Notch-1和TMEM16A在食管鱗癌組織中表達(dá)及臨床意義

劉玉含 閆 琛 康運(yùn)凱 魏 攀

(鄭州人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450003)

食管癌主要類型為食管鱗狀上皮細(xì)胞癌，約占90%。食管癌發(fā)生涉及多個(gè)原癌基因、抑癌基因及其相關(guān)蛋白質(zhì)的改變〔1〕。Notch-1是Notch信號(hào)通路中4個(gè)Notch同源體之一，在細(xì)胞分化、發(fā)育、增殖和凋亡過程中起重要作用，在甲狀腺癌等一些惡性腫瘤中呈現(xiàn)抑癌基因表達(dá)〔2〕。TMEM16A是TMEM16膜蛋白家族成員之一，是鈣激活依賴性的氯離子通道分子基礎(chǔ)，在結(jié)腸癌等一些惡性腫瘤中異常高表達(dá)〔3〕。本文旨在探討Notch-1和TMEM16A蛋白在食管鱗癌發(fā)病機(jī)制中的作用及二者的相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1材料 2012～2013年鄭州人民醫(yī)院存檔的手術(shù)切除食管鱗癌標(biāo)本共55例，術(shù)前均未接受放療、化療或免疫治療。其中男35例，女20例；年齡<60歲為13例，≥60歲為42例。取距病變組織5 cm以上的食管正常組織55例為正常對(duì)照組。標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛溶液固定過夜，次日取材、脫水、石蠟包埋，連續(xù)切片，行HE染色及免疫組化染色。

1.2主要試劑 兔抗人TMEM16A多克隆抗體購自英國Abcam公司，羊抗人Notch-1多克隆抗體、免疫組化S-P試劑盒和DAB顯色劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3方法 采用免疫組化法對(duì)Notch-1和TMEM16A進(jìn)行染色，操作步驟按照試劑說明書進(jìn)行。用0.01 mmol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.4)替代一抗為陰性對(duì)照。以英國Abcam公司提供的陽性切片為陽性對(duì)照。Notch-1主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或黃褐色顆粒判讀為陽性細(xì)胞；TMEM16A表達(dá)于細(xì)胞膜上和細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞膜上或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或黃褐色顆粒判讀為陽性細(xì)胞。

1.4評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 觀察并記錄組織切片中的兩項(xiàng)指標(biāo)，染色陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分率和陽性細(xì)胞著色程度，綜合評(píng)估試驗(yàn)結(jié)果。組織切片中陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分比可分為4級(jí)：陽性細(xì)胞<10%，0分；10%～25%，1分；26%～50%，2分；>50%，3分。組織切片中細(xì)胞染色強(qiáng)度分為3級(jí)：未著色，0分；淡黃色，1分；棕褐色2分。2項(xiàng)指標(biāo)的結(jié)果相乘得到0分為(-)，≥1分為(+)。染色結(jié)果及評(píng)分由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生獨(dú)立操作進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1Notch-1和TMEM16A在正常食管和食管鱗癌中的表達(dá) 正常對(duì)照組和食管鱗癌組Notch-1、TMEM16A陽性率分別為96.36%(53/55)、14.55%(8/55)；47.27%(26/55)、55.36%(31/55)；二者比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2Notch-1和TMEM16A表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系 二者蛋白表達(dá)均與食管鱗癌分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；Notch-1蛋白表達(dá)還與TNM分期、浸潤深度有關(guān)(P<0.05)。見表1。

2.3食管鱗癌組織中Notch1和TMEM16A蛋白表達(dá)的相關(guān)性 Notch1與TMEM16A陽性表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.497，P=0.001)。

表1 食管鱗癌組織中Notch-1和TMEM16A陽性表達(dá)在不同臨床病理特征中的關(guān)系(%)

3 討 論

Notch基因最早是在果蠅中被發(fā)現(xiàn)，Notch信號(hào)通路是一種保守的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在多種組織及器官的早期發(fā)育過程中，可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、增殖和凋亡〔4〕。目前已發(fā)現(xiàn)的人Notch信號(hào)受體有4種(Notch-1、Notch-2、Notch-3和Notch-4)，其中最主要的為Notch-1，Notch-1信號(hào)激活可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞萌芽及血管管腔擴(kuò)大，從而抑制血管新生；信號(hào)阻斷可誘發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生〔5〕。除了調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生和凋亡外，Notch-1信號(hào)異常表達(dá)還可誘導(dǎo)腫瘤。目前在人類的許多惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)Notch-1受體的異常表達(dá)，但在不同組織的腫瘤及腫瘤發(fā)展的不同階段，Notch-1的作用可能不同：在結(jié)腸癌〔6〕中，Notch-1呈高表達(dá)狀態(tài)，可促進(jìn)腫瘤生成，起癌基因作用，在肺癌〔7〕中，Notch-1呈低表達(dá)狀態(tài)，起抑癌基因作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示Notch-1可能在食管鱗癌發(fā)病機(jī)制中起抑癌基因的作用。Notch-1有望成為食管鱗癌早期診斷和評(píng)估預(yù)后的輔助指標(biāo)之一。

鈣激活氯離子通道(CaCCs)是一類離子通道蛋白，廣泛分布于人體的多種組織，尤其是分泌器官上皮細(xì)胞，如氣管和消化道黏膜上皮〔8〕，在多種生理功能中發(fā)揮重要作用，TMEM16A是CaCCs的分子基礎(chǔ)〔9〕。TMEM16A基因定位于人染色體11q13區(qū)域上，含有26個(gè)外顯子，其編碼的TMEM16A蛋白含有986個(gè)氨基酸，相對(duì)分子量為114 000 kD。研究發(fā)現(xiàn)TMEM16A高表達(dá)于結(jié)腸癌〔10〕、眼瞼基底細(xì)胞癌〔11〕和胃腺癌〔12〕等多種惡性腫瘤組織中。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示TMEM16A可能與食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。TMEM16A的高表達(dá)對(duì)判斷食管鱗癌患者的腫瘤分化程度有重要的參考價(jià)值，TMEM16A可作為評(píng)價(jià)腫瘤預(yù)后的標(biāo)準(zhǔn)之一。

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