ELISA法檢測乙肝的影響因素

李麗娟

鄭州人民醫院檢驗科，河南鄭州 450003

乙型病毒性肝炎是同乙型肝炎病毒（HBV）引起的一種世界性疾病。我國是乙型肝炎病毒感染的高流行區。目前酶聯免疫吸附實驗（ELISA，簡稱酶免）是實驗室最常用的檢測方法，利用酶催化底物反應的放大作用，是一種因相酶免測定方法，因其實用、簡便、經濟、環保且敏感度較高，被用為檢測乙肝血清標志物的首選方法。但是其影響因素較多，因而難免會造成假陽性或假陰性。所以了解影響因素對減少差錯事故的發生是極其必要的，本文就ELISA法測定乙肝的影響因素及具體處理方法做如下報道。

材料：統計2011年度該院門診、體檢、住院所有酶法檢測乙肝五項標本的結果。儀器和試劑：使用安圖生物酶標分析儀、深圳匯松PW-960洗板機和上海科華生物乙肝診斷試劑盒。

1 標本因素

①病房標本：首先收到后要認真核對患者姓名、信息必免錯查，核對后對不符合要求的標本（如溶血、嚴重脂血）和申請單要拒收，并登記拒收登記本，與臨床聯系。門診標本采集時要使用靜脈采集真空玻璃管，避免試管重復使用造成污染，而且盡量不要使用塑料管，因為塑料管能吸附抗原物質，標本放置過外會使抗原含量降低，造成假陰性。②正規操作應在血液完全凝固后，運用高速離心機離心，分離血清，清除血清中殘留部分纖維蛋白，否則會在檢測中造成假陽性，分離血清后要及時檢測，避免溶血，如果條件不允許，將標本置于4℃冰箱保存，盡快檢測。③出現嚴重溶血標本時，如果用ELISA法檢測乙肝，反應孔對血紅蛋白有非特異性吸附作用，細胞內液進入造成對血清的稀釋作用，所以輕度溶血也會造成假陽性結果，因此不能使用溶血標本。④在冰箱中保存過外的標本，不敢保證保存過程中是否受到細菌污染，而產生非特異顯色，導致本底深造成的假陽性。

2 試劑影響因素

首先試劑質量是影響檢測結果的直接因素，其抗原抗體純度、抗體的滴度、親和力和特異性對測定結果產生直接影響，另外試劑應該用4℃冰箱保存，使用前必須試溫放置一會且最好一周內用完，才能提高操作質量。

3 操作失誤

①首先要使用一次性加樣吸頭，必免污染，另外加樣過程中一定要垂直加入準確量的血清，加樣要準確。避免出現加錯孔或把血清或酶噴濺到反應孔外，造成污染。且勿觸碰包被板底部，使抗體（抗原）脫落影響結果。②溫浴。一般ELISA檢測乙肝五項的放置的溫度為37℃，如果溫度太高就會使包被物脫落失活，而溫度達不到37℃時，則影響反應速度，從而影響測定結果。③加樣后序操作。首先是加樣后放置一定時間后洗板，實驗的成功與否洗板有著很大的關系要嚴格按照試劑說明書配制洗液，手工洗板一次把反應孔內的纖維蛋白凝塊洗掉以免堵塞洗板機。洗板時要注意每孔注滿，且不能讓洗液溢出反應孔，否則造成相互污染，還應注意的是洗板時要在注入反應孔洗液時停頓一定的秒數（參照說明書），然后棄去用甩板機甩干，如果板上的殘留液未拍干凈，也會出現假陽性。為了提高洗板的質量，洗板機要定期清洗，以免長細菌降低洗板質量。另外，顯色劑A和B一定要按要求準確量加入反應孔后充分混勻，且要避光反應夠規定時間，如果時間不夠，也可使濃度低的標本不顯色，造成假陰性。

4 結果判定

ELISA法最早是根據肉眼觀察顯色的深淺判定結果，但是肉眼判定結果存在一定的客觀性，影響判定的準確性，所以現在在部分醫院現在都運用酶標分析儀檢測，設空白陰、陽對照孔，確保空白及陰、陽對照孔吸光度在有效范圍內，否則會致使計算出來的OD值、S/CO值影響陰陽性判讀。另外要注意，儀器判讀還是要與肉眼觀察相配合，才能得出正確的檢測結果。

5 各種干擾因素

①帶現象。在平常的操作過程中，有時標本的濃度很高時，顯色反而會減弱甚至不顯色，造成假陰性，這是由于固相抗體只結合一定量的抗原，在抗原濃度過高時，抗體被過量抗原飽和，不能結合固相抗體，而導致假陰性。②一些藥物會影響乙肝ELISA法檢測，如高效價免疫球蛋白或乙肝疫苗，注射高效價免疫球蛋白后，免疫球蛋白會和乙肝表面抗原結合，形成復合物，在乙肝檢測中測不到表面抗原，出現假陰性。而注射乙肝疫苗后，如果注射完馬上檢測乙肝五項，一些人會出現一過性的表面抗原陽性，影響臨床診斷。

綜上所述，ELISA檢測乙肝五項時影響因素較多，我們要在工作中總結經驗，必須規范、仔細的操作，盡量避免或減少人為干擾因素對結果的影響，，協助臨床，報出更準確的檢驗結果。

[1] 王璐.ELISA法檢驗乙肝標志物影響因素的探討[J].醫學理論與實踐，2012（4）.

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[3] 張艷華.酶標儀檢測乙肝五項的影響因素[J].齊齊哈爾醫學院學報，2011，32（1）：81-82.