天王補心丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究進展

曹亮亮

（南京市中醫(yī)院，江蘇 南京 210022）

天王補心丸由地黃、炒酸棗仁、麥冬、五味子、玄參、丹參、遠(yuǎn)志等十多味藥材組方而成，可滋陰養(yǎng)血、補心安神，主用于心陰不足、心悸健忘、失眠多夢、大便干燥等。該方劑最早可追溯自宋代陳自明《婦人大全良方》卷六，后經(jīng)明代薛已校注。明代洪九《攝生總要》中亦有記載“治心血不足，神志不寧，津液枯竭，健忘怔忡，大便不利，口舌生瘡等證。”現(xiàn)代醫(yī)學(xué)報道表明［1-3］，天王補心丸臨床可治療失眠、焦慮、抑郁、神經(jīng)衰弱、甲狀腺功能亢進引起的眩暈等。2015 年版《中國藥典》一部成藥制劑中對其進行了收載，近年來亦有文獻(xiàn)采用高效液相聯(lián)合蒸發(fā)光散射檢測器、原子熒光光譜、電感耦合等離子體質(zhì)譜、數(shù)字化指紋圖譜、毛細(xì)管電泳指紋圖譜等技術(shù)，對該方中藥味的成分進行了定性、定量檢測。本文查閱藥典及近年相關(guān)文獻(xiàn)，對天王補心丸鑒別、檢查、含有量測定、指紋圖譜方面的研究進展進行整理和綜述，以期為提高和完善天王補心丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一定的參考和依據(jù)。

1 鑒別

2015 年版《中國藥典》一部［4］中，天王補心丸項下以原兒茶酸、石菖蒲和甘草的對照藥材為對照，對處方中的五味子、石菖蒲和甘草3 味藥進行薄層鑒別，并收載了方中11 個藥味的顯微特征；天王補心丸（濃縮丸）項下以當(dāng)歸、桔梗的對照藥材為對照，對方中此2 味藥進行薄層鑒別，并收載了茯苓、黨參、麥冬、朱砂的顯微特征。

王慧［5］分別以棘苷、酸棗仁及遠(yuǎn)志為對照，點樣于硅膠GF254薄層板，以乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸（4∶1∶1∶0.5）為展開劑，分別噴以1% 三氧化鋁-乙醇溶液、5% 茴香醛-硫酸溶液，105 ℃加熱顯色，建立了天王補心丸中酸棗仁、遠(yuǎn)志的定性鑒別方法；以麥冬、地黃、丹參為對照，GF254薄層板，甲苯-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，可見光檢視用以鑒別地黃、丹參，噴以10% 硫酸-乙醇溶液，105 ℃加熱顯色，以鑒別麥冬［5］；以天冬、黨參為對照，GF254薄層板，乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）為展開劑，10%硫酸-乙醇溶液為顯色劑，105 ℃加熱顯色，以鑒別天冬、黨參［5］；以茯苓為對照，GF254薄層板，乙酸乙酯-甲醇-水（20∶1∶0.5）為展開劑，噴以10% 硫酸-乙醇溶液，105 ℃加熱顯色，以鑒別茯苓［5］；以柏子仁為對照，GF254薄層板，正己烷-乙酸乙酯（5∶1）展開，365 nm 紫外下檢視，以鑒別柏子仁［5］。李冰等［6］采用硅膠G 板，以麥冬對照藥材為對照，三氯甲烷-丙酮（4∶1）為展開劑，10%硫酸-乙醇顯色劑105 ℃加熱顯色，建立了麥冬的定性鑒別方法。

2 檢查

2015 年版《中國藥典》一部中天王補心丸檢查項注明：應(yīng)符合丸劑項下有關(guān)的各項規(guī)定（通則0108），均為劑型常規(guī)檢查，無限量檢查項目。鄭新元等［7］模擬人體胃腸道環(huán)境，用人工胃液提取天王補心丸中可溶性鉛、砷、汞，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）對其進行測定分析，建立了可溶性鉛、砷等有害元素的測定評價方法。

3 含有量測定

2015 年版《中國藥典》一部中天王補心丸含有量測定項下規(guī)定，本品含五味子以五味子醇甲（C24H32O7）計，水蜜丸每1 g 不得少于0.19 mg，小蜜丸每l g 不得少于0.13 mg，大蜜丸每丸不得少于1.22 mg；天王補心丸（濃縮丸）項下規(guī)定，本品每l g 含丹參以丹酚酸B（C36H30O16）計，不得少于1.0 mg。

3.1 酸棗仁 天王補心丸方中酸棗仁具養(yǎng)心安神之功效，其中的酸棗仁皂苷A、棘苷成分的鎮(zhèn)靜、催眠作用已有諸多報道。何新榮等［8］采用高效液相色譜法聯(lián)合蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ELSD）對天王補心丸中酸棗仁皂苷A 含有量進行測定，測得3 批天王補心丸中酸棗仁皂苷A 含有量分別為0.274 2、0.271 8、0.275 0 mg／g，酸棗仁皂苷A 的線性范圍為22.5～360 μg／mL（R2=0.999 6），平均回收率99.24%（RSD=1.37%），與此同時還對樣品中酸棗仁皂苷B 進行了檢測，但可能由于其含有量較低［9-10］且蒸發(fā)光散射檢測靈敏度限制而未能測出。謝媛媛等［11］建立了高效液相技術(shù)測定天王補心丸中棘苷含有量的方法，測得自制模型制劑及4 個批號市售樣品中棘苷的含有量分別為0.115、0.052、0.051、0.049、0.038 mg／g，棘 苷 線 性 范 圍 為0.002 5～0.075 0 g／L（r=1.000 0），平均回收率100.5%（RSD=1.6%）。

3.2 丹參 楊芳等［12］運用反相高效液相色譜法測定了3個批次樣品中丹參素的含有量，分別為0.031 4、0.040 9、0.047 7 mg／g，在0.15～1.5 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 6），平均回收率99.1%（RSD=1.8%）。孫雪［13］建立了測定天王補心丸中丹參素鈉含有量的高效液相方法，丹參素鈉在12.8～128.0 μg／mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 1），平均回收率94.6%（RSD=1.9%）。張化然［14］測定了7 批樣品中丹酚酸B 的含有量，其范圍為3.24～3.38 mg／8 丸。孫裕等［15］測定了10 批天王補心丸（濃縮丸）中丹酚酸B 含有量，其范圍為0.421 8～2.042 0 mg／g。張玲等［16］運用薄層掃描技術(shù)測定了天王補心丸中原兒茶醛的含有量，方法簡便快速，靈敏度高，重復(fù)性好。

3.3 五味子 秦明秀等［17］測定了3 個批次天王補心丸中五味子甲素的含有量，分別為0.11、0.09、0.08 mg／g，在0.101 3～1.013 0 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），平均回收率101.2%（RSD=1.5%）。孫小玲等［18］建立了快速高分辨液相色譜（RRLC）同時測定天王補心丸中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素6 種主要木脂素成分的方法，在測定范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系（r＞0.999 0），平均回收率分別為 100.1%、99.3%、97.8%、99.1%、98.8%、97.5%，RSD 分別為1.1%、1.8%、2.3%、2.5%、1.6%、2.1%，該方法能獲得比普通色譜柱更高的柱效，縮短分析時間，且比超高效液相操作簡單、易行。熊建國等［19］測定了4 批天王補心丸中五味子醇甲的含有量，分別為0.377 8、0.380 7、0.380 4、0.377 0 mg／g。

3.4 地黃 楊仕林等［20］采用反相高效液相色譜技術(shù)建立了天王補心丸中梓醇含有量的測定方法，在2.004～20.046 μg／mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 3），平均加樣回收率99.9%（RSD=2.2%，n=9），3 批樣品中每丸平均含有量分別為1.1、0.98、0.98 mg。

3.5 遠(yuǎn)志 董曉兵等［21］建立了高效液相技術(shù)測定天王補心丸中細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含有量的方法，其線性范圍為10～500 μg／mL，平均回收率97.5%（RSD 均小于3.0%），最低檢出質(zhì)量濃度為5.50 μg／mL，靈敏度較高。同時也運用蒸發(fā)光散射檢測器進行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方法靈敏度低，不如紫外檢測器。

3.6 當(dāng)歸 劉旺培等［22］建立了高效液相法測定天王補心丸中阿魏酸含有量的方法，在0.091 2～2.280 0 μg／mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 8），精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的RSD＜3.0%，平均加樣回收率98.96%，RSD 0.26%，可作為天王補心丸中阿魏酸的質(zhì)量控制方法。

3.7 其他 朱砂是天王補心丸重要藥味，對心悸易驚、失眠多夢、小兒驚風(fēng)等證療效甚好，但其主要成分為硫化汞（HgS），若劑量超標(biāo)會對神經(jīng)、腎臟及生殖系統(tǒng)產(chǎn)生不良反應(yīng)。羅沉等［23］建立氫化發(fā)生-原子熒光光譜技術(shù)測定天王補心丹中汞含有量，檢出限為0.038 7 μg／L（RSD 均小于1.5%），加樣回收率106.0%～113.7%，方法簡便快捷，重復(fù)性好。鄭興［24］利用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定了3個不同廠家天王補心丸中22 種微量元素的含有量，發(fā)現(xiàn)不同廠家樣品中元素種類總體相似，可為探討其與藥效的相關(guān)性提供依據(jù)。

4 指紋圖譜

中藥數(shù)字化指紋圖譜是借助合理的數(shù)學(xué)建模規(guī)范處理中藥色譜指紋圖譜，將中藥中許多復(fù)雜的化學(xué)和生物活性特征的綜合信息轉(zhuǎn)變?yōu)榱炕臄?shù)字，建立一系列參數(shù)和相應(yīng)的一整套比較規(guī)則和計算公式，從而進行中藥的質(zhì)控、質(zhì)檢的一種技術(shù)［25-27］。王熒熒等［28］以12 批市售天王補心丸制劑為研究對象，采用高效液相數(shù)字化指紋圖譜技術(shù)對其進行分析，圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜超信息特征數(shù)字化評價系統(tǒng)3.0”軟件進行評價，并采用系統(tǒng)指紋定量法鑒定12 批樣品的化學(xué)成分?jǐn)?shù)量、分布比例和化學(xué)成分整體含有量差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用宏定性相似度Sm 和宏定量相似度Pm 評價出12 批市售制劑的藥效物質(zhì)工藝收率總體偏低，可為其處方改進提供參考。

王熒熒等［29-30］率先采用正方形優(yōu)化法選擇背景電解質(zhì)，利用色譜指紋圖譜指數(shù)（F）優(yōu)化試驗條件，對12 批天王補心丸進行聚類分析，確定用其中11 批生成對照毛細(xì)管電泳指紋圖譜，以此圖譜為標(biāo)準(zhǔn)，采用系統(tǒng)指紋定量法評價樣品質(zhì)量；以阿魏酸為參照峰，確定了14 個共有峰，建立了天王補心丸毛細(xì)管電泳指紋圖譜，可為其質(zhì)量控制提供了新思路。

劉萍等［31］運用二極管陣列檢測器（PDA）與蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）串聯(lián)-高效液相技術(shù)建立天王補心丸的指紋圖譜，將全方組與缺桔梗組、桔梗組與單獨桔梗組、單獨酸棗仁組指紋圖譜進行比較，同時比較各組樣品提取率，發(fā)現(xiàn)全方組提取率明顯高于缺桔梗組，桔梗+酸棗仁組提取率明顯高于桔梗組、酸棗仁組；HPLC-PDA、HPLCELSD 指紋圖譜中各組分分離度較好，具有理想的相關(guān)性和互補性。以上從化學(xué)成分角度闡述了桔梗在方中的舟揖作用，證實了天王補心丸中配伍桔梗能增加其他藥味活性成分的溶出，起到了助溶作用。

5 總結(jié)與展望

近年來文獻(xiàn)在《中國藥典》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，對天王補心丸從薄層鑒別、檢查、含有量測定等角度都有一定程度上更加全面的補充研究與探索。鑒別方面增加了方中其他藥味（如酸棗仁、地黃、麥冬等），檢查方面關(guān)注了重金屬、砷鹽等，含有量測定方面針對藥典之外的功效明確成分（如酸棗仁皂苷A、棘苷、梓醇、6 種木脂素等）建立了簡便快捷、重復(fù)性好的測定方法。同時，運用數(shù)字化指紋圖譜、毛細(xì)管電泳指紋圖譜等技術(shù)建立了天王補心丸較為全面的質(zhì)量控制和評價方法。

然而，目前關(guān)于天王補心丸藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究較為缺乏，對其化學(xué)成分和藥理作用的探索仍處于起步階段，導(dǎo)致其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂缺乏更堅實的理論基礎(chǔ)與臨床依據(jù)。當(dāng)前隨著代謝組學(xué)、基因組學(xué)、腸道菌群等新技術(shù)的發(fā)展，可有助于探索天王補心丸藥效代謝途徑，為深入的功效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供思路，便于更好地完善其質(zhì)量控制方法，從而為臨床安全有效的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。