中藥菟絲子對肉仔雞免疫和抗氧化指標的影響

■ 周昭希 楊 柳 高立杰 高 明 劉玉芝*

(1.河北農業大學動物醫學院，河北保定071000；2.河北農業大學動物科技學院，河北保定071000)

中草藥在我國應用歷史悠久，其療效持久、作用廣泛，是預防治療疾病的理想藥物。隨著人們對綠色無污染肉、蛋、奶需求量的日益增加，中草藥也因其具有純天然、無抗藥性、無藥物殘留等優點成為國內外畜禽養殖業疾病防治的研究熱點[1]。盡管有關中草藥在禽類中的應用試驗屢見報道，但在家禽養殖業中仍有許多中草藥有待被開發利用。菟絲子（Cuscuta chi?nensis Lam.）又名吐絲子，為旋花科植物菟絲子的干燥成熟種子，具有補益肝腎、益精壯陽、明目、止瀉之功效[2]。菟絲子主要含有甾醇、黃酮、多糖等成分，另外還有氨基酸、鐵、銅、錳等微量元素，其中主要藥用成分是黃酮類和多糖類化合物[3]。菟絲子的藥理作用主要表現在免疫、抗氧化和抗衰老、營養神經以及保肝等方面[4-5]。因此菟絲子在家禽養殖業中具有很高的開發利用價值，而目前少見或未見菟絲子單方對肉雞免疫和抗氧化指標的專門研究。本試驗通過在肉雞飼料中添加菟絲子飼喂肉雞，分析菟絲子對肉雞免疫和抗氧化指標的影響，旨在為菟絲子在家禽養殖業的應用提供新的參考。

1 材料

1.1 試驗動物

180只1日齡健康、體重相近的愛拔益加肉仔雞（保定市清苑養雞場提供）。

1.2 藥品

菟絲子購自保定市藥材公司。

1.3 主要試劑

試驗所用試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

2 方法

2.1 試驗動物分組與給藥

將菟絲子用酒浸72 h，將酒炙的和未酒炙的菟絲子分別炒干，40目粉碎備用[6]。選用1日齡健康、體重相近的愛拔益加肉仔雞180只，隨機分為3組，每組6個重復，每個重復10只雞。對照組（DZ組）：飼喂基礎飼糧（見表1）；菟絲子試驗組（TS組）：飼喂基礎飼糧+2%菟絲子；酒炙菟絲子試驗組（JTS組）：飼喂基礎飼糧+2%酒炙菟絲子。試驗雞進行常規飼養管理，自由采食和飲水。試驗期為42 d。

2.2 樣品的采集與制備

在第21 d和第42 d，每個重復分別隨機抽取1只雞，稱重后，頸靜脈采血，一部分血液用肝素鈉抗凝分離血漿，另一部分不抗凝，靜置過夜后離心得血清，血清和血漿收集在EP管中置于-20℃冰箱保存，分別用于測定免疫指標和抗氧化指標。將雞只放血致死解剖，分別迅速摘除脾、胸腺、法氏囊，去除附著組織分別稱鮮重，計算免疫器官指數；再胸肌取樣，放于4℃冰箱冷藏，24 h后，研磨再用冷生理鹽水稀釋制成10%的組織勻漿液，用于測定胸肌中抗氧化指標。

2.3 測定指標與方法

2.3.1 血清免疫指標的測定

血清球蛋白（GLB）含量用總蛋白含量和白蛋白含量之差計算；總蛋白（TP）含量用雙縮脲法測定；白蛋白（ALB）含量用溴甲酚綠比色法測定；血清溶菌酶（LZM）活性用比濁法測定；血清與應用菌液反應后，根據透光度計算溶菌酶含量。

2.3.2 免疫器官指數的測定

免疫器官指數（%）=器官重量/活體體重×100

表1 基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎)

2.3.3 血漿和胸肌抗氧化指標的測定

血漿和胸肌中總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性用黃嘌呤氧化酶法測定；谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）活性以催化谷胱甘肽（GSH）的反應速度來表示；胸肌勻漿蛋白質測定采用考馬斯亮藍法測定；丙二醛（MDA）含量用硫代巴比妥酸比色法測定。上述試劑盒均購自于南京建成生物工程研究所，嚴格按說明書進行操作。

2.4 數據分析

采用SPSS 17.0軟件中One Way ANOVA對試驗數據進行統計分析，試驗數據以“平均值±標準差”表示，差異顯著性用LSD法進行多重比較，P＜0.05為差異顯著水平。

3 結果與分析

3.1 菟絲子對肉仔雞血清免疫指標的影響(見表2)

由表2可知，在21日齡，酒炙菟絲子組肉仔雞血清LZM活性顯著高于對照組（P＜0.05），在42日齡，酒炙菟絲子組和菟絲子組血清TP和GLB水平均顯著高于對照組（P＜0.05）。

3.2 菟絲子對肉仔雞免疫器官指數的影響(見表3)

表2 菟絲子對肉仔雞血清免疫指標的影響

表3 菟絲子對肉仔雞免疫器官指數的影響（%）

由表3可知，在21日齡，酒炙菟絲子組肉仔雞胸腺指數顯著高于對照組（P＜0.05）和菟絲子組（P＜0.05）。在42日齡，酒炙菟絲子組肉仔雞脾臟指數顯著高于對照組（P＜0.05）。

3.3 菟絲子對肉仔雞抗氧化指標的影響（見表4）

由表4可知，在42日齡，酒炙菟絲子組和菟絲子組的肉仔雞血漿GSH-Px活性都顯著升高（P＜0.05）；胸肌MDA含量都顯著低于對照組（P＜0.05）。

表4 菟絲子對肉仔雞抗氧化指標的影響

4 討論

4.1 菟絲子對肉仔雞免疫指標的影響

免疫球蛋白是血清中GLB的主要組成成分，血清中GLB含量反映了機體免疫力的高低。LZM是廣泛存在于生物體液、血清和巨噬細胞中的一種水解酶，在免疫中發揮重要作用，其活性體現了機體細胞免疫和機體抗感染的能力[7]。本試驗中，和對照組相比，酒炙菟絲子顯著提高了21日齡肉仔雞的血清LZM活性和42日齡的血清GLB含量。徐何方等[8]試驗結果顯示，菟絲子乙醇提取物能提高大鼠的血清免疫球蛋白水平，而張慶平等[9]試驗證實菟絲子的乙醇提取物提高了小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬能力,說明菟絲子是一種能夠增強體液免疫及細胞免疫的免疫增強劑。脾臟、胸腺和法氏囊是禽類的主要免疫器官,參與機體的體液免疫和細胞免疫,其指數是評價家禽免疫力的重要指標。本試驗中，和對照組相比，酒炙菟絲子顯著提高了21日齡肉仔雞的胸腺指數和42日齡的脾臟指數，說明酒炙菟絲子促進了胸腺和脾臟的發育，能提高機體的細胞免疫機能。與菟絲子組相比，酒炙菟絲子組21日齡肉仔雞胸腺指數顯著升高，而其他指標均無顯著差異。說明酒炙菟絲子增強機體免疫力的作用比菟絲子更好。本試驗中酒炙菟絲子和菟絲子都提高了42日齡肉雞血清TP含量，說明菟絲子可以促進肉雞體內蛋白質的沉積作用。菟絲子對肉仔雞的免疫增強作用應該主要和菟絲子中含有的大量黃酮類物質有關。黃酮類化合物因為結構類型多、作用機理復雜，其免疫調節作用及其機制的研究還有待新的試驗逐漸被揭示闡明[10]。

4.2 菟絲子對肉仔雞抗氧化指標的影響

抗氧化酶系統的功能是清除物質代謝過程中產生的活性中間產物，特別是清除自由基，保護細胞免受損傷。SOD是體內清除自由基的關鍵物質，能對抗自由基和修復受損細胞。GSH-Px是一種重要的催化過氧化氫分解的酶，催化GSH變為GSSG的同時，使有毒的過氧化氰還原成無毒的化合物，從而保護細胞不受損害。機體內MDA的含量是反映機體內脂質過氧化程度高低的指標。檢測SOD、GSH-Px活性和MDA的含量可以反映機體抗氧化的能力及細胞受損的程度。張培全等[11]試驗證明菟絲子的乙酸乙酯、正丁醇提取物以及90%醇沉多糖能清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH·）和超氧陰離子自由基（O2-·），且菟絲子乙酸乙酯、正丁醇提取物比GSSG清除自由基的能力還強。本試驗中，酒炙菟絲子和菟絲子都能顯著升高42日齡肉仔雞的血漿GSH-Px活性而降低胸肌MDA含量，說明菟絲子是天然抗氧化劑的良好來源。但本試驗血漿和胸肌T-SOD活性升高都未達顯著水平，這也許和試驗所用菟絲子劑量有關。本試驗設計中由于酒炙菟絲子添加劑量單一，因此不能確定2%是否為最佳劑量，關于酒炙菟絲子的適宜添加劑量還需要后續新的試驗來驗證，而菟絲子活性成分抗氧化作用的機制有待進一步研究[12]。

4.3 菟絲子酒炙的作用

菟絲子入藥有生品和炮制品之分，其生品質地較硬比較難以粉碎，且其中的有效化學成分難以溶出，因此臨床上宜將菟絲子炮制后再入藥。菟絲子炮制歷史悠久，方法有多種，其中酒制又分為酒浸、酒煮、酒蒸和酒炙等[13]。將凈選或切制后的藥物，加入一定量的液體輔料拌炒的炮制方法稱炙法。現代菟絲子炮制以清炒、鹽炙、酒炙、制餅為主。中藥經酒制，不但有助于有效成分溶出，增加療效、還能引藥上行、增強活血通絡作用、改變藥物性味、矯臭去腥以及降低藥物的毒副作用等，如生黃連中小檗堿的溶出率為58.17%,經酒制后，溶出率為85%，說明酒制促進了黃連中小檗堿在煎液中的溶出率[14]。菟絲子除了含有氨基酸、鐵、銅、錳等微量元素外，其主要含有甾醇、黃酮、多糖類成分，主要藥用成分是黃酮類和多糖類化合物。肖嵐等[15]報道，菟絲子經清炒、鹽制、酒制后，其中的5種黃酮類物質包括槲皮素、金絲桃苷、山奈酚、綠原酸、異鼠李素含量均比生品菟絲子高，且酒制菟絲子中，金絲桃苷含量比清炒菟絲子增加3.47%；比鹽制菟絲子增加10.25%，比生品菟絲子增加37.78%[15]。試驗證實，酒炙菟絲子多糖含量是清炒菟絲子的1.62倍，是生菟絲子的1.98倍，說明酒炙能顯著提高菟絲子中多糖的含量[16]，而多糖具有提高免疫力和抗氧化抗衰老作用[17]，本試驗將酒浸菟絲子和生菟絲子對比，試驗結果表明酒炙菟絲子增強機體免疫力的作用比菟絲子更好，與肖嵐等[15]的試驗結果相符合。而菟絲子炮制作用機理還有待進一步研究。

5 結論

菟絲子能提高肉雞的免疫力和抗氧化能力并促進肉雞蛋白質沉積，酒炙菟絲子效果更好。