力克菲隆抗炎鎮痛實驗研究

劉瀟然，李鳳新，王巍巍，孫振國，朱 峰，王煥群

非甾體抗炎藥是目前廣泛應用于治療急性和慢性炎癥及疼痛的藥物.傳統的非甾體抗炎藥和選擇性環氧化酶-2（COX-2）抑制劑都主要通過抑制環氧化酶（COX）減少炎癥過程產生的前列腺素發揮作用［1］.非甾體抗炎藥普遍應用于牙痛、腰背疼痛、外傷或手術后疼痛以及癌癥疼痛的治療，并且研究表明，非甾體抗炎藥物不存在依賴性的特點.經過多年對此類藥物的研究開發出很多新藥.非甾體抗炎藥是目前全球應用廣泛的一類消炎鎮痛類藥物.

力克菲隆，化學名為6-（4-氯苯基）-2，2-二甲基-7-苯基-2，3-二氫-1H-吡咯里嗪-5-乙酸，代號ML3000，是首個環氧合酶／脂氧合酶（COX／LOX）雙靶點抑制劑，具有雙重抗炎作用，是新一代的非甾體抗炎藥［2］，與傳統的抗炎藥相比，力克菲隆對胃腸刺激較小，耐受力更好.

本研究通過分別采用小鼠扭體法、熱板法、甩尾法研究力克菲隆的鎮痛作用；采用耳腫脹法、足腫脹法以及棉球肉芽腫法研究其抗炎作用.本研究為闡明力克菲隆藥理作用機制提供實驗依據.

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑

受試藥：力克菲隆，化學名6-（4-氯苯基）-2，2-二甲基-7-苯基-2，3-二氫-1H-吡咯里嗪-5-乙酸，由本研究院合成室提供.陽性對照藥物：布洛芬緩釋片，西南藥業股份有限公司，生產批號101208；對乙酰氨基酚緩釋片，成都恒瑞制藥有限公司生產，生產批號H19990360.致痛劑，0.6%冰醋酸.致炎劑二甲苯，分析純，長春市化學試劑廠，生產批號930617.致炎劑，自制10%雞蛋清溶液.

1.2 儀器

GJ-8402型熱板鎮痛儀，寧海白石電子醫藥儀器廠；SW200-尾痛儀，成都泰盟科技有限公司；打孔器，JE1002電子天平，上海浦春計量儀器有限公司；PV-200足趾容積測量儀，成都泰盟科技有限公司.

2 方法

2.1 扭體法［3］

動物：昆明種小鼠，18～22g，雌雄各半.購于長春生物制品研究所.合格證號：SCXK（吉）2006-0001.取上述小鼠，隨機分為5組，每組10只.陽性藥組給予布洛芬緩釋片100mg/kg，受試藥高、中、低三個劑量組分別給予力克菲隆100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg，藥 品 均 用 0.5%CMC-Na配制混懸液.連續灌胃給藥3天，末次給藥后1h，每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.1ml/10g，記錄注射致痛劑20min內小鼠扭體次數.比較組間差異.

2.2 熱板法［3］

取昆明雌性小鼠50只，體重18～22g，購于長春生物制品研究所.合格證號：SCXK（吉）2006-0001.隨機分為5組，每組10只.將熱板鎮痛儀調節至55℃，加熱后作為熱刺激，記錄小鼠自投入熱板至舔后足的時間作為該鼠痛閾值.給藥前測定每只小鼠痛閾2次，5s≤x≤30s為合格.力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混懸液，高劑量100mg/kg、中劑量50mg/kg、低劑量25mg/kg，陽性藥給予布洛芬100mg/kg，連續灌胃給藥3天，對照組給予同體積溶媒20ml/kg，末次給藥0.5h后開始測定每只鼠痛閾，1h，2h，3h各測一次，痛閾值超過60s按60s計.

2.3 甩尾法［3］

取大鼠50只，體重150～180g，雌雄各半，吉大白求恩醫學院實驗動物中心，SCXK-（吉）2008-0005.隨機分為5組，每組10只.將大鼠置于固定筒內，開始測定每只鼠痛閾，痛閾少于3s或大于10s的大鼠棄去不用.力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混懸液，高劑量200mg/kg、中劑量100mg/kg、低劑量50mg/kg，陽性藥給予對乙酰氨基酚200mg/kg，連續灌胃給藥3天，對照組給予同體積溶媒20ml/kg，末次給藥1h后開始測定每只鼠痛閾，1h，2h，3h，4h各測一次，痛閾值超過12.5s按12.5s計.

2.4 小鼠耳腫脹法［3］

取雄性小鼠50只，25～30g，購于長春生物制品研究所.合格證號：SCXK（吉）2006-0001.隨機分為5組，每組10只.力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混懸液，高劑量100mg/kg、中劑量50mg/kg、低劑量25mg/kg，陽性藥給予布洛芬100mg/kg，連續灌胃給藥3天，對照組給予同體積溶媒20ml/kg，末次給藥0.5h后，小鼠右耳涂二甲苯0.02ml/只，4h后脫臼處死動物，剪下兩耳，用9mm打孔器在相同部位打下兩個耳片，稱重，以兩耳重之差作為腫脹度.

2.5 大鼠足腫脹法［3］

取大鼠50只，體重200～220g，隨機分為5組，每組10只.力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混懸液，高劑量為100mg/kg、中劑量為50mg/kg、低劑量為25mg/kg，陽性藥給予布洛芬100mg/kg，連續灌胃給藥3天，對照組給予同體積溶媒10ml/kg，末次給藥30min后，每鼠右后足跖部注射新鮮蛋清0.1ml，分別測量致炎前及致炎后30min，60min，120min，240min測定大鼠右足體積.

2.6 大鼠棉球肉芽腫法［3］

取Wistar大鼠 50只，200～220g.隨機分為 5組，每組10只.乙醚麻醉，于右腋下植入30mg±1mg滅菌棉球，手術當日開始給藥，力克菲隆用0.5%CMC-Na配成混懸液，高劑量為100mg/kg、中劑量為50mg/kg、低劑量為25mg/kg，陽性藥給予布洛芬100mg/kg，連續灌胃給藥7天，對照組給予同體積溶媒10ml/kg，末次給藥1h后處死動物，取出棉球，于70℃烘箱干燥12h，稱重，減去棉球重，得凈重.

3 結果

3.1 扭體法試驗結果

扭體法實驗結果表明，力克菲隆高、中劑量對醋酸致小鼠扭體反應有明顯抑制作用，與對照組比較P＜0.01，P＜0.05.結果如表1.

表1 力克菲隆對醋酸致小鼠痛反應模型的影響（X±SD）

3.2 熱板法試驗結果

熱板法中力克菲隆給藥組痛閾時間較對照組明顯延長，表明本品有較強鎮痛作用.結果見表2.

3.3 甩尾法試驗結果

甩尾法中陽性藥痛閾時間較對照組明顯延長，力克菲隆僅高劑量組較對照組有一定作用，但鎮痛作用弱于對照組.結果見表3.

3.4 小鼠耳腫脹法試驗結果

小鼠耳腫脹法統計結果表明，力克菲隆各劑量組與對照組比較有顯著差異，P＜0.05，力克菲隆對二甲苯致小鼠耳腫脹有抑制作用.結果見表4.

3.5 大鼠足腫脹法試驗結果

大鼠足腫脹統計結果顯示，力克菲隆高、低劑量組與對照組比較有顯著差異，P＜0.05，表明本品對蛋清致大鼠足腫脹模型有抑制作用.結果見表5.

表2 力克菲隆對小鼠熱板致痛模型的影響（X±SD）單位：秒

表3 力克菲隆對大鼠尾痛反應模型的影響（X±SD）單位：秒

表4 力克菲隆對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響（X±SD）

表5 力克菲隆對蛋清所致足跖腫脹的影響（X±SD）

3.6 大鼠棉球肉芽腫法試驗結果

大鼠棉球肉芽腫法統計結果顯示，力克菲隆各劑量組與對照組比較有顯著差異，P＜0.05，表明力克菲隆有抗炎作用.結果見表6.

表6 力克菲隆對大鼠棉球肉芽腫的影響（X±SD）

本研究通過小鼠扭體試驗模型、小鼠熱板致痛模型、大鼠甩尾試驗模型、二甲苯致小鼠耳腫脹模型、大鼠棉球肉芽腫模型，以布洛芬為對照藥，研究了力克菲隆的抗炎鎮痛作用，結果表明力克菲隆有較強抗炎鎮痛作用，其鎮痛作用優于布洛芬.

4 討論

關節炎是一種常見病，癥狀發作期多以疼痛腫脹為發病特點，患者需要用各種方式來控制和緩解疾病.因此，實驗設計了急性期炎癥疼痛模型，即二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠扭體反應、熱板致小鼠疼痛，以觀測力克菲隆對炎癥疼痛的抑制作用.本實驗結果表明，力克菲隆可抑制二甲苯致小鼠耳腫脹，與對照組相比具有統計學意義（P＜0.05）.同時，力克菲隆能夠抑制醋酸所致小鼠腹腔黏膜引起的疼痛反應，減少扭體次數，與對照組相比有顯著差異（P＜0.05或P＜0.01），力克菲隆能夠提高小鼠熱刺激體表的痛閾，3h內作用明顯.水腫是炎癥過程中的早期病理變化，纖維組織增生和肉芽屏障的形成是晚期炎癥的特征［5］，本實驗結果表明，力克菲隆對蛋清引起小鼠足腫脹4h內作用明顯（P＜0.05），且能明顯抑制小鼠棉球肉芽腫（P＜0.05），表明其對炎癥早期有顯著的預防作用，且對炎癥后期亦有顯著效果，說明力克菲隆具有顯著的抗炎鎮痛活性，且與計量呈正相關.

由于非甾體抗炎藥抗炎和鎮痛作用強，通常作為骨關節炎治療的常用藥物，然而其對胃腸道的不良反應［6］以及選擇性COX-2抑制劑也會增加心血管不良事件的風險［7-10］.力克菲隆作為新一代非甾體抗炎藥不僅可以阻滯環氧合酶COX-1、COX-2，還可以阻滯5-脂氧合酶LOX，它可以保護患者的胃黏膜以及降低心血管不良事件的風險［11］.本實驗結果表明，力克菲隆有較強的抗炎作用.由于其抗炎鎮痛作用明確且安全性高，患者可長期服用，所以它具有良好的市場開發價值.