正畸力作用下牙髓組織神經生長因子的表達及其與疼痛的關系研究

趙紫婷 葉文成 李瑩

近年來，臨床日益重視關于正畸力作用下牙齒疼痛的研究。神經生長因子（NGF）是一種生物活性分子，參與牙髓組織的生長與損傷后的修復[1]。研究發現，炎癥區域表達上調的NGF會影響感覺神經元的化學表型[2-4]。患者正畸加力初期牙髓組織存在炎癥反應，NGF是否參與了正畸致痛尚無定論。基于此，本研究旨在探討正畸力作用下牙髓組織NGF的表達及其與疼痛的關系，現報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2015年5月至2017年7月本院收治的口腔正畸患者26例，排除全身系統性疾病、近2個月內服用過抗生素與免疫抑制劑等患者。其中男13例，女13 例；年齡 11~14（12.3±1.4）歲。26 例患者依據正畸計劃均需拔除上頜雙側第一前磨牙（52顆牙）并進行固定矯治，上頜第一前磨牙均無齲病及牙周疾病。本研究獲醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法 患者在安裝矯治器前均拔除左上頜第一前磨牙（對照組，26顆牙）。參考Derringer等[5]的正畸加力方法，患者配戴矯治器后，用直絲弓固定矯治器安裝在患者上頜牙列，第一磨牙粘帶環、雙側第二前磨牙之間所有牙齒粘托槽均為杭州新亞公司生產的PIM直絲弓托槽，0.014英寸NITI預成弓絲入槽結扎，右上頜第一前磨牙托槽偏近中粘貼，從而使該牙獲得50~100g（0.5~1 N）的頰向、遠中向的扭轉力。患者分別在安裝矯治器后 1、3、7、15d（7、7、6、6 例）拔除右上頜第一前磨牙（觀察組，26顆牙）。拔除的上頜第一前磨牙進行標本制備。

1.3 觀察指標

1.3.1 牙齒疼痛評估 應用四點口述分級評分法(VRSs-4)問卷調查26例患者安裝矯治器后各時間段上頜第一前磨牙的疼痛程度，記錄其前1d夜間上頜第一前磨牙的疼痛程度，無疼痛、輕度疼痛、中度疼痛、重度疼痛分別評定為 1、2、3、4 分[6]。

1.3.2 牙髓組織NGF表達強度

1.3.2.1 標本處理 應用PBS（0.1mol/L、pH 7.2~7.4）沖洗標本牙表面血污，根尖2 mm左右用咬骨鉗去除，然后用4%多聚甲醛固定，用0.5mol/L、pH 7.4的乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）脫鈣8周，正丁醇脫水后直接浸蠟、包埋，制作石蠟標本，連續切片牙齒組織，厚度為4μm。

1.3.2.2 免疫組織化學染色和結果評判 應用武漢博士德公司生產的DAB試劑盒及SABC試劑盒、兔IgG多抗NGF抗體，應用SABC法染色，鏡下對DAB顯色進行控制。滴加50~100μl一抗工作液，室溫孵育30min，用PBS沖洗切片5min，重復沖洗3次。DAB顯色液顯色5min，顯微鏡下控制反應，蘇木精液復染細胞核1 min，脫水、透明、封片，顯微鏡下觀察。NGF染色陽性標準為有棕黃色顆粒出現在細胞質中，細胞核呈藍色[7]。在Nikon ECLIPSE TE 2000-U顯微鏡（日本Nikon公司）下對染色結果取像，在進行密度掃描過程中經Motie Med 6.0數碼醫學圖像分析系統，檢測兩組牙髓組織NGF染色陽性細胞著色面積密度（AD）、平均光密度值（AOD）以反映NGF表達強度，分析牙髓組織NGF表達強度與牙齒疼痛程度的相關性。

1.4 統計學處理 應用SAS 8.1統計軟件；計量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗；相關性分析采用直線相關；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細胞AD與AOD比較見表1。

表1 兩組牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細胞AD與AOD比較

由表1可見，兩組牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細胞AD與AOD比較差異均有統計學意義（均P＜0.05），觀察組安裝矯治器后1、3d牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細胞AD與AOD均高于對照組（均P＜0.05），觀察組安裝矯治器后3d的牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細胞AD與AOD均高于安裝矯治器后1d（均P＜0.05）。

2.2 牙髓組織NGF表達強度與牙齒疼痛程度的相關性分析見表2。

表2 牙髓組織NGF表達強度與牙齒疼痛程度的相關性分析

由表2可見，隨著牙齒疼痛程度的增強，牙髓組織NGF染色陽性細胞AOD逐漸升高，即正畸力作用下牙髓組織NGF表達強度與牙齒疼痛程度呈高度正相關（r=0.867，P＜0.05）。

3 討論

患者口腔正畸治療初期普遍存在輕微的瞬時炎癥反應，可能引發矯治器加力后幾天內的不適[8]。研究表明，正畸治療初期，常規加力雖然不會改變牙髓組織，但卻會增強牙髓組織內一些生物活性物質的表達，如NGF等，調節血管反應及疼痛反應[9]。NGF是一種多功能多肽生長因子，屬于神經營養素家族一員，在炎性疼痛中，NGF會引發疼痛，并維持疼痛狀態[10]，且牙髓組織NGF的表達強度會在牙齒機械損傷后發生相應變化[11]。正畸力作為一種機械損傷，作用于牙齒后可能會改變牙髓組織的NGF表達。

牙髓神經主要包括無髓C類纖維、少量有髓A類纖維，前者主要感受慢性鈍痛，缺乏明確的定位；后者主要感受急性銳痛，具有明確的定位[12]。研究發現，貓牙牙髓組織NGF受體不表達于恒牙牙髓血管壁中，而表達于未發育成熟的牙髓血管壁中；不表達于有髓神經纖維中，而表達于無髓神經纖維、大多數游離神經末梢中，同時高表達于髓腔周邊的成纖維細胞中，具有特異性的分布特點[13]。本研究結果表明，觀察組安裝矯治器后1、3d牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細胞AD與AOD均高于對照組；隨著牙齒疼痛程度的增強，牙髓組織NGF染色陽性細胞AOD逐漸升高，即正畸力作用下牙髓組織NGF表達強度與牙齒疼痛程度呈高度正相關。這一結果與徐卿朝等[13]的研究結果相符，說明NGF可能在正畸力作用下參與調節牙髓疼痛。原因可能是在正畸加力初期，NGF具有較高的表達強度，提供了形成新生血管的良好條件，且通過NGF受體使感覺神經元接受興奮性刺激，從而產生痛感[14]。