，均為漢族人。所有研究對象能自主表達意愿，并簽署相關知情同意書，排除缺鐵性貧血及其他貧血疾病、嚴重器官疾病及嚴重精神性疾病。

1.2方法

1.2.1血常規分析 抽取受試者外周靜脈血4 mL[乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝]待檢。所有標本在采集后12 h內用邁瑞BC-6900全自動血細胞分析儀進行血常規檢測，嚴格按照說明書操作。

1.2.2堿性血紅蛋白電泳 所有標本在采集后24 h內用海倫娜SPIFE3000進行堿性血紅蛋白電泳檢測，嚴格按照說明書操作。

1.2.3地貧基因分析 所有標本在采集后24 h內用β地貧基因檢測試劑盒(亞能生物技術有限公司)進行反向斑點雜交法基因檢測分析17種常見β地貧基因[CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654、β EM、TATAbox-28、CD71-72、CD43、TATAbox-29、CD27-28、CAP+40-+43(以下簡寫為CAPM)、IVS-Ⅰ-1、CD31、TATAbox-32、TATAbox-30、CD14-15、Int和IVS-Ⅰ-5]，所有標本嚴格按照說明書操作。

2 結 果

2.1320例患者各基因型構成情況 320例陽性標本中有306例單獨β基因雜合突變和14例合并α地貧的β突變，分別分析如下。

2.1.1單獨β基因雜合突變型構成情況 306例單獨β基因雜合突變共包括10種突變類型，其中，占前3位的突變分別為CD17(101例，占33.01%)，CD41-42(74例，占24.18%)，IVS-Ⅱ-654(68例，占22.22%)，前3種共占突變的79.41%；前6種突變(CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654、β EM、TATAbox-28、CD71-72)占突變的95.42%。按基因型分成CAPM組、β EM組(簡寫為E組)、TATAbox-29組(簡寫為-29組)、TATAbox-28組(簡寫為-28組)、CD27-28組(簡寫為27-28組)、IVS-Ⅱ-654組(簡寫為654組)、CD41-42組(簡寫為41-42組)， CD43組(簡寫為43組)、CD17組(簡寫為17組)和CD71-72組(簡寫為71-72組)，共10個組。見圖1。

圖1 單獨β基因雜合突變型構成情況

2.1.2合并α地貧的β突變型構成情況 14例合并α地貧的β突變中，有6種不同組合，分成6組，見圖2。

圖2 合并α地貧的β突變型構成情況

2.2各組堿性血紅蛋白(Hb)電泳結果的比較

2.2.1β基因雜合突變異常帶與A2值分析 在306例β基因雜合突變標本中，A2異常者為306例，其中A2值大于參考值上限(3.50%)的為284例(占92.8%)，A2值小于參考值下限(2.50%)的為1例(占0.3%)，未測得A2值的21例(占6.9%)。值得注意的是，未測得A2值的21例標本突變類型均為β EM，由于其出現異常帶且異常帶的位置與A2值位置太靠近，用本實驗室現有方法無法區分，因此無法測得A2值，見表1。根據數據分析，E組均發生異常條帶，此外，17組、41-42組、65組4、-28組、27-28組也發生異常條帶表型。

2.2.2β基因合并α基因突變型A2值 14例合并α地貧的β突變標本中，A2異常者為14例，其中A2值大于參考值上限(3.50%)的為13例(占92.9%)，A2值正常(2.50%～3.50%)的為1例(占7.1%)，均無異常條帶。見表2。

2.3各組血常規參數比較

2.3.1β基因雜合突變標本平均紅細胞體積(MCV)分析 E組的MCV顯著高于除CAPM外的其他組，-29組、-28組MCV顯著高于654組、41-42組、43組、17組、71-72組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見圖3。

2.3.2β基因雜合突變標本平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)分析 E組及-28組的MCH顯著高于除CAPM外的其他組，-29組MCH顯著高于43組和71-72組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見圖4。

表1 β基因雜合突變異常帶與A2值分析

注：-表示因技術原因無法測出

表2 β基因合并α基因突變型A2值

注：與E組比較，*P<0.05;與-29組、-28組比較，#P<0.05

圖3 β基因雜合突變標本MCV分析

注：與E組、-28組比較，*P<0.05;與-29組比較，#P<0.05

圖4 β基因雜合突變標本MCH分析

2.3.3β基因雜合突變標本平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)分析 E組MCHC顯著高于-28組、654組、41-42組、43組、17組及71-72組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見圖5。

注：與E組比較，*P<0.05

圖5 β基因雜合突變標本MCHC分析

2.3.4β基因雜合突變標本Hb分析 E組、-29組、-28組的Hb顯著高于654組、41-42組、17組及71-72組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見圖6。

注：與E組、-29組、-28組比較，*P<0.05

圖6 β基因雜合突變標本Hb分析

2.3.5β基因雜合突變標本其他情況分析 在306例β基因雜合突變標本中，僅發現1例CAPM型，MCV為90.2 fL，MCH為29.4 pg，MCHC為326 g/L，Hb為122 g/L，A2為2.41%。該樣本無常規β地貧的小細胞低色素性貧血的血液學表現，在初篩的時候容易漏診，值得注意。且A2的值不升高，與其他β地貧雜合突變明顯升高不同，需要進一步了解原因。

2.3.614例合并α地貧的β突變標本其他情況分析 14例合并α地貧的β突變標本中，雖有6種不同組合，但由于標本數量較少，統計分析困難，以各項血常規指標區間分析：MCV 67.8～76.4 fL，MCH 21.2～24.4 pg，MCHC 307～326 g/L，Hb 94～119 g/L。該組標本均表現出血常規的小細胞低色素性，但貧血情況不明顯，在初篩的時應注意。

3 討 論

地貧是臨床常見的遺傳性溶血性貧血，世界人口攜帶率約為1.5%，每年有20萬以上的新生兒攜帶此基因出生。據報道，我國南方地區β地貧的平均攜帶率為1.00%～7.00%，而廣西地區高達6.43%，四川地區攜帶率2.18%，各民族間β攜帶率有一定差異，海南黎族人群的攜帶率高達8.00%～11.60%[2]。近年由于社會發展人口流動，各區域之間人群攜帶率可能發生變化。

β地貧的基因缺陷以點突變為主，本研究檢出的10種突變類型，均在國內已報道的46種突變類型中。其中，本研究中占前3位的突變分別為CD17、CD41-42及IVS-Ⅱ-654，前3種共占突變的79.41%；前6種突變(CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654、βEM、TATAbox-28、CD71-72)占突變95.42%。這與重慶、兩廣、瀘州、貴州、云南等地報道，差異有統計學意義(P<0.05)[6-11]，說明地貧的基因型分布有明顯的地域差異。針對這些常見類型進行有效的婚前、孕前檢查，可以有效降低重型β地貧患兒的出生率。此外，合并α地貧的β突變在此次研究中占比4.4%，此類孕婦雖然臨床表型有所改善，但生產中型或重型地貧患兒的概率更大。因此，建議此類人群以家庭為單位進行地貧篩查、產前診斷，從而減少中型或重型地貧患兒出生。

目前血常規參數和Hb電泳被聯合作為地貧篩查的重要指標。因地域差異各地采用不同的方法和指標，但相同的是需排除同樣表現為小細胞低色素性缺血性貧血(IDA)[12-13]。目前，我國推薦的地貧初篩標準為MCV<80 fL、MCH<27 pg[14]。然而，有研究發現地貧基因攜帶者中有MCV>80 fL的情況[15]。本次研究的320例β地貧陽性樣本中，有19例MCV>80 fL，占5.9%。有13例MCH>27 pg，占4.0%。提示全國范圍的地貧初篩標準范圍可能稍窄，β地貧的人群攜帶率可能更高。行業內普遍將血紅蛋白A2(HbA2)升高或血紅蛋白F(HbF)升高或出現異常帶作為β地貧發生的必要表現，因此，對Hb結果陰性的患者做出不攜帶此基因的判斷。本研究結果發現，5例(占1.6%)β地貧雜合突變，其HbA2不升高甚至有1例低于正常范圍。這提示仍然存在一些HbA2不升高的β地貧攜帶者，在做報告解釋和遺傳咨詢時應該注意，對配偶一方已確診為β地貧攜帶者的，另一方在做地貧初篩和確診時更應多重考慮。另外，血液學表型與β地貧突變型別有一定關系，可以聯合考慮。

4 結 論

四川地區的β地貧基因攜帶率較高，存在多種突變類型。應針對地區分布特點，開展常規的地貧篩查。對篩查陽性的病例進行針對性的基因檢測，從而從患者優生優育的角度做好遺傳咨詢是防治β地貧的有效策略。