乳安消片對乳腺增生大鼠的治療作用

陳發菊， 彭 梅， 楊 艷， 楊 娟， 楊小生?， 王海波

（1. 貴州醫科大學藥用植物功效與利用國家重點實驗室， 貴州 貴陽550014； 2. 貴州省中國科學院天然產物化學重點實驗室， 貴州 貴陽550014； 3. 貴州宏驕科技有限公司， 貴州 貴陽550000）

乳腺增生在中年婦女人群中發病率高， 是乳腺癌發生的前期病變［1-2］， 并且發病年齡逐漸趨向于低齡化， 國內一些地區的發病率接近30%， 對婦女的身心健康及生活質量構成嚴重威脅［3］。 乳腺增生是由胸腺下丘腦垂體部分免疫系統發生障礙引起的自身免疫性疾病［4］， 異常性激素持續刺激乳房， 導致正常乳房組織過度增生， 歸屬于中醫“乳癖” 的范疇。 根據中醫理論， 乳腺增生是肝臟和腎臟虧虛的功能障礙綜合征， 臨床表現為乳頭溢液、 乳房疼痛等， 可通過乳房X 光或彩色超聲檢查確診［5］。

目前， 西醫采用激素類藥物緩解乳腺增生癥狀， 但往往伴隨著許多副作用和嚴重并發癥， 不適合長期治療［6］； 外科手術也很難被多數人接受，而且容易復發； 中藥能有效治療乳腺增生［7-8］， 并且毒副作用較小。 乳安消片由陳皮、 黨參、 夏枯草、 山藥、 蒲公英組成， 主要用于治療乳腺增生、乳腺結節、 子宮肌瘤、 月經不調、 痛經、 身倦乏力、 失眠多夢、 面色失華易長斑、 煩躁易怒等［9］，本實驗將研究該制劑對乳腺增生大鼠的治療作用，并探索其可能機制。

1 材料

1.1 試藥 乳安消片（貴州宏驕科技有限公司，批號20160601）； 乳癖消片［遼寧上藥好護士（集團） 有限公司， 批號Z21021823］。 苯甲酸雌二醇（批號E102160）、 黃體酮（批號P106426） （上海阿拉丁生化科技股份有限公司）； 大鼠雌二醇（E2）、 孕酮（PROG）、 催乳素（PRL） 酶聯免疫檢測試劑盒（武漢華聯科生物科技有限公司， 批號DRE20048、 DRE20697、 DRE20710）； 4%多聚甲醛 （索萊寶生物科技有限公司，批號20170722）。

1.2 儀器 游標卡尺（上海匯一尺業有限公司）；TP1020 自動組織脫水機、 包埋機、 CM2245 輪轉式石蠟切片機、 光學顯微鏡（德國Leica 公司）； 電子天平［賽多利斯科學儀器（北京） 有限公司］；-80 ℃低溫冰箱（日本三洋公司）； Milli-Q 純水處理器（美國Millipore 公司）； W-80A 型漩渦混合器（江蘇海門麒麟醫用儀器廠）； 酶標儀（美國Bio-Rad 公司）； 烘箱（上海精宏實驗設備有限公司）；離心機（德國Eppendorf 公司）。

1.3 動物 雌性SD 大鼠， 購自重慶騰鑫生物技術有限公司［許可證號SCXK （軍） 2012-0011］。

2 方法

2.1 分組及給藥 60 只大鼠隨機分為空白對照組、模型組、 乳癖消片組及乳安消片低、 中、 高劑量組，每組10 只。 除空白對照組外各組大鼠后腿內側肌內注射苯甲酸雌二醇（0.5 mg／kg）， 每天1 次， 連續25 d， 隨后肌內注射黃體酮（5 mg／kg）， 每天1 次，連續5 d， 以建立乳腺增生模型［10-12］。 同時， 空白對照組和模型組大鼠灌胃給予生理鹽水（1 mL／100 g），其他組大鼠分別灌胃給予乳癖消片（960 mg／kg）、 乳安消片（580、 1 160、 1 740 mg／kg）， 每天1 次，連續45 d。

2.2 指標檢測 于末次給藥24 h 后， 游標卡尺精密測量大鼠第2 對乳頭高度及乳房直徑。 大鼠頸動脈取血， 4 ℃、 3 500 r／min 下離心10 min 取血清，-20 ℃保存， 按照ELISA 試劑盒說明書測定大鼠血清E2、 PROG、 PRL 水平。 腹腔注射7%水合氯醛（0.5 mL／100 g） 麻醉大鼠， 將其以仰臥式固定于鼠板上， 取第2 對乳房的乳腺， 4%多聚甲醛固定2 d， 組織脫水， 石蠟包埋， 切片， 進行HE 染色。

2.3 統計學分析 應用SPSS 13.0 軟件進行處理，數據以（±s）表示， 組間比較采用單因素方差分析。 以P＜0.05 為具有顯著性差異。

3 結果

3.1 乳安消片對大鼠乳頭高度及乳房直徑的影響 表1 顯示， 與空白對照組比較， 模型組大鼠乳頭高度及乳房直徑顯著增大（P＜0.05）； 與模型組比較， 乳安消片中、 高劑量組兩者顯著減小（P ＜0.05）。

表1 乳安消片對大鼠乳頭高度及乳房直徑的影響（±s，n＝10）Tab.1 Effects of Ru’anxiao Tablets on rat nipple heights and breast diameters （±s， n＝10）

表1 乳安消片對大鼠乳頭高度及乳房直徑的影響（±s，n＝10）Tab.1 Effects of Ru’anxiao Tablets on rat nipple heights and breast diameters （±s， n＝10）

注：與空白對照組比較，?P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

組別 劑量／（mg·kg-1）乳頭高度／mm乳房直徑／mm空白對照組 — 1.20±0.16 0.99±0.12模型組 — 2.09±0.22? 1.68±0.19?乳癖消片組 960 1.33±0.16＃ 0.87±0.09＃乳安消片低劑量組 580 1.91±0.06 1.60±0.09乳安消片中劑量組 1 160 1.72±0.06＃ 1.44±0.11＃乳安消片高劑量組 1 740 1.49±0.24＃ 1.21±0.19＃

3.2 乳安消片對大鼠血清E2、 PROG、 PRL 水平的影響 表2 顯示， 與空白對照組比較， 模型組大鼠E2、 PRL 水平顯著增加， PROG 水平顯著降低（P＜0.05）； 與模型組比較， 乳安消片組大鼠三者水平顯著升高（P＜0.05）。

表2 乳安消片對大鼠血清E2、 PROG、 PRL 水平的影響（±s， n＝10）Tab.2 Effects of Ru’anxiao Tablets on rat serum levels of E2， PROG and PRL （±s， n＝10）

表2 乳安消片對大鼠血清E2、 PROG、 PRL 水平的影響（±s， n＝10）Tab.2 Effects of Ru’anxiao Tablets on rat serum levels of E2， PROG and PRL （±s， n＝10）

注：與空白對照組比較，?P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

組別 劑量／（mg·kg-1）E2／（pg·mL-1）PROG／（ng·mL-1）PRL／（ng·mL-1）空白對照組 — 141.5±0.51 56.14±0.25 0.69±0.002模型組 — 389.2±0.32? 15.96±0.27? 15.74±0.06?乳癖消片組 960 134.6±2.32＃ 42.90±0.42＃ 0.86±0.05＃乳安消片低劑量組 580 331.3±0.83＃ 23.83±0.11＃ 13.62±0.06＃乳安消片中劑量組 1 160 162.5±2.22＃ 43.79±0.38＃ 10.11±0.11＃乳安消片高劑量組 1 740 127.8±0.41＃ 50.19±0.62＃ 2.93±0.08＃

3.3 大鼠乳腺組織病理形態 圖1 顯示， 與空白對照組比較， 模型組大鼠乳腺小葉腺泡數增多， 小葉體積增大， 導管擴張， 腺泡內有大量分泌物； 乳癖消片組大鼠腺泡內分泌物及乳腺小葉腺泡數較模型組減少； 乳安消片組大鼠腺泡內分泌物及乳腺小葉腺泡數較模型組顯著減少， 以高劑量組更明顯。

4 討論

下丘腦-垂體-性腺軸是神經結構組成部分之一， 在維持內環境穩定和機體正常生理功能中扮演著重要角色［13］， 性激素分泌異常會導致許多疾病的發生， 如高催乳素血癥、 乳腺增生、 子宮肌瘤等。 各種性激素水平共同調控乳腺組織， 其中催乳素（PRL） 水平升高被認為是引起乳腺增生的重要因素， 孕酮（PROG） 水平對腺泡組織和乳腺小葉起到促進作用， 雌二醇（E2） 水平增高對導管周圍纖維組織和乳腺導管的生長起到抑制作用［14］。性激素紊亂常發生于乳腺增生模型中， 可通過調控下丘腦-垂體-性腺軸平衡來調節E2、 PROG、 PRL水平， 恢復卵巢功能， 消除小葉增生及腺泡增生。

本實驗發現， 乳安消片在乳腺增生大鼠中擔任著重要的激素調節劑， 具有消腫止痛、 軟堅散結、疏肝健脾、 調理各臟腑的功效， 方中山藥補脾養胃， 生津益肺， 補腎； 夏枯草清肝泄火， 明目， 散結消腫； 黨參健脾益肺， 增強免疫力， 改善微循環， 養血生津； 蒲公英利尿利膽， 清熱解毒， 消腫散結能； 陳皮主要用于食少吐泄、 咳嗽痰多、 胸腕脹滿。 與模型組比較， 灌胃給藥45 d 后乳安消片組大鼠血清中E2、 PRL 水平顯著下降， PROG 水平顯著升高， 表明它可通過調控性激素水平對乳腺增生起到保護或治療作用。 另外， 選擇乳癖消片作為陽性藥物， 它主要由漏蘆、 蒲公英、 玄參、 連翹、 鹿角、 海藻、 牡丹皮、 三七、 雞血藤、 赤芍、木香組成， 方中漏蘆、 蒲公英、 玄參、 連翹消腫解毒， 鹿角、 海藻軟堅散結， 牡丹皮、 三七活血化瘀， 雞血藤補血通絡， 赤芍、 木香行氣止痛， 諸藥合用， 共奏疏肝益氣、 活血化瘀、 祛瘀散結、 清熱解毒之功效， 用于乳腺增生的長期治療， 而且安全有效， 無嚴重不良反應［15］。 同時， 組織病理學結果表明， 乳安消片能緩解乳腺增生， 減少乳腺小葉腺泡數。

綜上所述， 乳安消片能調節乳腺增生大鼠體內紊亂的激素， 表明其所含中藥材具有平衡功能， 對乳腺增生具有保護作用， 其機制可能是通過調節下丘腦-垂體-性腺軸紊亂使性激素水平恢復正常， 從而達到治療乳腺增生的目的。