高效液相色譜法在雞蛋中獸藥殘留檢測的應用進展

焦安祥,崔凌峰,司 闖,袁璦金,舒利賢,許翔翀

（六盤水市農產品質量安全檢測中心,貴州六盤水553000）

近年來，隨著生活水平的不斷提高，雞蛋作為高營養食品，在居民的飲食結構和營養需求中占據重要地位。 近年來，由于養殖業中用藥的不規范，導致畜禽產品中獸藥殘留，威脅人體健康，備受社會關注。 其中大氟沙星、環丙沙星、沙拉沙星、恩諾沙星等氟喹諾酮類藥物，因菌譜廣、抗菌活性強等特點[1]，深受養殖行業歡迎。 本文重點圍繞近年發布的關于高效液相色譜檢測技術在上述幾種藥物的檢測方法的文獻， 進行總結歸納，希望給相關人員提供一定的參考。

1 檢測方法的探索實踐

2004年，劉媛[2]等建立了高效液相色譜法同時分析雞蛋樣品中4 種氟喹諾酮類藥物殘留量的方法。 該方法以0.1 mol/L 磷酸鹽緩沖液（pH7.0）對雞蛋樣品進行提取，用C18 固相萃取柱進行萃取。檢測條件采用流動相乙腈-0.05 mol/L 磷酸/ 三乙胺緩沖液(pH 2.4)（19:81），熒光檢測器激發波長280 nm、發射波長450 nm，流速1.0 ml/min，進樣量20ul。 對不同濃度的沙星混標進行檢測，測定結果為環丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星的線性范圍分別為2.5—500ug/l， 達諾沙星的線性范圍為0.5—100ug/l。 雞蛋樣品中4 種沙星的加標回收率為78.1%—95.7%， 變異系數為為4.1%—16.2%。 環丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星的最低檢出限為10ug/kg； 達諾沙星的最低檢出限為2ug/kg。

2006年，農業部頒布了《雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留的測定高效液相色譜法》（農業部781號公告-6-2006）[3]，要求采用C18 固相萃取柱進行萃取； 色譜條件流動相乙腈-0.05 mol/L 磷酸/三乙胺緩沖液(pH 2.4)（19:81），熒光檢測器激發波長280 nm、發射波長450 nm，流速1.0 ml/min，進樣量20ul；環丙沙星、恩諾沙星和沙拉沙星在10-50ug/kg、達氟沙星在2—10μg/kg 添加濃度的回收率為70%-100%，批內變異系數≤10%，批間變異系數≤15%。

2 檢測方法完善優化

科研人員在農業部781 號公告-6-2006 基礎上，不斷完善優化。 2016年，姜興華等[4]將標準中色譜條件進行調整，流動相乙腈-0.05 mol/L 磷酸/三乙胺緩沖液比例調整為15:85，流速調整為0.8ml/min，同時測定雞蛋中環丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星和達氟沙星4 種藥物的殘留量。 結果為環丙沙星、 恩諾沙星和沙拉沙星在0.005—0.5 μg/mL、達氟沙星在0.001—0.1μg/mL 濃度范圍內具有良好的線性關系, 相關系數為0.9998, 加標回收率為96.5%-103%, 變異系數0.83%—1.28%。

2017年，陳小紅等[5]對雞蛋中四種氟喹諾酮類藥物殘留前處理進行優化，將提取液磷酸二氫鉀單次（共提取2 次）用量由標準規定的2ml 增加到10ml， 流動相乙腈－0.05 mol/L 磷酸/ 三乙胺溶液體積比調整為21:79， 其他色譜條件不變情況下測得環丙沙星、 恩諾沙星和沙拉沙星在10-50ug/kg、 達氟沙星在2—10 μg/kg 添加濃度的回收率在83.2%-97.3%， 變異系數在3.6%—8.7%。

3 結束語

高效液相色譜法作為雞蛋中獸藥殘留十分有效的檢測手段，不同的前處理方法、不同的流動相配比均會對檢測結果造成影響，想要獲得更高的準確度和精密度，還需要科研人員進一步優化。