雙黃連對內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響

王莉莉 胡凱

（1，安徽省阜陽市動物衛(wèi)生監(jiān)督所236000；2，滁州華農(nóng)畜牧有限公司239000）

內(nèi)毒素主要化學(xué)成分為脂多糖，進入動物機體內(nèi)可引起發(fā)熱[1]、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克等，導(dǎo)致心肌損害、肝衰竭等器官功能障礙，臨床常見的革蘭氏陰性菌所致的疾病都與內(nèi)毒素密切相關(guān)，對于嚴(yán)重感染性疾病，抗菌藥能殺滅細菌，但不能拮抗細菌溶解后產(chǎn)生的內(nèi)毒素，細菌殺滅越多產(chǎn)生的內(nèi)毒素也越多[2]，對機體產(chǎn)生的損傷也越大。雙黃連具有廣譜抗菌、抗病毒感染作用及增強機體免疫力等作用[3]，具有重要的研究與應(yīng)用價值。

本試驗使用內(nèi)毒素復(fù)制內(nèi)毒性小鼠損傷模型，探討雙黃連對內(nèi)毒素性小鼠肝臟器官的保護作用及其機制，旨在為臨床應(yīng)用雙黃連預(yù)防和治療內(nèi)毒素性損傷提供理論依據(jù)，以指導(dǎo)細菌性疾病的治療，為雙黃連在臨床治療上提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗試劑與器材

內(nèi)毒素制備方法如下：將大腸桿菌在恒溫箱里培養(yǎng)24h后，所得菌落用生理鹽水洗滌到錐形瓶中，反復(fù)凍融4次，浸95℃水浴鍋中1h，14000r/min離心10min，取出上清液，于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

雙黃連口服液：河南福泰藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號Z41022325；實驗鼠顆粒飼料(碭山龍泉牌，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB/T14924.9.2001)；光學(xué)顯微鏡（Motic-BA-210）；萊卡轉(zhuǎn)輪切片機（LEICA-RM-2128）；顯微攝影裝置（OLYMPUS-CH30）等。

1.2 試驗動物及飼養(yǎng)管理

50日齡健康SD小鼠（購于南京江寧區(qū)青龍山動物繁殖場，平均體重18～22g）50只。隨機分成3個試驗組（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、一個空白對照組及一個試驗對照組；每天添加2次實驗鼠顆粒飼料，更換一次飲水；2d更換一次墊料，試驗場地每周消毒一次；定期稱重，觀察采食、生長發(fā)育情況。飼養(yǎng)場地為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗室，飼養(yǎng)場地及器械均嚴(yán)格消毒。

1.3 試驗設(shè)計

50只健康的SD小鼠隨機分成5個組，每組10只（雌雄比例為1∶1），空白對照組和試驗對照組都供給清潔飲水，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組在飲水中分別添加1、4、16ml/L的雙黃連口服液），試驗期間動物自由進食和飲水，35d后實驗組和試驗對照組進行腹腔注射內(nèi)毒素（0.5ml/只）；空白對照組注入等量的生理鹽水，染毒結(jié)束后禁食10h。12h后用5%氯丙嗪麻醉后進行解剖心臟采血致死，取肝臟樣品，用10%的甲醛溶液常溫固定，乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，HE染色，制作石蠟組織切片，在顯微鏡下觀察組織的病理變化并攝影。

2 結(jié)果

空白對照組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，無細胞水腫及胞漿疏松現(xiàn)象，肝索排列整齊，肝竇正常，無淋巴細胞浸潤，未見結(jié)締組織增生。

試驗對照組肝索排列異常，肝小葉內(nèi)血管明顯擴張充血，炎性細胞浸潤，部分區(qū)域肝細胞腫脹明顯，胞漿疏松，淡染，脂肪變性，肝細胞部分脫落，在受侵害程度更加嚴(yán)重的部位小葉內(nèi)肝竇擴張充血。

試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組肝臟組織病變較輕微，可見少量的細胞變性，肝索排列較整齊，肝竇和中央靜脈未見明顯擴張，在門管區(qū)仍可見少量淋巴細胞浸潤。

試驗Ⅲ組可見肝細胞腫脹，體積變大，變性壞死崩解，結(jié)締組織增生，大量炎性細胞浸潤，還伴有出血現(xiàn)象。

3 討論

正常肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，肝細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常。內(nèi)毒素侵入肝臟組織引起血管通透性升高，從而使肝小葉內(nèi)血管擴張充血炎性細胞浸潤，有的肝細胞可能由于內(nèi)毒素的侵害作用導(dǎo)致細胞破裂[4]，同時造成大量炎性介質(zhì)和細胞因子的合成及釋放，從而導(dǎo)致并加劇內(nèi)毒素所致的肝損傷[6]，所以，試驗對照組肝臟組織病變明顯，而試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組肝臟組織病變明顯減輕，表明雙黃連對內(nèi)毒素性肝損傷的組織結(jié)構(gòu)起到了很好的保護作用。雙黃連改善肝組織微循環(huán)和血液流變性作用，閻田玉等[5]通過試驗證實了這點，而試驗Ⅲ組肝臟組織損傷比Ⅰ、Ⅱ組嚴(yán)重，說明長期灌服高劑量的雙黃連對小鼠產(chǎn)生了毒副作用。

綜上所述，雙黃連口服液在體內(nèi)能抑制內(nèi)毒素的毒性反應(yīng)，對內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠肝臟的組織結(jié)構(gòu)具有明顯的保護作用，其中4ml/L的雙黃連口服液對肝臟的結(jié)構(gòu)保護作用較好；而長期服用大劑量的雙黃連口服液對機體會造成毒性反應(yīng)。