葛根總黃酮口服脂質體的制備方法

梁璐，刁磊

（吉林農業(yè)科技學院生物與制藥工程學院，吉林吉林132000）

葛根屬于豆科植物，是野葛的干燥根。葛根有解肌退熱、解酒毒、生津止渴等功效，可以用于日常食用如燉雞肉時加入，葛根總黃酮具有對抗心肌缺血缺氧性損傷，擴張冠狀血管，提高血流量等功能[1]。將葛根總黃酮制成口服脂質體可提高葛根總黃酮在體內的生物利用度，提高葛根的利用價值。

1 實驗儀器與材料

紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）。葛根總黃酮（成都德思特生物技術有限公司）。葛根素標準品（成都瑞芬思生物科技有限有限公司）。

2 方法與結果

2.1 葛根總黃酮口服脂質體的制備

精密稱取磷脂250 mg、膽固醇20.83 mg、葛根總黃酮25 mg于燒杯中并用35mL的乙醇溶解作為油相備用。將盛有10 mLPBS緩沖溶液的燒杯放到（55℃，600romin-1）磁力攪拌器上，用注射器吸取適量全部溶解的油相，緩慢勻速的將油相注入到水相PBS液面下。待脂質體形成后繼續(xù)加熱攪拌以除去有機溶劑，即得[2]。

2.2 葛根總黃酮口服脂質體包封率的測定

2.2.1 繪制標準曲線

稱取葛根素標準品10mg，用95%乙醇溶解并定容至100mL容量瓶的刻度線，振蕩混勻使100mL容量瓶里的標準溶液濃度為 0.1mg/mL。用移液管分別移取 1.4mL、2.4mL、3.4mL、4.4mL、5.4mL的標準溶液于5只10mL標好序號的容量瓶內，定容至10mL刻度線的溶液為95%乙醇。空白對照為適量的95%乙醇溶液，依次將配制好的溶液適量倒入石英比色皿中，用紫外可見分光光度計將檢測波長調至250nm，按容量瓶中溶液濃度大小進行測定。根據記錄結果，橫坐標為5只容量瓶中溶液濃度，測定得到的吸光度為縱坐標繪制標準曲線。經測定可知標準曲線方程為y=55.14x－0.017，R2=0.998。由標準曲線可知葛根總黃酮標準溶液濃度在上述0.014～0.054mg/mL的范圍內與吸光度有良好的線性關系。

2.2.2 口服脂質體中葛根總黃酮含量測定

使用移液管移取2.0 mL葛根總黃酮口服脂質體于10 mL容量瓶中，并用8.0 mL的乙醇溶液定容至容量瓶的刻度線，超聲振蕩進行破乳，以乙醇溶液作為空白對照，將樣品溶液和對照溶液在250nm檢測波長下進行紫外檢測。將檢測后得到的吸光度值代入標準曲線方程計算可得出總黃酮濃度，再次計算可得出M總。計算可知，M總為0.425mg。

2.2.3 葛根總黃酮口服脂質體包封率的測定

將裁剪好的透析袋放入適量的PBS緩沖溶液中，沸水浴15min進行活化。

用注射器吸取2 mL葛根總黃酮口服脂質體，注入到活化好的透析袋中。將密封好的透析袋放入加有300 mL PBS緩沖溶液的燒杯內，使用磁力攪拌器進行透析4h，待透析結束后，PBS緩沖溶液為空白對照，用注射器吸取適量的透析外液用250 nm檢測波長測定吸光度值，根據標準曲線方程計算得游離的總黃酮的濃度計算M游。

脂質體包封率 =〔（M總-M游/M總）〕×100%[3]

代入上述公式可得，包封率為33.75%。

2.3 質量考察

2.3.1 形態(tài)觀察

用玻璃棒蘸取適量的脂質體溶液于載玻片中心，然后將載玻片放到顯微鏡下觀察。可發(fā)現樣品溶液為澄清透明，稀釋后在暗室條件下可發(fā)現藍色乳光。顯微鏡觀察到的口服脂質體為類球狀較為規(guī)則，外層有磷脂雙分子層。

2.3.2 穩(wěn)定性考察

取適量的樣品溶液于玻璃瓶中，將其在室溫條件下放置一個月然后觀察其形態(tài)變化。觀察可得經放置一個月后的葛根總黃酮口服脂質體包封率有輕微下降，溶液出現輕微渾濁現象。制備的脂質體穩(wěn)定性較好。

3 結論

葛根總黃酮溶解性較差，實驗前需先測試一下溶解度。本試驗采用乙醇注射法制備出了葛根總黃酮口服脂質體，以包封率為評價指標。制備過程中要注意油相往水相注射時的速度要緩慢行，不宜過快。實驗制備的脂質體穩(wěn)定性還有待加強，因此，各個因素還需要進一步考察。