泰國在有豬呼吸道疾病綜合征農場中檢出豬圓環病毒3型

張愛瓊 ，梁海英，曾智勇 （編譯）

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

主持國家自然科學基金項目1項，省廳級項目3項；參研貴州省農業科技攻關項目5項，其他各類省廳(局)級項目13項；獲“貴州省科學技術進步獎三等獎”3項。先后發表各類學術論文180余篇，其中SCI論文3篇，一級學報論文12篇，核心期刊90余篇；參編養殖技術叢書3冊，參編專業類著作2冊，參編《畜牧獸醫行政管理學》（國家規劃教材）。

豬圓環病毒（Porcine circovirus，PCV）是圓環病毒科圓環病毒屬的單鏈無囊膜DNA環狀病毒。PCV含有兩個主要的開放閱讀框ORF1和ORF2，分別編碼Rep復制蛋白和Cap衣殼蛋白。目前已知其有三種基因型：PCV1、PCV2和最近發現的PCV3。2016年，Phan等在美國各地區的哺乳仔豬、9～10周齡患有心肌炎或呼吸系統疾病的育肥豬中首次檢測出PCV3；幾乎同一時間，Palinski等也從患有豬皮炎腎炎綜合征、繁殖障礙的母豬組織樣品中檢測出了PCV3，證實了PCV3的存在以及在美國的流行。隨后，Shen、Ku、Zheng等先后報道在中國華南、山東等地豬場也檢出PCV3；Kwon等對韓國6個道的73個不同養殖規模豬場進行PCV3檢測，檢出率較高；此外，Stadejek、Faccini、Tochetto等分別報道在波蘭、意大利、巴西的豬場中檢測出PCV3。這些報道表明：PCV3在許多國家和地區存在，已經遍及美洲、亞洲及歐洲。豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）是影響全球豬業的主要呼吸道疾病，該疾病的特征是豬只生長和飼料效率降低，臨床癥狀包括咳嗽、呼吸困難、發熱和厭食，多種病原體（PRRSV、PCV2和SIV）共同感染是導致PRDC的主要原因。介于PCV3在世界范圍內的廣泛流行且導致的臨床癥狀與PRDC有相似之處，Kedkovid 等對泰國患有PRDC的農場進行PCV3鑒定，確定PRDC感染豬群中是否有PCV3的存在。

Kedkovid等研究的樣本來自朱拉隆功大學獸醫診斷實驗室（CU-VDL）的組織收集庫，所有樣本均在2017年7月和9月從泰國巴真府的3000頭母豬群收集，包括新鮮冷凍組織、福爾馬林固定的石蠟包埋（FFPE）組織樣品、臨床上健康和顯示PRDC相關跡象的豬血清樣品以及20頭母豬1～4胎次的血清樣品。使用Palinski先前公開的引物進行PCV3的PCR檢測及全基因的擴增；通過將FFPE組織樣品進行蘇木精-伊紅（HE）染色以及用LK003的肺組織樣品進行原位雜交（ISH）來進行組織學檢測，其中ISH是將PCR DIG標記混合物靶向PCV3 ORF1的引物制備地高辛配基（DIG）探針，引物序列 F1：5′-ATACTGCAGGCATCTTCTCCG-3′，F2 ：5′-TATTGTGGAGTGTGGAGGCAGT-3′（ 預 擴 增片段大小336 bp），并以PCV3陰性豬（通過PCR鑒定）的肺組織切片和沒有DIG探針的LK003肺組織切片的ISH用作對照。最后對檢測結果使用GraphPad Prism 5進行統計分析。

研究結果表明：從8頭顯示PRDC相關臨床體征的豬組織（肺和淋巴結）樣品中檢測出有5頭PCV3呈陽性（LK000-LK004）。PCV3陽性動物的常見肉眼病變包括紅肺、硬肺、氣管支氣管和腹股溝淋巴結腫大；顯微鏡檢查病變為支氣管間質性肺炎、淋巴結壞死和淋巴結組織細胞增生，其中LK003顯示出最嚴重的病變，肺泡腔中的細胞碎片嚴重積聚并且單核細胞呈彌漫性的肺泡間隔增厚，類似于增殖性和壞死性肺炎（PNP），其他豬只沒有觀察到PNP相關病變。Kedkovid等通過PCR技術對PCV3基因組進行擴增與測序，從PRDC感染的農場豬群中鑒定出泰國PCV3株（PCV3/Thailand/PB01/17），GenBank登記號為MG310152，并且對其全基因進行分析，結果顯示泰國PCV3株與韓國PCV3/KU-1602菌株核苷酸同源性最高為99.60%。在該農場PRDC感染的豬中檢測出PCV3呈陽性的情況下，收集5～18周期臨床健康豬和PRDC相關臨床體征的豬血清樣品用于PCV3的PCV3檢測，檢測結果顯示受PRDC影響的豬PCV3感染率和PCV3病毒滴度與臨床健康豬相比更高。通過對血液樣品進行檢測，發現PRDC 感染豬（60%，15/25）中PCV3 病毒血癥的發生率顯著高于臨床健康豬（28%，7/25）。

總的講，在受PRDC影響的泰國農場豬群中鑒定出PCV3，與臨床健康豬相比，受PRDC影響的豬表現出更高的PCV3感染率和更高的PCV3病毒滴度，這些結果證實了泰國受PRDC感染的農場中存在PCV3。這是泰國第一份關于PCV3的報告，也是首個在農場受PRDC感染的豬群中對PCV3感染的研究。在感染PRDC后PCV3的發病機制還需要進一步的研究闡明，對于PCV3的致病性和可能帶來的危害還應開展更大規模的研究。