中藥復(fù)方多糖對(duì)雞傳染性法氏囊疫苗的免疫增強(qiáng)作用

方磊涵，王 留，郭全海,王中華

(商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 商丘 476100)

雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，簡稱IBD)是由法氏囊病毒(IBDV)引起雞的免疫機(jī)能障礙，導(dǎo)致雞的免疫力降低的一種急性、高度接觸性傳染病，一旦發(fā)病可導(dǎo)致雞的死亡率高達(dá)80%以上，由于該病的病原血清型和變異株較多，給疫苗免疫帶來了很大難度，造成養(yǎng)雞業(yè)嚴(yán)重?fù)p失[1]，[2]2-3.近年來，研究發(fā)現(xiàn)許多中草藥都具有免疫增強(qiáng)作用，主要通過促進(jìn)免疫器官發(fā)育來實(shí)現(xiàn)[3]812-814.隨著中藥的廣泛研究，中藥不僅可以增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫及體液免疫，而且還具有免疫抑制功能[4]156.大多數(shù)中草藥都含有多糖的活性成分，在激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫功能等方面表現(xiàn)出了很好的作用，并成為了中藥免疫增強(qiáng)劑的典型代表.

本試驗(yàn)利用中藥多糖成分的免疫增強(qiáng)作用，與IBD 疫苗配合使用，來探討中藥復(fù)方多糖和兩者混合使用對(duì)雞傳染性法氏囊疫苗免疫雛雞血清抗體效價(jià)及外周血淋巴細(xì)胞增殖變化的影響，旨在篩選出一種高效中草藥免疫增強(qiáng)劑，以提高雞的免疫力，同時(shí)為治療雞法氏囊病的藥理作用提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

中藥復(fù)方多糖(CHCP) 即選用黃芪、黨參、山楂、丹參、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、補(bǔ)骨脂、生地、熟地、馬齒莧、甘草12味具有補(bǔ)氣生津、活血化瘀、健脾和胃、溫腎壯陽、扶正祛邪的中藥(購于商丘市天倫大藥房)，由商丘華康動(dòng)物藥業(yè)有限公司提取其中的多糖而成，多糖含量為69.80%.

黃芪多糖(APS)： 由商丘市華康動(dòng)物藥業(yè)有限公司提供，含量為75%.

IBD活疫苗(B87株)：購自商丘市動(dòng)物疫病防控中心，青島易邦生物有限公司生產(chǎn).

IBD標(biāo)準(zhǔn)血清、抗原：標(biāo)準(zhǔn)抗原(批號(hào)：2013008)、陰性血清(批號(hào)：2013020)和陽性血清(批號(hào)：2013032)，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)，陽性血清AGP效價(jià)1∶128.

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇150羽1日齡羅曼蛋公雞，飼養(yǎng)至10日齡(母源抗體效價(jià)平均為1.0±0.0 Log2)選取120羽隨機(jī)分為4組，每組30只，14日齡和28日齡分別全部用1羽份的法氏囊疫苗點(diǎn)眼滴鼻，每次免疫的同時(shí)，第1組在基礎(chǔ)日糧中添加1%的中藥復(fù)方多糖，第2組在基礎(chǔ)日糧中添加1%的黃芪多糖，連續(xù)3 d，第3組為免疫不用藥疫苗對(duì)照組，第4組為不免疫不用藥空白對(duì)照組(見表1).

表1 試驗(yàn)雞的分組及處理

1.3 檢測指標(biāo)

首免后第7(D7)、14(D14)、21(D21)、28(D28)、35(D35)日，每組隨機(jī)抽取6只雞，翼下靜脈采血0.3 mL，分離血清，用瓊脂擴(kuò)散法(AGP)測定法氏囊特異性抗體滴度[5]127-128.首免后第7(D7)、21(D21)、35(D35)日，每組抽取5只進(jìn)行心臟采血，并用MTT法對(duì)外周血淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化率進(jìn)行測定[6]23-24.

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

用SPSS 15.0軟件進(jìn)行Duncan’s差異顯著性分析.

2 結(jié)果與分析

2.1 血清抗體效價(jià)的變化

由表2可見，在D7，各用藥組AGP效價(jià)明顯高于疫苗對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)；在D14，中藥復(fù)方多糖AGP效價(jià)顯著高于疫苗對(duì)照組(P<0.05)；在D 21和D28，中藥復(fù)方多糖組AGP抗體效價(jià)顯著高于黃芪多糖組和疫苗對(duì)照組(P<0.05)；在D35中藥復(fù)方多糖組AGP效價(jià)顯著高于疫苗對(duì)照組(P<0.05).

表2 各組抗體效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化(Log2)

2.2 外周血淋巴細(xì)胞增殖變化

由表3可見，各組OD570值的變化，首次免疫后第7 d和21 d，中藥復(fù)方多糖組OD570值顯著高于黃芪多糖組，后者顯著高于疫苗對(duì)照組(P<0.05)；首次免疫后第35 d，各用藥組的OD570顯著高于疫苗對(duì)照組(P<0.05)；與空白對(duì)照組相比，試驗(yàn)各組OD570均顯著提高.

表3 各組淋巴細(xì)胞增殖的變化

3 討論

3.1 中藥復(fù)方多糖對(duì)雛雞體內(nèi)抗體水平的影響

免疫增強(qiáng)劑具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、提高機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)的作用，在治療和預(yù)防傳染性疾病方面具有非常重要的作用[7]102-103.而抗體效價(jià)作為評(píng)價(jià)機(jī)體免疫狀態(tài)的主要指標(biāo)之一，在預(yù)防病原入侵和消滅病原體等方面起著重要作用，也是雞免疫后反映體液免疫功能的重要指標(biāo)[8]57.體液免疫主要是由T細(xì)胞輔助的B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體，是機(jī)體抵抗疫病的一個(gè)重要因素.抗體是由B細(xì)胞分泌產(chǎn)生的，而雞法氏囊又是B細(xì)胞發(fā)育成熟的主要場所，其抗體的形成在抵御和消除病原體等方面具有非常重要的作用，因此抗體水平的高低直接反映了機(jī)體免疫應(yīng)答水平的高低[9]50-52.張瑞婷[10]研究表明，用絞股藍(lán)微粉發(fā)酵液以1%、0.5%、0.25%的量添加在雞的日糧中，均可顯著提高雞新城疫和法氏囊抗體滴度(P<0.01或P<0.05)，并延長抗體的有效存活時(shí)間.王海龍[11]采用不同劑量的玉屏風(fēng)散拌入雞的飼料中，于21、28、35、42、49日齡對(duì)免疫后的雞進(jìn)行法氏囊病毒抗體測定，結(jié)果表明，玉屏散顯著提高雞血清中的IBDV抗體水平，以1%和0.75%的量添加效果最好.

本試驗(yàn)利用CHCP的免疫增強(qiáng)作用，與IBD 疫苗配合使用，測定法氏囊特異性抗體效價(jià)，結(jié)果顯示，中藥復(fù)方多糖能顯著提高雛雞免疫法氏囊疫苗后的抗體水平，效果優(yōu)于黃芪多糖組和疫苗對(duì)照組.胡元亮[12]3-5、張國祖[13]27-30的研究也得到了類似的結(jié)果.

3.2 中藥復(fù)方多糖對(duì)雛雞外周血淋巴細(xì)胞增殖變化的影響

外周血淋巴細(xì)胞的增殖水平能夠反映機(jī)體的細(xì)胞免疫.近年來，免疫激發(fā)型中藥對(duì)雛雞外周血淋巴細(xì)胞增殖變化影響方面有不少的報(bào)道，高雪麗等[14]907-909IBD疫苗免疫雛雞研究中發(fā)現(xiàn)，使用免疫增強(qiáng)劑“禽福、億妙靈”，均不同程度地提高了外周血液的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答水平，攻毒后疫苗保護(hù)率達(dá)到 80%以上，可見“禽福、億妙靈”起到提高疫苗的免疫活性，提高血清抗體水平的作用，從而有效抵抗病毒的攻擊.郭振環(huán)等[15]1015-1019按一定規(guī)律將硫酸化黃芪多糖、硫酸化淫羊藿多糖、硫酸化香菇多糖組成 4個(gè)復(fù)方 sPSP 1、sPSP 2、sPSP 3 和 sPSP 4，用四甲基偶氮唑藍(lán) (MTT)法測定淋巴細(xì)胞增殖情況，結(jié)果表明，4個(gè)復(fù)方可以單獨(dú)或協(xié)同 PHA、LPS顯著刺激雞脾淋巴細(xì)胞增殖、協(xié)同 ConA顯著刺激外周血淋巴細(xì)胞，以sPSP1、sPSP 2 的作用最強(qiáng).

本試驗(yàn)用MTT法測定外周血淋巴細(xì)胞增殖，中藥復(fù)方多糖能顯著提高雛雞免疫法氏囊苗后的淋巴細(xì)胞增殖，效果優(yōu)于黃芪多糖和疫苗對(duì)照組.這表明，中藥復(fù)方多糖具有很好的免疫增強(qiáng)作用.

4 結(jié)論

在雞的日糧中添加中藥多糖，能顯著提高雞免疫法氏囊疫苗后的抗體水平和淋巴細(xì)胞增殖，在增強(qiáng)免疫功能方面表現(xiàn)出了很好的作用，其效果明顯好于黃芪多糖，在臨床應(yīng)用上中藥復(fù)方多糖效果也要好于單味多糖的效果.因此，中藥復(fù)方多糖可作為免疫增強(qiáng)劑廣泛應(yīng)用于家禽的生產(chǎn)上，具有很好的研究價(jià)值與應(yīng)用前景.