微控和常規(guī)萃取紅樹莓有效成分對(duì)比

(1.安徽三聯(lián)學(xué)院 安徽 合肥 230000；2.貴州理工學(xué)院 貴州 貴陽 550003)

一、實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)器材和試劑：電子天平、超聲機(jī)器40kHZ、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、95%乙醇、0.12mol/LNaOH溶液、乙酸乙酯、甲醇、無水乙醇、三氯化鋁試劑、乙酸鉀試劑，鹽酸溶液等。(注：每一組數(shù)據(jù)即為圖中的每一點(diǎn)都是通過三組平行試驗(yàn)計(jì)算出的平均值)

二、單因素對(duì)萃取量影響的實(shí)驗(yàn)方案及數(shù)據(jù)分析

1.取5g紅樹莓，加入料液比為1:40(g/ml)的90%乙醇，在溫度為50℃的條件下，分別超聲10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘。固液分離后，將液相旋蒸干，加入200ml的0.12mol/L碳酸氫鈉溶液將其溶解，再加入適量的鹽酸使其酸化。然后將液體混勻后分成兩份，一份按照原料液和萃取液為3:1的比例進(jìn)行常規(guī)萃取，另一份按照原料液和萃取液為3:1的比例進(jìn)行微控萃取。最后將有機(jī)相和水相分離，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后烘干冷卻稱重，再將所萃取的物質(zhì)溶于200ml30%的乙醇。結(jié)果：常規(guī)萃取法和微控萃取法最優(yōu)的時(shí)間都是20分鐘。

2.取5g紅樹莓，加入料液比為1:40(g/ml)的90%乙醇，分別在溫度為30℃、40℃、50℃、60℃、70℃條件下超聲20分鐘。重復(fù)2.2后來的步驟。結(jié)果：常規(guī)萃取法和微控萃取法最優(yōu)的溫度都是50℃。

3.取5g紅樹莓，設(shè)置料液比(g/ml)為：1：20、1：30、1：40、1：50、1：60，乙醇濃度為90%，在溫度為50℃條件下超聲20分鐘。重復(fù)2.2后面的步驟。

兩種萃取方法在單因素實(shí)驗(yàn)中對(duì)應(yīng)的最好條件結(jié)果是(1)常規(guī)萃取法中提取時(shí)間是20min、提取溫度為50度、料液比(g/ml)為1:40、提取乙醇濃度為95%。(2)常規(guī)萃取法中提取時(shí)間是20min、提取溫度為50度、料液比(g/ml)為1:50、提取乙醇濃度為95%。

4.取5g紅樹莓，分別在加入料液比為1:40(g/ml，常規(guī))和1:50(g/ml,微控)，乙醇濃度分別設(shè)置為70%、80%、90%、95%、100%，在溫度為50℃條件下超聲20分鐘。固液分離后，將液相旋蒸干，分別加入200ml的0.12mol/L碳酸氫鈉溶液將其溶解，再加入適量的鹽酸使其酸化。各取一半液體重復(fù)2.2后續(xù)的步驟。結(jié)果：常規(guī)萃取法和微控萃取法最優(yōu)的乙醇提取濃度都是95%。

三、微控正交實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)分析

在單因素的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行了三水平四因素的正交實(shí)驗(yàn)，重復(fù)上述的實(shí)驗(yàn)方法，按照正交表所對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并記錄好數(shù)據(jù)。

ABCD實(shí)驗(yàn)序號(hào)提取時(shí)間提取溫度料液比乙醇濃度萃取量(min)(℃)(g/ml)(%)(g)110401:40900.06210501:50950.12310601:601000.05420401:401000.07520501:50900.07620601:60950.08730401:40950.08830501:501000.06930601:60900.0710.230.210.200.20均值20.220.250.260.2830.210.200.200.18極差R0.00330.01670.02330.0333較好水平A1B2C2D2因素主要次序DCBA

由正交表我們和實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們可以分析出對(duì)于微控萃取法最優(yōu)的提取工藝是超聲10min、超聲溫度為50℃、料液比為1：50(g/ml)、95%的乙醇。并且以同樣方法參考單因素結(jié)果做了常規(guī)萃取的最優(yōu)方案。

四、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

1.準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品11.2mg，本實(shí)驗(yàn)用色譜級(jí)甲醇溶解，定溶使用50ml的容量瓶。分別取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.25、0.5、1、2、3、4毫升放于6支10ml的比色管中，緩慢加入2ml 0.1mol/L三氯化鋁溶液和3mol/L乙酸鉀溶液，30%乙醇溶液定溶置10ml，充分的搖勻，將其放在室溫下30min。同時(shí)做試劑空白。并且測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)液的最大吸收峰為418nm。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

由圖像可知標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.0302X。

2.含量計(jì)算:常規(guī)萃取法中的最優(yōu)工藝的溶液的吸光度為0.081，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蘆丁質(zhì)量濃度0.0024mg/ml，所以對(duì)應(yīng)的蘆丁質(zhì)量是0.24mg。微控萃取法中的最優(yōu)工藝的溶液的吸光度為0.105，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蘆丁質(zhì)量濃度0.0032mg/ml，所以對(duì)應(yīng)的蘆丁質(zhì)量是0.32mg。

五、自由基清除率實(shí)驗(yàn)

1.DPPH活性實(shí)驗(yàn)

如圖所示可知自由基清除率的大小為：微控萃取法>常規(guī)萃取法。

2.ABTS活性實(shí)驗(yàn)

如圖所示可知自由基清除率的大小為：微控萃取法>常規(guī)萃取法。

六、總結(jié)

分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果得紅樹莓在乙酸乙酯和提取液比例為1:3的情況下微控采取方法的最優(yōu)工藝為超聲10min、超聲溫度為50℃、料液比為1：50(g/ml)、95%的乙醇。通過正交實(shí)驗(yàn)得到微控萃取法的萃取效率比常規(guī)萃取法的萃取效率高。通過自由基實(shí)驗(yàn)得到微控萃取法所得物質(zhì)自由基清除率大于常規(guī)萃取法所得物質(zhì)自由基清除率。