腹瀉人群致瀉性大腸埃希菌的流行及病原特征分析

蔡 軍

（法庫縣衛生健康服務與行政執法中心檢驗科，遼寧 沈陽 110400）

腹瀉在臨床上較為常見，大多由病原菌感染所致[1]。研究發現，致瀉性大腸埃希菌（DEC）屬于引發腹瀉病的主要原因之一，且臨床可按照其攜帶毒力基因不同分為腸致病性大腸桿菌（EPEC）、腸產毒性大腸桿菌（ETEC）、腸黏附性大腸桿菌（EAEC）、腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）、腸出血性大腸桿菌（EHEC）等類型[2]。本次研究為證實這一點，選取152例有腹瀉癥狀患者的糞便標本，分析DEC流行及病原特征，報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源：選取2017年7月至2018年7月本縣152例有腹瀉癥狀患者的糞便標本，均為入院確診后服用抗生素前采集。癥狀：每日排便≥3次，糞便形狀異常，如膿血便、黏液便、稀便等。其中，男85例，女67例；18～45歲68例，46～60歲44例，＞60歲40例。

1.2 儀器與試劑：包括法國梅里埃公司比濁儀、美國Bio-Rad公司Gel Doc凝膠成像系統、北京陸橋技術有限責任公司大腸桿菌顯色培養基、北京ABT公司DEC多重檢測試劑盒、Amresco公司蛋白酶K等。

1.3 制備細菌DNA模板：在5 mL IEC肉湯內接種糞便標本，37 ℃下培養，持續18 h，取適量細菌，10000 r/min離心，持續5 min，取上清液。經滅菌超純水懸浮沉淀，細菌濃度3×109CFU/mL。100 ℃條件下水浴，持續10 min，冷卻。4 ℃條件下，1000 r/min離心，持續10 min，取1 μL上清，作為PCR模板。

1.4 多重PCR鑒定：PCR反應體系、條件：10×buffer 2.0 μL、dNTP 0.125 μmol/L，上游引物0.5 μmol/L，下游引物0.5 μmol/L，Taq DNA聚合酶0.25 μU；1 μL DNA模板，補充超純水，直至20 μL。94 ℃條件下預變性，持續5 min；94 ℃條件下變性，持續60 s；57 ℃條件下退火，持續60 s；75 ℃條件下延伸，持續60 s，共進行30個循環。最后，在72 ℃條件下延伸，持續10 min。以2%瓊脂糖電泳鑒定擴增產物。

1.5 細菌分離、鑒定：選取多重PCR檢測毒力顯示為陽性的培養液，在ECC顯色培養基內接種，實施分離培養。選取5個可疑DEC，實施單重PCR毒力基因鑒定，分化鑒定毒力基因陽性菌株。按照引物設計原則，合成12對毒力基因引物（aggR、escV、stx1、stx2、elt等）及通用引物uisA。按照毒力基因及生化鑒定結果明確DEC類型。

1.6 藥敏試驗：經瓊脂擴散法（K-B法）行藥敏檢測，按照美國國家臨床實驗室標準化委員會規定的抑菌環直徑法分析結果，分為敏感株、耐藥株、中介株（中等耐藥）。藥敏試驗質控菌株包括金黃色葡萄球菌ATCC 25922、大腸埃希菌ATCC25922等，均由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.7 統計學分析：數據以SPSS20.0軟件分析。計數資料以例數或百分比表示，用χ2檢驗對比。計量資料以平均值±標準差（±s）表示。P＜0.05表示有統計學差異。

2 結果

2.1 檢測結果：本組152例糞便標本經多重PCR檢測發現毒力基因陽性標本占10.53%（16/152）。陽性標本選取可疑菌落檢測，共檢出59株DEC。其中，33株為ETEC，18株為EAEC，5株為EPEC，3株為EHEC。58株DEC中，ETEC主要攜帶estlb（24株），EAEC主要攜帶astA（10株），EPEC主要攜帶escV（5株），EHEC主要攜帶stx2（3株）。

2.2 流行情況：男性DEC檢出率41.18%（35/85），女性則為35.82%（24/67），差異無統計學意義（χ2=0.452，P=0.501）；年齡18～45歲組檢出率54.41%（37/68），高于46～60歲組的27.27%（12/44）、＞60歲組的25.00%（10/40），差異有統計學意義（χ2=7.995、8.863，P=0.004、0.002）。

2.3 藥敏試驗：DEC對氨芐西林耐藥率最高，為47.46%（28/59），對亞胺培南敏感度最高，為0%。多重耐藥菌株占42.37%（25/59）。

3 討 論

DEC屬于腹瀉病一個重要病原。研究發現，DEC感染在細菌性感染腹瀉發生原因中占首位[3-4]。因此，臨床盡早經有效措施檢測DEC，可進一步了解腹瀉人群中感染情況，指導臨床診療。以往，臨床多采用常規方法檢測，但也具有操作時間長、檢出率等特點，且DEC血清分型較多，極易出現交叉凝結現象，增加檢測難度。本次研究中采用多重PCR毒力檢測，并聯合生化鑒定等，可提升檢出率。本研究調查發現，152例腹瀉患者糞便標本中DEC菌株檢出率為38.82%，與相關文獻[5]結果相符，提示DEC仍為引發腹瀉最常見致病菌。而在DEC類型上，本次研究多見ETEC，其次為EAEC、EPEC，EHEC菌株較少，僅為3株，分析是與所選病例、地域等因素有關。此外，不同性別患者DEC檢出率差異不顯著，與相關研究[6]結果相符。而在年齡上，18～45歲組檢出率最高，為54.41%，分析是因該年齡段青壯年生活習慣、飲食習慣、生活壓力等因素有關。多數DEC所致腹瀉患者可經臨床選擇恰當抗生素治療后獲得較好效果，但隨著抗生素濫用、誤用現象增多，耐藥菌不斷增多，影響治療效果。本次研究調查發現，DEC對氨芐西林耐藥率最高，但對亞胺培南較為敏感，故臨床可經由藥敏檢測結果，選擇恰當抗生素治療，以改善預后。

綜上所述，DEC為腹瀉發生主要致病菌，且多發于青壯年，臨床需加強耐藥檢測，以指導合理應用抗生素。