蜂蜜中有機活性組分檢測的色譜方法研究

□ 賈紅亮 潘 妍 北京農業職業學院

我國作為世界范圍內的養蜂大國，也是蜂蜜的主要生產國家，此外還是蜂蜜最大的出口國之一。蜂蜜具有很高的保健效果，蜂蜜當中含有多種營養物質，深受我國廣大人民群眾的喜愛。蜂蜜是蜜蜂制造出來的一種以植物為基礎的次生代謝產物，蜂蜜的成分非常復雜，當前研究表明，蜂蜜當中營養物質的成分超過100多種，具有較高的營養價值和藥物價值，能夠有效的提高人體的免疫力，加快傷口的愈合速度。蜂蜜在古希臘和古埃及被當中一種藥物，主要用來治療腸胃潰爛以及傷口。蜂蜜不但是當前自然界當中最復雜的食物，而且也是古代人類唯一可以使用的一種純天然甜味劑，在食材的制作上也有很廣泛的應用范圍。本文就通過色譜分析的方法探討了蜂蜜當中有機活性物質的組成成分。

1 實驗部分

1.1 實驗的主要儀器與試劑

高效液相色譜儀器（安捷倫科技（中國）有限公司），PROSTAR 303二極管檢測儀器。SAX SPR小柱（安捷倫科技（中國）有限公司），十二管SPE檢測裝置（安捷倫科技（中國）有限公司），離子水發射器（安捷倫科技（中國）有限公司）。

葡萄糖酸液，甲酸溶液，蘋果酸，乙酸，檸檬酸，丙酸都來自于美國SIGMA公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液的配比

本次實驗開始之前稱量好葡萄糖酸、甲酸以及蘋果酸、檸檬酸等有機物質放置在10 mL的容量瓶當中，使用去離子水溶化之后定容，配置得到濃度為50 g/L的儲備溶液。取恰當的標準儲備溶液混合之后，加水稀釋到100 mL，放入容量瓶當中，其中葡萄糖算以及甲酸的濃度為5 g/L，其中蘋果酸檸檬酸的濃度為2 g/L，馬來酸的濃度為0.05 g/L，放在4 ℃的溫度下儲存。

1.2.2 樣品處理方法

本次實驗開始之前選取事前準備好的蜂蜜樣品，如果蜂蜜樣品當中存在結晶現象，那么必須將蜂蜜放置在60 ℃的水中進行水浴加熱，使其充分溶解完成之后取出7.5 mL放置在溶劑為100 mL的容量瓶當中，加入恰當的等離子水溶解之后。確保蜂蜜樣品完全溶解之后,加入0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液調整其pH值為10，然后攪拌15 min之后，再加入濃度為0.1 mol/L的硫酸溶液當中調整pH濃度，讓pH值達到中性（pH=7），最后加入離子水定容之后混合均勻。最后取處蜂蜜樣品溶液10 mL經過水相過濾之后，等到蜂蜜樣品完全吸附成之后使用10 mL的去離子水進行沖洗，使用真空泵保障水流的速度為3 mL/min，最后在使用4 mL，濃度為1 mol/L的鹽酸以0.5 mL/min的速度進行沖洗，最后存放在5 mL容量瓶當中，通過水相膜之后使用HPLC反相色譜柱分析，使用液相色譜檢測儀檢測之后，使用標準工作曲線外標法定量。高效液色譜法具有較高的分離度，而且對于蜂蜜成分檢驗的準確性也較高，可以使用不同類型的檢驗器材，對蜂蜜進行成分的檢驗分析，利用色譜圖進行分析和判定，特別是隨著我國計算機技術的不斷發展，三維立體的高效液色譜法可以有效幫助蜜蜂成分的鑒定[1]。

2 結果

蜂蜜當中含有大量的有機活性物質，具有較為廣泛的生物學效應，可以充當一種天然的抗氧化劑，蜂蜜當中含有的類黃酮可以有效的幫助人類預防心血管疾病，對于預防癌癥具有非常良好的效果，此外蜂蜜當中的類黃酮是可以捕獲活性氧，還原過氧化自由基團，防止其生產自由基。

本次實驗當中通過測量發現，蜂蜜當中主要含有水和高度濃縮的糖，其中水的含量為17%，糖分占到蜂蜜干重比例的95%～99%，其中主要包括果糖，占比達到38.2%，葡萄糖占比達到31.3%，蔗糖占比為1%。其余的部分主要是有機酸，占比為0.57%。蜂蜜當中的抗氧化物質主要是酚類、肽、有機酸等，其中有機酸的含量雖然只有0.57%，但是通過對蜂蜜的檢測發現蜂蜜當中的有機酸種類較多，有天冬氨酸、丁酸、檸檬酸等多種酸類。

3 討論

蜂蜜作為以花蜜和植物為原料的純天然甜味物質，古埃及人民將蜂蜜當作藥物使用，直到青霉素被大量普及之后才開始慢慢放棄使用蜂蜜進行藥物治療，但是目前，抗生素的大量使用導致很多細菌已經進化出了相關的抗體，蜂蜜在傷口愈合中的作用又得到了恢復。蜂蜜是蜜蜂生產的一種次生代謝產物，蜂蜜當中擁有超過一百多種營養物質和營養成分，其中主要包括糖類、酶、氨基酸、有機酸等等多種物質，對于人體具有良好的保健貢獻。在綠色生態重視程度越來越高的今天，蜂蜜已經成為人民群眾最喜愛的食物之一，本文就通過色譜法分析了蜂蜜當中的主要成分，探究了蜂蜜營養成分的組成，以及各種營養物質的功效。