乙肝病毒標記物陽性表型血清標本HBV-DNA的檢驗分析

楊漢才 甘保波 黃麗君 莫家金

廣東省羅定市人民醫院，廣東羅定 527200

乙型病毒性肝炎臨床主要表現為肝臟炎性病變特點，嚴重損害青少年健康，受到世界范圍內關注。如延誤診治，部分患者惡化為肝癌或肝硬[1]。這就需要開展HBV診斷與治療工作。一般臨床在診斷標準中納入特異血清病原學檢查及肝功能檢查，在滿足條件情況下，檢測HBV-DNA、DNA-p等，以此較好辨別疾病[2]。感染復制情況不容易判斷，一些時候有漏洞出現。僅利用陽性表型指標無法很好辨識疾病，也不能展現患者體內乙肝病毒活動狀況，使得病情評估不正確，發生較高誤診率，阻礙患者治療，帶來較高死亡率。定量PCR法的使用，可直接了解患者體內HBV復制與傳染性，且便于選取治療方案，準確判斷療效。為準確評估乙型病毒性肝炎，本院2016～2017年本院387例表面抗原陽性的患者采用熒光定量PCR（FQ-PCR）法檢測患者乙肝病毒標記物陽性表型血清標本HBVDNA情況，現將具體情況分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016～2017年本院900多例表面抗原陽性的患者中選取387例作為研究對象，全部實施乙肝DNA檢測。取387例HBV標記物模式的血清標本。全部患者中男200例，女187例；年齡17～67歲，平均（45.8±4.1）歲；體質量40～86kg、平均體質量（68.8±11.5）kg；單身150例，有配偶237例。

1.2 方法

乙肝兩對半使用英科新創的試劑。乙肝DNA定量試劑使用達安基因試劑。乙肝兩對半所用儀器：帝肯EVO-2dinical150/8。SIEMENS BEPⅢ；乙肝DNA定量所用儀器：羅氏cobasZ480實時熒光定量PCR系統、生物安全柜、上海安亭TGL-16gR高速冷凍離心機、杭州博日CHB-202恒溫金屬浴等。按照操作要求進行，通過酶聯免疫吸附試驗（ELISA法）檢測乙肝病毒標記物陽性表型血清標本。通過FQ-PCR法定量分析并檢測乙肝病毒標記物陽性表型血清標本HBV-DNA，嚴格遵照操作要求開展。陽性，＞1.00+002IU/mL，陰性，＜1.00+002IU/mL。

1.3 評價標準

乙肝五項也稱為乙肝兩對半，依次為：（1）乙 肝 表 面 抗 原（HBsAg）、（2）乙 肝 表 面 抗 體（抗 -HBs）、（3）乙肝 e 抗原（HBeAg）、（4）乙肝e抗體（抗 -HBe）、（5）乙肝核心抗體（抗 -HBc）。其中，加號是陽性減號是陰性，分析并統計乙肝病毒標記物陽性表型血清標本HBV-DNA熒光定量測定結果。

1.4 統計學處理

將本次研究數據輸入統計學軟件SPSS22.0表格中，顯著性檢驗組間乙肝病毒標記物陽性表型血清標本HBV-DNA陽性率。采用統計學軟件SPSS18.0版對數據進行統計分析，計量資料以（±s ）表示，采用t檢驗，計數資料以百分數（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乙肝病毒標記物陽性表型血清標本HBVDNA定量測定結果

HBV-DNA定量測定結果可知，在疑似乙肝患者血清標本387例中，HBV-DNA陽性187例，陰性200例，定量最高及最低分別為7.70E+009IU/mL、2.71E+003IU/mL。

2.2 乙肝病毒標記物陽性表型血清標本HBVDNA定量測定與HBV-M的關系

從ELLSA法檢測乙肝5項與熒光定量PCR法檢測結果情況看，與大三陽組相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 乙肝病毒標記物陽性表型血清標本HBV-DNA經ELLSA法檢測乙肝5項與熒光定量PCR法檢測結果分析

3 討論

乙型肝炎因為HBV而誘發的一類肝炎性疾病，這種疾病嚴重威脅人類健康及生命，是引起肝衰竭、肝硬化等不容忽視的一類因素[3]。這種疾病受到世界范圍內關注，乙型肝炎診療歷史較長，我國乙型肝炎患病率非常高，受到各臨床學者重視，國內感染HBV人群較多。所以，預防與診療乙型肝炎具有突出的意義。

HBV表面標記物及乙肝5項如乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（抗 -HBs）、乙肝 e抗原（HBeAg）、乙肝 e抗體（抗 -HBe）、乙肝核心抗體（抗-HBc）依然被廣泛地應用，同時表面標記物在檢測患者傳染性與病程方面起到突出作用，通過HBV表面標記物與乙肝5項在診治疾病方面已經有一段時間，且得到普遍使用，表面標記物在傳染性疾病檢測方面起到重要價值，而ELISA檢測方法因為受限于自身靈敏度影響其中病毒復制水平不高，如病毒復制水平較低，這種檢測手段會使個體出現漏診或誤診情況[3]。對這種疾病的診斷在以上方法基礎上，診斷乙型肝炎患者上述五項外，然后結合血清HBV-DNA深入分析，如此較為科學、準確性，也更有效[4]。

PCR技術用于HBV-DNA水平定量檢測當中，可用作HBV感染非常精確的一項指標，其在HBV復制、感染等一些方面發揮了突出作用[5-6]。而因為PCR測定需要昂貴儀器設備，且對醫師人員提出了較高要求，無疑阻礙了這項技術使用[7]。

FQ-PCR為臨床基因診斷提供了有效途徑，定量HBV-DNA，真實呈現了HBV感染、復制狀況，修正ELISA測定結果解釋，完全封閉管檢測的應用，無需進行PCR后處理，防止了交叉感染的出現；且使用實時檢測技術，獲得的Ct值與原始模板數量表現出一種線性關系，具有非常高定量準確率，相比普通PCR，更為靈敏，同時因為熒光探針的使用，以光電傳統形式直接探測PCR擴增中熒光信號變化所得的定量結果，為此，具有非常高的光譜高精確性及DNA雜交高特異性，解決了常規PCR諸多不足，用于臨床早期疾病診斷中，用于疾病評估及治療結果的診斷[8]。

在臨床診斷HBV感染經常使用的手段是ELISA法檢測，這種檢測是人體對HBV的免疫反應狀態，也是現階段診斷乙型肝炎比較常用的一項指標。HBeAg陽性者具有非常高的HBV-DNA定量陽性，從中可見，ELISA法檢測乙肝兩對半是非常不錯的監測手段，但FQ-PCR能夠準確無誤呈現HBV-DNA復制水平變化，便于觀察疾病病程及治療效果。

有學者證明乙型肝炎HBsAb發生后，血清中依然存在DNA復制，而時間推移下，HBV-DNA的檢出率開始減少[9]。鮑淑華[10]研究指出，對觀察組進行具體比較后，活動期標記物表型和非活動期標記物表型比非活動期HBV-DNA水平要高，以鑒別病毒復制水平的形式引導臨床病情診治，這和此次研究結果有相似之處，為實驗實施創造了良好條件。有研究[11]在ELISA檢測基礎上，采用PCR技術通過HBV-DNA檢測手段測定各乙肝病毒標記物陽性表型組合，在各種陽性組合當中，乙型肝炎E抗體HBeAb、乙肝表面抗原HBsAg、乙肝核心抗體HBcAb中HBV-DNA水平為（5.4±1.3）E+004IU/mL。具有最高陽性組合比例，這個比例達到30.9%，乙肝表面抗原HBsAg、乙型肝炎E抗原HBeAg、乙肝核心抗體HBcAb陽性等組合中中HBVDNA水平為（1.2±0.3）E+004IU/mL。然后比例達至22.8%，（HBV-DNA水平在陽性組合ELISA檢測出中有時會比其余組合低）乙肝病毒的高復制性，使其具有一定威脅性，僅借助陽性率檢測，不能準確無誤評估病情，如在其實驗當中，比較并分析兩組HBV-DNA水平，得知觀察組HBV-DNA水平偏高，通過分析病毒復制水平來指導乙型病毒性肝炎的評估。

在本次研究中，結果：HBV-DNA陽性、陰性例數分別為187例、200例，定量最高、最低分別為7.70E+009IU/mL、2.71E+003IU/mL。和大三陽組比起來，差異有統計學意義（P＜0.05）。表明，通過酶聯免疫吸附試驗（ELISA法）、FQ-PCR法定量分析乙型病毒性肝炎HBV-DNA含量，具有較高診斷率，為患者臨床治療提供了合理有效的措施，從一定程度上可以體現機體HBV復制與感染狀況[12-14]。

總之，通過酶聯免疫吸附試驗（ELISA法）、FQ-PCR法定量分析可準確呈現HBV-DNA復制情況，防止漏診及誤診情況發生，此種檢測手段成本低，操作較為方便，以此更好指導實踐研究。