Meta分析法研究亞麻籽對蛋黃中多不飽和脂肪酸的影響

岳巧嫻， 黃晨軒， Chola Cosmas， 許穎玨，

錫建中1， 陳 輝1， 許利軍3， 王德賀1， 郝二英1， 周榮艷1*

（1．河北農業大學動物科技學院，河北保定 071000；2．河北農業大學商學院，河北保定 071000；3．保定市畜牧工作站，河北保定 071000）

亞麻籽、魚油、藻類等是畜禽產品中n-3多不飽和脂肪酸（PUFA）的主要飼料添加原料（Fraeye等，2012），但魚油的穩定性差，長期使用會使動物性產品產生腥臭味，而亞麻籽具有較好的穩定性（趙麗娜等，2007）。沈勇等（2012）試驗證實蛋雞日糧中添加粉碎亞麻籽后能改變蛋黃中n-3系列多不飽和脂肪酸的組成，使蛋黃中DHA含量升高，EPA含量降低。吳靈英等（2004）研究表明蛋雞日糧中添加亞麻籽能顯著提高雞蛋中n-3PUFA的含量，可用于生產富含DHA為主的雞蛋。本研究通過對已發表的文獻進行Meta分析，綜合判斷蛋雞日糧中添加亞麻籽對蛋黃中多不飽和脂肪酸富集水平的影響，為生產實踐中亞麻籽添加劑量提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 文獻來源 本研究通過在中國知網、維普、萬方、谷歌學術、Pubmed等數據庫檢索，檢索關鍵詞有亞麻籽（flaxseed）、蛋黃（egg yolks）、多不飽和脂肪酸 （polyunsaturated fatty acid）、薈萃分析（meta analysis）等，并查閱相關的文獻綜述及其參考文獻，以期獲得更多的信息。

1.2 納入標準 （1）研究設計為隨機對照研究；（2）研究對象為產蛋雞；（3）有研究開展或發表的年限；（4）干預措施為在蛋雞日糧中補充亞麻籽，且補充劑量為5%、10%及15%；（5）各研究對樣本大小有明確規定；（6）蛋黃多不飽和脂肪酸含量的指標為 LA、ALA、AA、DHA、總 n-3PUFA、總 n-6PUFA的含量和n-6PUFA/n-3PUFA的比例，并且在研究中給出了試驗指標的數值或均值以及標準差或標準誤。

1.3 排除標準 （1）亞麻籽與其他富含亞麻酸的物質聯合使用；（2）綜述文獻、無對照文獻和重復報告的文獻；（3）數據不全或數據無法利用的文獻；（4）無法提供均值和標準差；（5）統計方法錯誤且無法修正。

1.4 統計學分析 利用Stata14.0軟件的Meta-Analysis進行統計分析。在進行Meta分析前，對數據進行異質性檢驗，用I2值反映多個研究之間的異質性程度。當多個研究的異質性檢驗I2＜50%、P＞0.05時，則說明各研究間有同質性，使用固定效應模型；若多個研究的異質性檢驗I2＞50%、P＜0.05時則存在異質性，使用隨機應模型。本研究為計量資料，計算標準均數差（SMD）及95%置信區間 （95%CI）； 用 IBM SPSS Statistics 21.0混合線性模型來分析各研究間的異質性來源 ， 分 別 以 ALA、DHA、AA、LA、n-3PUFA、n-6PUFA以及n-6PUFA/n-3PUFA的比例為因變量，以亞麻籽添加劑量和蛋雞產蛋周齡為固定因子，以蛋雞品種和亞麻籽添加形式為隨機因子，以試驗周期為協變量，結果以“均值±標準誤”表示，再對各研究進行敏感性分析。

2 結果與分析

2.1 納入文獻的特征 數據庫里共搜集到48篇相關文章，其中英文文獻20篇，中文文獻28篇。按上述“1.2”納入和“1.3”排除標準篩選后，共有8篇文獻21項隨機對照研究納入本次Meta分析（表1），其中英文文獻4篇，中文文獻4篇。被納入的文獻均發表于1995—2017年，互相之間沒有重復。

2.2 M eta分析結果

2.2.1 添加亞麻籽對蛋黃中ALA、DHA、LA和總n-3PUFA的影響 共有14項研究報告了添加亞麻籽對蛋黃中ALA的影響，但其存在高度的異質性（I2=98.7%），因此用隨機效應模型進行合并分析。由圖1a可以看出，合并SMD值及95%CI為17.51（13.34，21.69），P ＜ 0.05，表明蛋雞日糧中添加亞麻籽顯著提高了蛋黃中亞麻酸的含量。

共有14項研究報告了添加亞麻籽對蛋黃中DHA的影響，用隨機效應模型合并分析 （I2=95.6%），由圖1b可以看出，合并SMD值及95%CI為 5.39（4.22，6.55），P ＜ 0.05，表明蛋黃中 DHA 的含量在蛋雞日糧中添加亞麻籽組顯著高于對照組。

表1 納入Meta分析文獻

共有10項研究報告了添加亞麻籽對蛋黃中LA含量的影響，由圖1c可知，各研究間異質性明顯（I2=94.5%），其合并SMD值及 95%CI為 0.42（-0.39，1.23），無統計學差異（P ＞ 0.05），表明蛋雞日糧中添加亞麻籽未能提高蛋黃中LA含量。

共有19項研究指出了日糧中添加亞麻籽對蛋黃中總n-3PUFA含量的影響，由圖1d可知，各研究間異質性明顯（I2=98.8%），其合并SMD值及95%CI為 8.86（7.59，10.14），有統計學差異（P ＜0.05），表明日糧中添加亞麻籽顯著提高了蛋黃中總n-3PUFA含量。

2.2.2 添加亞麻籽對蛋黃中AA、總n-6PUFA和n-6PUFA/n-3PUFA的影響 共有11項研究報告了添加亞麻籽的日糧相對于普通日糧的蛋黃中的AA的影響，由圖2a知，各研究間異質性明顯（I2=94.9%），其合并 SMD 值及 95%CI為-1.62（-2.54，-0.70），有統計學差異（P ＜ 0.05），表明蛋雞日糧中添加亞麻籽顯著降低了蛋黃中AA含量。

共有12項研究報告說明日糧中添加亞麻籽對總n-6PUFA含量的影響，由圖2c可知，各研究間異質性明顯（I2=97.3%），其合并SMD值及95%CI 為-0.44 （-0.97，0.08）， 無統計學差異 （P=0.098），表明蛋雞日糧中添加亞麻籽未能降低蛋黃中總n-6PUFA含量。

共有12項研究指出日糧中添加亞麻籽對蛋黃中n-6PUFA/n-3PUFA的影響。由圖2c可以看出，各研究間異質性明顯（I2=99.0%），其合并SMD值及 95%CI為-5.22（-6.62，-3.82），有統計學差異（P＜0.05），表明蛋雞日糧中添加亞麻籽顯著降低了蛋黃中n-6PUFA/n-3PUFA。

圖1 日糧中添加亞麻籽效應的標準化均值差和95%置信區間森林圖

圖2 日糧中添加亞麻籽效應的標準化均值差和95%置信區間森林圖

2.3 異質性來源分析 混合線性模型的結果如表2所示，不同指標的異質性來源不同。其中DHA和n-3PUFA的主要異質性來源為亞麻籽的添加劑量，DHA隨亞麻籽劑量的增加而顯著升高（P＜0.05），而蛋黃中n-3PUFA的富集在亞麻籽添加15%時為最優，且顯著高于5%的添加量（P＜0.05）。 ALA、LA、AA 和 n-6PUFA/n-3PUFA 的異質性來源為亞麻籽添加劑量和蛋雞產蛋周齡，其中ALA的富集在添加量為10%時顯著高于5%水平的添加量（P＜0.05），與15%添加量的差異不顯著（P＞0.05），蛋雞產蛋周齡為24周時ALA富集量最多 （P＜0.05）；LA的富集在添加量為5%時顯著低于15%（P＜0.05），但與10%添加量的差異不顯著（P＞0.05），蛋雞產蛋周齡在23周時顯著低于其他幾個時期 （P＜0.05）；AA的含量為5%和15%添加量的顯著低于10%的添加量 （P＜0.05），22周和23周的富集水平差異不顯著 （P＞0.05），但顯著低于21周和24周齡的蛋雞；n-6PUFA/n-3PUFA的比例10%和15%的添加量顯著低于5%的添加量，而10%和15%的差異不顯著（P＞0.05），21周齡時富集水平顯著低于24周 （P＜0.05），但與23周無顯著差異（P＞0.05）。n-6PUFA異質性來源于添加劑量和蛋雞產蛋周齡都無關。

2.4 敏感性分析 為了觀察權重最大的研究對合并SMD的影響，分別去除 ALA、DHA、LA、AA、n-3PUFA、n-6PUFA、n-6PUFA/n-3PUFA 中的權重最大者后，SMD及95%CI分別為18.93（14.41，23.44）、5.77（4.46，7.09）、0.56（-0.30， 1.42）、-1.52 （-2.53， -0.50）、9.63 （8.16，11.11）、 -0.45（-1.05，0.15）和-5.61（-7.18，-4.03）。 去除權重最大者后，各指標的合并SMD沒有明顯變化，說明各個指標的敏感性都較低。

表2 異質性來源分析

3 討論

在目前的亞麻籽影響蛋黃中多不飽和脂肪酸富集的研究中，可能由于各項研究的研究樣本數、生長階段、生長環境、飼料營養水平等不同導致研究結果不一致。本研究對以往的研究數據進行了總體Meta分析，結果表明：ALA、DHA和n-3PUFA等富集水平在添加亞麻籽的條件下都有顯著提高，AA和n-6PUFA/n-3PUFA水平顯著降低，而n-6PUFA和LA的水平在試驗組和對照組之間沒有顯著差異。

由于亞麻籽中富含豐富的α-亞麻酸，沉積在體內的α-亞麻酸在一系列酶的作用下，經碳鏈延長和去飽和作用轉化成DHA。Ebeid等（2008）證明提高日糧中n-3PUFA的含量能顯著提高蛋黃中n-3PUFA的含量，并顯著降低n-6PUFA的含量。Bean等（2002）發現飼喂含亞麻籽的日糧能顯著提高蛋黃沉積DHA和ALA的能力，而鄧波等（2017）的試驗同樣表明，普通日糧中添加10%亞麻籽使蛋黃中DHA和ALA沉積為主，這與本試驗的研究結果一致。圖1a顯示吳靈英等（2004）的試驗中ALA的富集水平高于其他研究，可能是由于該研究中添加了針對亞麻籽抗營養因子的添加劑，從而減緩了膠質和生氰糖苷等抗營養因子的作用，提高ALA的富集水平。圖1b、d和圖2b顯示 Asad Sultan 等（2015）研究中，蛋黃中 DHA、n-3PUFA及n-6PUFA的富集水平與其他研究相比差異較為明顯，可能是由于該試驗添加剔除雜質并曬干的亞麻籽，增加了亞麻籽的添加質量。圖2c顯示王利華等 （2002）的試驗n-6PUFA/n-3PUFA明顯低于其他研究，可能原因為該研究基礎日糧添加了12%的小麥麩，n-6PUFA/n-3PUFA的初始水平較低。趙麗娜（2008）研究表明在試驗前三周，n-3PUFA的富集在飼喂含亞麻籽飼料的前三周呈線性增長，三周以后趨于穩定。沈勇等（2012）同樣表明，飼喂含有10%亞麻籽日糧后蛋黃中DHA沉積量呈現迅速提高的趨勢，隨飼喂時間的延長對DHA的蓄積能力逐漸減弱。吳永保等（2015）試驗顯示，添加亞麻籽極顯著提高了蛋黃中n-3PUFA的含量，極顯著降低了n-6PUFA的含量和n-6PUFA/n-3PUFA的比例。Bean等（2003）證明飼糧中添加亞麻籽，產白殼蛋和褐殼蛋的雞的蛋黃中n-3PUFA水平都顯著提高。Asad等（2015）研究表蛋雞日糧中添加10%亞麻籽，蛋黃中多不飽和脂肪酸的富集水平與添加15%劑量沒有差異，但顯著高于添加量為5%，與本試驗的研究結果一致。本試驗結果顯示LA、DHA和n-3PUFA的沉積隨蛋雞產蛋周齡的增加而減少，其可能因素為產蛋量與多不飽和脂肪酸的沉積呈反向相關。但孫菡聰等（2009）研究發現，北京油雞和白來航雞蛋黃中多不飽和脂肪酸的富集規律為初產期小于產蛋后期，產蛋后期小于產蛋中期，即隨著產蛋周齡的增加多不飽和脂肪酸的沉積規律為先升高后降低。這可能是因為本研究中蛋雞產蛋周齡間隔不明顯導致本研究與前人研究結果有偏差。

4 結論

從總體上來說，蛋雞日糧中添加亞麻籽能提高蛋黃中ALA、DHA和n-3PUFA的富集水平，降低AA和n-6PUFA/n-3PUFA的水平，但蛋黃中富集多不飽和脂肪酸的水平受亞麻籽添加劑量和蛋雞產蛋周齡的影響，添加10%亞麻籽有利于蛋黃富集n-3PUFA，降低n-6/n-3的比例，產蛋前期的富集水平優于產蛋后期。