荔枝草化學成分的研究

溫建輝，倪付勇，李 明，謝 雪，王永香，吳 云，王振中，肖 偉?

（1.江蘇康緣藥業股份有限公司，江蘇 連云港 222001；2.中藥制藥過程新技術國家重點實驗室，江蘇連云港 222001）

荔枝草為唇形科鼠尾草屬植物荔枝草Salvia plebeiaR.Br.的全草，又名雪見草、蛤蟆草、皺皮草等，主要產自江蘇、浙江、安徽、河南、山東等地，資源豐富，首載于《本草綱目》，其味苦辛、性涼，歸胃、肺、腎經，具有清熱解毒、涼血止血、利尿消腫等功效，臨床上主要用于治療扁桃體炎、支氣管炎、崩漏、便血、腎炎水腫、痔瘡腫痛、陰道炎等。荔枝草的化學成分主要有萜類、黃酮類、苯丙素類及揮發油類，具有抗菌［1-2］、抗炎［3］、抗氧化［4］、抗腫瘤［5］等藥理活性，本實驗從中分離得到12 個化合物，其中化合物2、4、6～7、12 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Reveleris 中低壓制備色譜儀（美國Grace 公司）；AV-400 型核磁共振光譜儀（瑞士Bruker 公司）；AE240 電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo 公司）；Agilent 1290-6538 液質聯用儀（美國Agilent公司）；XT-5 顯微熔點測定儀（北京科儀電光儀器廠）；ZF-7 型三用紫外分析儀（上海嘉騰科技有限公司）；YMC-C18（粒徑50 μm，日本YMC 公司）；Sephadex LH-20（瑞士Pharmacia 公司）；柱色譜硅膠（200～300 目，青島海洋化工有限公司）；D-101型大孔吸附樹脂（天津海光化工有限公司）。95%乙醇（食用級，連云港長和酒業有限公司）；水（三蒸水，自制）；甲醇（色譜純，瑞典Oceanpak公司）；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇均為分析純（南京化學試劑有限公司）。

藥材于2015 年3 月購自安徽亳州藥材市場，經連云港康濟大藥房連鎖有限公司吳舟執業藥師鑒定為荔枝草Salvia plebeiaR.Br.全草，標本（20150301）保存于江蘇康緣藥業股份有限公司標本室。

2 提取與分離

荔枝草干燥全草15 kg 用水加熱回流提取2次，分別為2、1 h，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.05～1.10（25 ℃），離心，上清液經D101 大孔樹脂，以水、15%、45%、75%、95%乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液濃縮、凍干，分別得到相應洗脫部位312、408、396、213、106 g。取荔枝草75%乙醇洗脫部位100 g，經硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脫，TLC 檢識合并得7 個部分（Frs.1～7），Frs.1 經Sephadex LH-20 柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，得化 合 物9（11 mg）、10（3.2 g）、11（468 mg）；Frs.3 經Sephadex LH-20柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，再經制備液相，以60% 乙腈為洗脫劑，得化合物2（14 mg）、3（16 mg）、6（23 mg）、12（19 mg）；Frs.4 經Sephadex LH-20 柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，再經制備液相，以45%乙腈為洗脫劑，得化合物5（15 mg）；Frs.5 經Sephadex LH-20 柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，再經制備液相，以35%乙腈為洗脫劑，得化合物1（13 mg）、4（18 mg）；Frs.6 經Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫純化，再經制備液相色譜，以5% 乙腈為洗脫劑，得化合物7（16 mg）、8（13 mg）。

3 結構鑒定

化合物1：黃色粉末（甲醇），ESI-MSm／z：181.0 ［M+H］+。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.46（1H，d，J=15.8 Hz，H-7），7.02（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），6.90（1H，dd，J=8.2，1.9 Hz，H-6），6.76（1H，d，J=8.1 Hz，H-5），6.23（1H，d，J=15.9 Hz，H-8）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.8（C-9），147.8（C-4），147.6（C-3），147.5（C-8），124.9（C-1），122.8（C-6），117.8（C-7），116.8（C-5），115.3（C-2）。以上數據與文獻［6］一致，故鑒定為反式咖啡酸。

化合物2：無色針狀結晶（甲醇），ESI-MSm／z：121.0 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：8.00（2H，m，H-3，5），7.57（1H，tt，J=1.4，8.7 Hz，H-4），7.48（2H，t，J=7.5 Hz，H-2，6）；13CNMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.1（-COOH），132.0（C-1），134.0（C-4），130.7（C-2，6），129.4（C-3，5）。以上數據與文獻［7］一致，故鑒定為苯甲酸。

化合物3：無色針狀晶體（甲醇），mp 235～237 ℃，ESI-MSm／z：169.0 ［M-H］-1。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.07（2H，s，H-2，6）；13CNMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.4（-COOH），146.4（C-3，5），139.6（C-4），122.2（C-1），110.5（C-2，6）。以上數據與文獻［8］一致，故鑒定為沒食子酸。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm／z：193.0［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.58（1H，d，J=15.9 Hz，H-7），7.16（1H，d，J=1.9 Hz，H-2），7.08（1H，dd，J=1.9，8.2 Hz，H-6），6.80（1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.30（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），3.88（3H，s，3-OCH3）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：171.1（-COOH），146.8（C-7），150.5（C-4），149.4（C-3），127.8（C-1），124.0（C-8），116.5（C-6），116.1（C-5），111.7（C-2），56.4（3-OCH3）。以上數據與文獻［8］一致，故鑒定為阿魏酸。

化合物5：白色粉末；ESI-MSm／z：455.4［M-H］-1。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ：0.88（3H，s，H-26），0.94（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.99（3H，d，J=6.5 Hz，H-30），1.02（3H，s，H-23），1.05（3H，s，H-24），1.22（3H，s，H-25），1.24（3H，s，H-27），3.45（1H，dd，J=10.0，6.0 Hz，H-3），5.49（1H，t，J=2.5 Hz，H-12）；13CNMR（100 MHz，C5d5N）δ：39.1（C-1），28.2（C-2），78.2（C-3），39.4（C-4），55.9（C-5），18.8（C-6），33.6（C-7），40.0（C-8），48.1（C-9），37.3（C-10），23.7（C-11），125.7（C-12），139.3（C-13），42.5（C-14），28.7（C-15），24.9（C-16），48.1（C-17），53.6（C-18），39.4（C-19），39.5（C-20），31.1（C-21），37.5（C-22），28.9（C-23），16.6（C-24），15.7（C-25），17.5（C-26），24.0（C-27），180.0（C-28），17.6（C-29），21.5（C-30）。以上數據與文獻［9］一致，故鑒定為烏蘇酸。

化合物6：淺黃色粉末，ESI-MSm／z：179.2［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CD3OD），δ：6.18（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），6.76（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.92（1H，dd，J=2.1，8.4 Hz，H-6），7.01（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），7.52（1H，d，J=16.0 Hz，H-7）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：127.9（C-1），115.6（C-2），146.8（C-3），149.3（C-4），116.6（C-5），122.8（C-6），147.0（C-7），115.0（C-8），171.2（C-9）。以 上 數 據 與 文 獻［10］報道一致，故鑒定為咖啡酸。

化合物7：白色粉末，ESI-MSm／z：125.1［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.58（1H，brs，-NH），11.00（1H，brs，-NH），7.25（1H，J=5.0 Hz，H-6），1.72（3H，s，H-7）；13CNMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：165.4（C-4），152.0（C-2），138.2（C-6），108.1（C-5），12.3（C-7）。以上數據與文獻［11］一致，故鑒定為胸腺嘧啶。

化合物8：白色粉末，mp 240～243 ℃，ESIMSm／z：282.2 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.67（1H，s，NH-1），7.93（1H，s，H-8），6.48（2H，s，-NH2），5.69（1H，d，J=5.9 Hz，H-1′），4.39（1H，t，J=5.3 Hz，H-2′），4.08（1H，brs，H-3′），3.87（1H，d，J=3.4 Hz，H-4′），3.61（1H，dd，J=11.8，3.4 Hz，H-5′a），3.52（1H，dd，J=11.8，3.4 Hz，H-5′b）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：157.3（C-6），154.2（C-2），151.8（C-4），136.0（C-8），117.1（C-5），86.8（C-1′），85.6（C-4′），74.2（C-3′），70.8（C-2′），61.9（C-5′）。以上數據與文獻［12］一致，故鑒定為鳥嘌呤核苷。

化合物9：黃色粉末。ESI-MSm／z：269.2［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：6.78（1H，s，H-3），12.96（1H，s，5-OH），6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.47（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），7.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.91（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：164.4（C-2），103.0（C-3），182.0（C-4），161.6（C-5），99.0（C-6），163.9（C-7），94.7（C-8），157.5（C-9），103.9（C-10），121.4（C-1′），128.7（C-2′，6′），116.2（C-3′，5′），161.4（C-4′）。以上數據與文獻［13］一致，故鑒定為芹菜素。

化合物10：黃色簇狀結晶（甲醇），mp 238～240 ℃，ESI-MSm／z：425.4 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：3.75（3H，s，-OCH3），7.01（1H，s，H-8），6.86（1H，s，H-3），6.93（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，H-5′），7.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，H-6′），12.95（1H，s，OH-5），10.42（1H，s，OH-4′），5.11（1H，d，J=5.2 Hz，H-1″），3.29～3.75（6H，m，H-2″～6″）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：60.3（-OCH3），164.3（C-2），102.7（C-3），182.2（C-4），152.1（C-5），132.5（C-6），156.5（C-7），94.3（C-8），152.4（C-9），105.7（C-10），121.1（C-1′），128.6（C-2′，6′），116.0（C-3′，5′），161.4C-4′），100.2（C-1″），73.2（C-2″），77.3（C-3″），69.5（C-4″），76.7（C-5″），60.6（C-6″）。以上數據與文獻［14］一致，故鑒定為高車前苷。

化合物11：黃色粉末，ESI-MSm／z：315.3［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：13.05（1H，s，5-OH），7.40（1H，dd，J=2.0，8.1 Hz，H-6′），7.35（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.85（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′），6.63（1H，s，H-8），6.52（1H，s，H-3），3.70（3H，s，6-OCH3）；13CNMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：163.9（C-2），102.4（C-3），182.0（C-4），152.2（C-5），131.2（C-6），157.2（C-7），94.0（C-8），152.8（C-9），104.0（C-10），121.5（C-1′），113.2（C-2′），149.6（C-3′），145.7（C-4′），116.0（C-5′），118.9（C-6′），59.9（-OCH3）。以上數據與文獻［15］一致，故鑒定為澤蘭黃酮。

化合物12：無色針晶（氯仿），mp 170～172 ℃，ESI-MSm／z：151.2 ［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：9.84（1H，m，1-CHO），7.44（1H，m，H-2，6），7.06（1H，m，H-5），6.39（1H，dd，J=16.0，11.0 Hz，4-OH），3.97（2H，m，3-OCH3）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：190.9（1-CHO），151.7（C-4），147.2（C-3），129.9（C-1），127.5（C-6），114.4（C-5），108.8（C-2），56.1（3-OCH3）。以上數據與文獻［16］一致，故鑒定為香草醛。

4 討論

荔枝草作為民間常用藥材主要用于治療咽炎、扁桃體炎、氣管炎等疾病且效果顯著；據《四川中藥志》記載，荔枝草具有清肺熱、除風濕、治咳嗽、痢疾、牙痛、癢疹及瘡毒等功效。近年來隨著對荔枝草的深入研究，發現其具有廣泛的藥理活性，極具臨床應用價值，師梅梅等［17］通過荔枝草提取物對大鼠肝線粒體損傷保護作用研究表明，其可有效抑制線粒體的脂質過氧化反應和線粒體膨脹，降低蛋白質羰基量，恢復ATP 酶的活性，清除線粒體中產生的，且呈量效關系；楊澤華等［1］研究表明，荔枝草乙酸乙酯、正丁醇萃取部位在體外對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌具有良好的抑制作用；郭秋言等［18］發現，荔枝草醇提物質量濃度為675 μg／mL時能明顯抑制單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV-1）所致的CPE 產生，具有良好的藥理活性；孔慶新等［19］利用氨水刺激建立慢性咽炎大鼠模型后用不同濃度的荔枝草乙酸乙酯提取物灌胃治療一段時間后，通過行為觀察、咽部病理學觀察及酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測，發現其可顯著改善咽部的病理形態學表現。

荔枝草資源豐富，分布廣泛，除甘肅、新疆、青海、西藏外在全國各省均有分布［20］，許多中醫名著如《江西民間草藥驗方》《集效方》等有荔枝草治療咽喉痛、痔瘡、犬傷及破傷風的記載，現代臨床上用于治療帶狀皰疹［21-22］、小兒急性腎炎［23］、支氣管炎［24］等，其作為保健茶開發也有報道［25-26］。然而，作為一種傳統藥材，2015 年版《中國藥典》并未將荔枝草收錄其中，其質量標準、藥物代謝動力學、藥效學及安全性評價均有待于完善，因此，課題組通過對荔枝草化學成分的研究，制備含有量高于98%的單體化合物，為下一步藥理藥效的開展及指紋圖譜的建立提供物質基礎。