3種微柱凝膠抗人球蛋白試劑卡的檢測差異比較

楊 光，劉自強，吳艷紅，楊 靜，王 嵐

(四川省人民醫院輸血科，四川 成都 610031)

微柱凝膠抗人球蛋白技術現已普遍應用于臨床。但不同的試劑卡，由于生產廠家不同，操作步驟相異，造成靈敏度差異，導致試驗結果出現不一致。本研究選取A、B卡2種進口卡和國產C卡進行平行比對，討論其差異性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取本院交叉配血次側不合住院病人標本97例。標本均為3 ml的EDTA- K2抗凝全血，3000 r/min 離心5 min，分離紅細胞和血漿，標本均無溶血、脂血、凝集，血清蛋白異常。

1.2 儀器及試劑 (1)試管法：抗人球蛋白試劑(上海血液醫藥有限公司)，恒溫水浴箱(天力醫療) 及Baso2005-1型離心機；(2)微柱凝膠法：A公司抗人球蛋白Liss/Coombs卡[A卡(批號：50531.02.05)]及其專用孵育器和離心機、 B公司抗人球蛋白Anti-IgG卡[B卡(批號：IGC623A)]及其專用孵育器和離心機、C公司抗人球蛋白Anti-IgG卡[C卡(批號：201511003)]及其專用孵育器和離心機。

1.3 陰陽性對照 (1)陽性對照細胞： 取3份正常人O型Rh(D)陽性紅細胞等量混勻，經生理鹽水洗滌3次后取少量壓積紅細胞，加IgG抗D血清，置37 ℃水浴致敏30 min，取出后用生理鹽水洗滌3次，用低離子液配成5%紅細胞懸液，離心備用。(2)陰性對照細胞： 取3份正常人O型紅細胞等量混勻，經生理鹽水洗滌后，用低離子液配成5%紅細胞懸液，離心備用。將質控標本與檢測標本一起檢測，結果均在質控范圍內。

1.4 方法 (1)試管法：將1滴受檢者紅細胞加入干凈的小試管中，用鹽水洗滌后以1000 r/min離心1 min，洗滌3次后，將上清液全部倒出，用低離子液配成5%紅細胞懸液，取懸液1滴加入試管中，再加入抗人球蛋白血清1滴，搖勻，3000 r/min離心15 s觀察結果，陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，鹽水管不凝集，則受檢管出現凝集為陽性，不凝集為陰性。(2)微柱凝膠法：將3種抗人球蛋白檢測卡分別標記A、B、C卡，用生理鹽水稀釋患者紅細胞到0. 8%濃度，分別加入50 μl于3種試劑卡中，將3種試劑卡分別放入對應的專用離心機中離心，B卡為5 min，A卡和C卡為15 min，取出觀察結果。試管法參照《全國臨床檢驗操作規程》[1]，微柱凝膠法所有操作嚴格按照SOP及試劑說明書進行。

1.5 統計學方法 采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計量資料比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 3種試劑卡及試管法檢出率比較 3種試劑卡檢出率間比較有顯著性差異 (χ2=45.986，P<0.05)；試管法與A、B卡比較均無顯著性差異(P>0.05)；試管法與C卡比較存在顯著性差異(P<0.05)； A、B卡與C卡比較均存在顯著性差異(χ2=22.371、χ2=38.893，P<0.05)；但A、B卡比較無顯著性差異(P>0.05)。見表1。

表1 3種抗人球蛋白卡及試管法檢測的陰、陽性頻數及檢出率(例)

注：1)與C卡及試管法比較P<0.05

2.2 3種試劑卡不同凝集強度的頻數分布 C卡檢測較多為陰性；對于弱陽性標本(0.5+～1+)，凝集強度A卡>B卡>C卡；對于強陽性標本(2+～3+)，凝集強度B卡>A卡>C卡。檢測靈敏度B卡>A卡>C卡。見表2。

表2 3種試劑卡不同凝集強度的頻數分布(例)

2.3 3種試劑卡不同凝集強度的頻數對比 A、B卡檢測效力相同，而C卡檢測效果較弱。對于弱陽性標本，C卡較A、B卡大多檢測不出，漏檢率較高。3種卡檢測病人標本得到相同凝集強度的概率均較低， A卡與B卡為41.2%、A卡與C卡為48.4%、B卡與C卡為30.9%，差異性明顯。對于弱陽性標本，重合率A卡與B卡為33.9%、A卡與C卡為28.8%、B卡與C卡為6.9%；對于強陽性標本，重合率A卡與B卡為43.8%、A卡與C卡為64.5%、B卡與C卡為54.3%。見表3。

表3 3種試劑卡不同凝集強度的頻數對比(例)

3 討 論

微柱凝膠抗人球蛋白技術是一種改良抗人球蛋白試驗方法，與傳統試管法相比，簡化了操作步驟，縮短了孵育時間。有研究比較微柱凝膠卡與傳統方法對抗人球蛋白的篩選以及不規則抗體的檢測，認為微柱凝膠法對抗體敏感性更高，甚至可以檢測出傳統方法不能檢測出的抗體，更自動化、標準化。因此，微柱凝膠抗人球蛋白技術是一種簡便、快速、靈敏、準確的試驗方法[2]，且具有結果易于觀察、反應穩定、易于保存、拍照長期保存等優點[3-4]。 微柱凝膠技術于1994年獲得美國 FDA批準為免疫學檢測技術，歐美等發達國家已經將微柱凝膠技術作為常規性的檢測技術在臨床廣泛推廣。目前，微柱凝膠技術在國內已較多運用于不規則抗體篩查、交叉配血及多種IgG類抗體的檢測中。

現階段，國內較多使用進口A、B卡，而較少使用國產C卡[5-7]。本研究以試管法作為參照進行比較，發現3種試劑卡的檢出率有顯著性差異，再進行組間兩兩比較后發現，A、B卡與試管法之間無顯著性差異，而C卡檢出率顯著低于進口卡和試管法。

C卡對于進口卡檢測為陽性的標本檢出能力很低；在檢測弱陽性的標本時，出現進口卡檢測為弱陽性而C卡檢測為陰性、A卡與C卡檢測為弱陽性而B卡檢測為強陽性的情況；在檢測強陽性的標本時，出現進口卡檢測為強陽性而C卡檢測為弱陽性甚至陰性、C卡檢測為強陽性而A卡檢測為弱陽性的情況。3種試劑卡差異性較大。

綜上所述， 檢測靈敏度B卡>A卡>試管法>C卡，但容易出現假陽性結果，對于已考慮存在弱抗原反應的樣本，首選靈敏度高的試劑卡鑒定，高效確保輸血安全；而C卡陽性檢測率和檢測靈敏度最低，容易出現假陰性結果，漏檢率較高，對輸血的安全性造成隱患，但不能以此否認其在輸血試驗中的運用價值；推薦臨床各實驗室使用B卡對患者標本進行輸血相容性檢測，輔以A卡與C卡進行比較和排異，既達到安全輸血的需要，又省時省力。不同廠家要建立共同的行業標準，實驗室之間建立標準化操作程序，再經過長期大量臨床研究，建立起微柱凝膠抗人球蛋白技術在檢測上的“金標準”，讓該技術在輸血相容性檢測中更準確、有效和安全。