豬肉中20種違禁藥物殘留的液相色譜-串聯質譜法檢測

□ 李紅麗 吳曉琴 蔡小欽 譚 珊 重慶市食品藥品檢驗檢測研究院

當前畜牧業生產的過程中，獸藥在進行畜禽疾病的預防及治療具有重要影響，同時其合理應用對動物性食品品質方面也具有有利影響。但是濫用藥物或違規使用違禁藥物等現象是比較普遍存在的，在獸藥應用的時候，動物性食品中藥物殘留的現象對人類健康及生態健康等方面都具有比較嚴重的危害。對違禁藥物多殘留分析樣品前處理技術提出更高要求，而使用液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）分析檢測畜禽肉獸藥殘留的內容較多，但有關多類禁用藥物多殘留檢測的報道相對較少，需要進一步觀察和研究[1]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

美國安捷倫公司的Agilent 1200高效液相色譜系統，美國應用生物系統公司的API 4000三重四極桿質譜儀，上海安普科學儀器有限公司生產的Anpel Mcx固相萃取小柱等儀器。

對照品（中國獸醫藥品監察所，美國sigma公司），甲醇和乙腈及甲酸（美國Fisher Scientific公司），其中試劑使用分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品處理

在實驗之前需要將豬肉樣本2.0 g樣本放入到50 mL的離心管中，之后加入10 mL的乙酸乙酯，混合1 min之后，以4 500 r/min的速度離心3 min。移取5 mL上清液放入到10 mL刻度管中，在45 ℃的溫度下用氮氣緩慢吹干之后，加入1 mL的豬肉溶解殘渣，渦旋1 min。隨后加入1 mL乙腈飽和正己烷渦旋1 min，靜置之后分層處理，之后上機測試。

1.2.2 色譜條件

色 譜 柱：Waters Cortecs C18色譜，柱溫設置為40 ℃，進樣量為1.0 μL。流動相A為0.3%甲酸水溶液，流動相B為乙腈；流速為0.3 mL/min。梯度洗脫程序：0～5 min，10%B→60%B；5.00～6.00 min。

1.2.3 質譜條件

離子源選用電噴霧離子源正離子模式，將加熱的溫度設置為400 ℃，脫溶劑管的溫度為250 ℃；干燥氣流速為6 L/min，霧化氣流速設置為2.5 L/min；加熱氣流速主要顯示為10 L/min，掃描的模式為多反應監測（MRM）。

2 結果與分析

2.1 儀器條件優化

質譜條件在設置的時候，首先對20種違禁藥物（0.5～10 mg/L）實施一級全掃描和子離子掃描處理（見表1），在這一過程中明確藥物所具有的母離子和子離子情況，選取其中干擾比較少的子離子作為定性離子和定量離子。

色譜柱和流動相的選擇主要是應用Thermo Hybrid Golden C18和10 mmoL/L乙酸銨溶液、0.1%甲酸-乙腈及0.1%甲酸-甲醇3種流動相體系對藥物分離。

2.2 樣品前處理

實驗結果表明，10%甲醇溶液能溶解豬肉殘渣中的藥物，其中多數藥物可以很好地保留。

表1 20種藥物的MRM質譜優化參數、保留時間及離子比

凈化處理由于目標分析物極性差異明顯，其中的藥物多數具有弱堿性的特點，因此需要選擇其中非極性的C18。和陽離子交換作用構成混合型小柱，對其實施富集凈化。本實驗在實施Anpel MCx小柱凈化處理的過程中，2%甲酸可以進行洗滌水溶性雜質清除，但甲醇淋洗的過程中多數激素類的藥物會出現被洗脫的情況，能夠有效減少洗滌液中的甲醇含量，激素類藥物保留量也會得以提高，最后選擇其中的10%甲醇溶液作為淋洗液。表1為20種藥物的MRM質譜優化參數、保留時間及離子比。

3 結論

本研究中構建高效液相色譜-串聯質譜法檢測豬肉中20種違禁藥物殘留的方法，在實施檢測時，首先進行樣本離心和凈化處理之后，消除豬肉基質對被測成分離子化所產生的干擾現象。與多數國內外相關文獻研究中方式和國標方法相比，液相色譜-串聯質譜法檢測豬肉中違禁藥物殘留現象的時候，不需要使用高氯酸沉淀蛋白。這一方式的操作比較簡單，過程準確靈敏，結果顯示的速度較快，在豬肉中20種違禁藥物殘留的定量實施有效測定，最終得到相關結論，在具體研究的時候，液相色譜-串聯質譜法檢測方式具有對違禁物質快速監測的特點是比較突出的[2]。