三種含非淀粉多糖酶復合酶的體內外消化試驗評估及其對黃羽肉雞生產性能的影響

■ 羅平成 李秧發 周響艷，2 夏旻灝 左建軍 曹慶云 葉 慧 馮定遠*

（1.華南農業大學動物科學學院，廣東廣州510642；2.東莞泛亞太生物科技有限公司，廣東東莞523808）

隨著畜牧行業的產業水平不斷提高，飼料酶制劑的開發應用成為行業進一步發展的動力源泉。20世紀80年代的一系列研究表明，體外來源的酶制劑的添加并不會導致體內酶分泌及生理生化方面的負面影響，更能促進動物消化吸收。20世紀90年代后，由于相關技術以及應用研究的迅猛發展，酶制劑在配合飼料中發揮的作用越來越大。

非淀粉多糖（NSP）是植物組織中除淀粉以外所有碳水化合物的總稱，可分為：纖維素、半纖維素、果膠三類。非淀粉多糖，例如木聚糖，不能被非反芻動物自身的消化酶系統消化利用，其中有一些還具有抗營養作用，例如：β-葡聚糖、甘露聚糖、阿拉伯木聚糖等。

非淀粉多糖酶可以將對應的非淀粉多糖水解為小分子的低聚糖、寡糖或者單糖。一方面可以將其轉化成非反芻動物能夠利用的單糖等營養成分，另一方面可以水解破壞其結構，削減其抗營養作用，從而提高飼料效率。

本研究旨在探究三種復合非淀粉多糖酶的體內外性能及其對黃羽肉雞生產性能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料及儀器

本研究所用的三種含非淀粉多糖酶復合酶均來源于東莞泛亞太生物技術有限公司，復合酶1、復合酶2、復合酶3的組成比例見表1。

本研究所用飼料配方及營養標準見表2和表3。

表1 試驗用酶活力（U/g）

表2 飼料配方（%）

1.2 分組及試驗動物

體內消化代謝試驗分3次進行，每次分別使用小雞(1～21日齡)、中雞(22～42日齡)、大雞(43～60日齡)階段日糧配方。每次試驗選取快大型黃羽肉雞種公雞45只，隨機分為正、負對照組和分別添加三種復合酶制劑的3個試驗組（以負對照日糧為基礎，分別添加復合酶1、復合酶2、復合酶3），共5組，每組3個重復，每個重復3只雞。

表3 營養指標(%)

體外消化試驗分3次進行，每次分別使用小雞(1～21日齡)、中雞(22～42日齡)、大雞(43～60日齡)階段日糧配方。每次試驗不同組選取日糧分別為：正對照日糧、負對照日糧、分別添加3種不同復合酶制劑日糧（以負對照日糧為基礎分別添加復合酶1、復合酶2、復合酶3），共計5組。

生產性能評估試驗采用單因子隨機區組試驗設計，選用900只快大型黃羽肉雞（公母對半），集中育雛至11日齡后，隨機分為正對照組（使用正對照日糧）、負對照組（使用負對照日糧）以及分別添加3種復合酶制劑的3個試驗組（以各階段負對照日糧為基礎，分別添加復合酶1、復合酶2、復合酶3），共計5組，每組6個重復，每個重復30只雞，各重復初始體重統計檢驗差異不顯著。試驗期為60 d，分為試驗前期（1～21日齡）、試驗中期（22～42日齡）、試驗后期（43～60日齡），每個階段使用對應的基礎日糧配方。按照試驗肉雞場的常規飼養管理程序進行免疫和管理。雞只自由采食和飲水。

1.3 檢測指標及方法

體外模擬嗉囊消化：準確稱取5.000 0 g樣品于試管中。樣品粉碎且過60目篩。加入0.1 mol/l的HCl 10 ml，用HCl或NaOH調節pH值至4.6，加入需要添加的酶。震蕩試管，使樣品充分混勻。樣品在試管中混勻后，把試管放入水浴鍋，41℃水浴21 min。

體外模擬胃消化：在上述步驟完成后，在試管中加入2.5 ml胃蛋白酶溶液（20 mg/ml，0.5 mol/l HCl配制），用HCl或NaOH調節pH值至2.8，充分震蕩搖勻。試管放入水浴鍋，41℃水浴76 min。

體外模擬小腸消化：在上述步驟完成后，在試管中加入2.5 ml胰酶溶液（40 mg/ml，pH值6.2的醋酸鈉緩沖液配制）加入1 mol/l NaHCO3調節pH值6.2。把樣品轉入透析袋中，試管用10 ml醋酸鈉緩沖液沖洗，一并轉入透析袋中。用細繩扎緊透析袋，放入500 ml的錐形瓶中，錐形瓶瓶中裝入200 ml的緩沖液。把錐形瓶放入41℃水浴3 h，每小時更換一次透析液。更換的透析液用瓶子收集好。

體外消化后樣品處理：轉移透析袋中的樣品于離心管中，5 000 r/min離心20 min，去除上清液。殘渣105℃烘干、恒重用于粗蛋白質和能量的測定。

體內消化代謝試驗：采用強飼-縫肛法進行試驗。縫肛后，預試期為5 d，飼喂常規飼料，預試期結束后的早上8∶00把料槽清理干凈，禁食48 h，自由飲水。禁食結束后，內源對照組繼續禁食，其余組在早上8∶00，每組分別強飼對照日糧和試驗日糧50 g。各組均自由飲水，在瓶蓋上擰上積糞瓶。次日8∶00收集一次糞便，采樣后第3 d再收集一次，用塑料瓶裝好，每100 g糞樣噴灑2 ml 10%鹽酸，每次搜集完成后于4℃冰箱保存樣品。完成搜集的糞便在105℃烘干至恒重。

概略養分分析指標：飼料和糞樣的測定指標有總能、粗蛋白質和粗纖維消化率及其表觀消化率。總能用長沙儀器廠生產的WGR-1G微電腦煤質測定處理儀測定；粗蛋白質含量采用凱氏微量定氮法(FOSS 2300 KJELTEC ANALYZER UNIT自動定氮儀)測定；粗纖維含量采用濾袋法(Ankom 220型纖維分析儀)測定。

能量攝入量（MJ）=強飼料量（kg）×強飼料能值（MJ/kg）

能量排出量（MJ）=排泄物量（kg）×排泄物能值（MJ/kg）

能量代謝率（%）=（能量攝入量-能量排出量）/強飼料量×100

干物質表觀消化率（%）=[強飼干物質（kg）-糞便排泄干物質量（kg）]/強飼干物質（kg）×100

粗蛋白表觀代謝率（%）=（食入粗蛋白質量-排泄物粗蛋質白量）/食入粗蛋白質量×100

粗纖維表觀利用率（%）=（食入粗纖維量-排泄物粗纖維量）/食入粗纖維量×100

干物質體外消化率（%）=（飼料干物質量-消化后殘渣干物質）/飼料干物質量×100

能量體外消化率（%）=（飼料總能量-消化后殘渣總能量）/飼料總能量×100

粗蛋白體外消化率（%）=（飼料粗蛋白質量-消化后殘渣粗蛋白質量）/飼料粗蛋白質量×100

體重及日增重：分別于1日齡、21日齡、42日齡、60日齡早晨8∶00空腹稱重，計算各生長階段的日增重。

料重比：21日齡、42日齡、60日齡計算采食量，計算F/G。

1.4 數據統計處理

試驗采用“平均數±標準誤”表示，用SPSS11.5 For Windows軟件進行數據分析，各指標差異顯著性分析用one-way進行分析，用LSD法進行多重比較。

2 結果與分析

2.1 體外消化試驗結果分析

不同階段黃羽肉雞體外消化結果見表4、表5、表6。

表4 小雞階段不同酶配比對體外消化率的影響(%)

由表4可知，在小雞料體外消化試驗中正、負對照組的干物質消化率和能量消化率顯著低于試驗組1、2（分別添加復合酶1和復合酶2，下同）（P＜0.05）,極顯著低于試驗組3（添加復合酶3，下同）（P＜0.01），試驗組3干物質消化率和能量消化率顯著高于其他試驗組（P＜0.05），其它各試驗組間差異不顯著。試驗組3的粗蛋白質消化率也顯著高于正、負對照組和其它各試驗組（P＜0.05）。

表5 中雞料階段不同酶配比對體外消化率的影響(%)

表6 大雞料階段不同酶配比對體外消化率的影響(%)

中雞料體外消化試驗結果見表5。試驗組2的干物質消化率和負對照組差異不顯著，其它各試驗組的干物質消化率和正、負對照組相比均呈現顯著差異（P＜0.05）。各試驗組的能量消化率顯著高于正、負對照組（P＜0.05），試驗組3能量消化率最高，但各試驗組間差異不顯著。試驗組1粗蛋白質消化率顯著高于其余各組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）。

大雞料體外消化試驗結果見表6。試驗組2、3的干物質消化率顯著高于正、負對照組和試驗組1（P＜0.05），其它各組間差異不顯著。各試驗組和對照組間的能量和粗蛋白質的消化率均差異不顯著。

2.2 體內消化試驗結果分析

不同階段雞料營養物質體內消化結果見表7、表8、表9。

表7 小雞日糧體內概略養分消化率(%)

由表7可知，對于小雞階段日糧，正、負對照組的干物質表觀消化率和能量代謝率顯著低于試驗組2和試驗組3(P＜0.05)，但正對照組和試驗組1差異不顯著，正對照組和負對照組的能量代謝率顯著低于試驗組2和試驗組3，各試驗組間差異不顯著(P＞0.05)。各組間的粗蛋白質表觀代謝率和粗纖維表觀利用率差異均不顯著(P＞0.05)。

表8 中雞日糧體內概略養分消化率(%)

表9 大雞日糧體內概略養分消化率(%)

由表8可知，對于中雞階段的日糧，正、負對照組的干物質表觀消化率顯著低于試驗組2和試驗組3（P＜0.05），其它各試驗組間差異不顯著，正對照組和負對照組的能量代謝率顯著低于試驗組2和試驗組3，試驗組間差異不顯著（P＞0.05）。各組間的粗蛋白質表觀代謝率和粗纖維表觀利用率差異均不顯著（P＞0.05）。

由表9可知，對于大雞階段的日糧，正、負對照組的干物質表觀消化率和能量代謝率顯著低于試驗組2和試驗組 3（P＜0.05），各試驗組間差異不顯著（P＞0.05）。各組間粗蛋白質表觀代謝率和粗纖維表觀利用率差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 生產性能評估結果

各日齡段的生產性能試驗結果見表10、表11、表12、表13。

表10 11～21日齡各組生產性能

表11 22～42日齡各組生產性能

表12 43～60日齡的生產性能

表13 1～60日齡的生產性能

由表10可知，各處理組在11日齡（即試驗初始）體重基本一致，差異不顯著(P＞0.05)。21日齡的平均體重，負對照組最低，試驗組相比于負對照組和正對照組都有所提高，但差異不顯著。11～21日齡階段，試驗組2的平均體重比負對照組提高了3.83%，平均日采食量正對照組最低，試驗組2最高，各組間差異不顯著(P＞0.05)，平均日增重各組間差異不顯著(P＞0.05)，其中試驗組1、2、3分別比負對照組提高了3.33%、6.13%和3.63%。料重比以正對照組最低，負對照組最高，其中試驗組1、2、3分別比負對照組降低了1.84%、3.23%和2.30%。

由表11可知，42日齡平均體重，試驗組3最高，正對照組次之，負對照組最低，其中試驗組1、2、3分別比負對照組提高了1.12%、1.12%和2.03%，但差異都不顯著（P＞0.05）。22～42日齡的平均日采食量，各組間差異都不顯著（P＞0.05），其中負對照組最高，正對照組最低。平均日增重各組間差異不顯著（P＞0.05），其中試驗組3最高，負對照組最低。料重比各組間差異都不顯著（P＞0.05），其中負對照組最高，正對照組最低，各試驗組比負對照組都有所降低，但差異不顯著。

從表12可知，60日齡的平均體重，正對照組最高，其次是試驗組2，試驗組3最低，但各組間差異都不顯著（P＞0.05）；43～60日齡的平均日采食量，負對照組最高，試驗組3最低；平均日增重，正對照組最高，試驗組1和試驗組3比負對照組稍有提高，但差異不顯著（P＞0.05）。

由表13可知，60日齡的平均體重試驗組2最高，其次為正對照組，試驗組3最低，但各組間差異都不顯著（P＞0.05）。1～60日齡平均日采食量負對照組最高，其次是試驗組2，正對照組最低。料重比負對照組最高，正對照組最低，各試驗組與負對照組正對照組差異都不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 復合酶對日糧營養物質消化率的影響

國內外許多研究都表明，復合酶能提高營養物質消化率。袁旭鵬（2008）試驗結果表明∶①小麥型日糧中添加NSP酶制劑可提高干物質、粗蛋白質、粗脂肪和能量的表觀消化率，試驗C組的效果最好；②添加NSP酶制劑提高了賴氨酸、蛋氨酸、組氨酸和總必需氨基酸的回腸表觀消化率，但對其它氨基酸的回腸表觀消化率的影響不明顯。Diebold等(2004)研究表明，小麥基礎日糧中添加木聚糖酶能極顯著提高日糧粗蛋白質、總能和有機物質的回腸表觀消化率。Hew等(1998)的試驗中，木聚糖酶可以使肉雞小麥型飼糧中各種氨基酸的表觀消化率平均由70%提高到78%，使回腸氨基酸表觀消化率平均由78%提高到85%。王前光（2006）研究表明，酶制劑的添加有提高能量的回腸表觀消化率的趨勢(P=0.10)，歐蒂酶、木聚糖酶的添加能顯著提高粗蛋白質的回腸表觀消化率(P＜0.05)，E1 組差異不顯著(P＞0.05)。Omogbenigun 等(2004)報道，小麥日糧中酶制劑的添加能夠極顯著改善斷奶仔豬日糧粗蛋白質和能量的回腸表觀消化率(P＜0.01)。

Veldman等(1994)報道，木聚糖酶能提高小麥日糧AME、蛋白質和淀粉消化率。胡忠澤(1999)在生長豬的玉米-豆粕型日糧中添加含木聚糖酶、葡聚糖酶、纖維素酶為主的復合酶，可使日增重和飼料轉化率分別提高8.29%和8.89%，粗纖維、粗蛋白質和干物質的表觀消化率分別提高36.76%、17.23%和9.75%。

3.2 復合酶的最佳配合比例

復合酶對提高動物生產性能、改善動物日糧中養分的利用率已經得到人們的廣泛認同。但是復合酶中含有多種NSP酶還有外源性蛋白酶及淀粉酶。各種酶在復合酶的添加量達到一個什么比例最合適以及根據不同日糧選擇不同的復合酶制劑的研究還比較少。本試驗研究了3種不同配比的復合酶，結果發現復合酶2在改善肉雞生產性能上要好于復合酶1和復合酶3。復合酶2的葡聚糖酶要遠高于復合酶1和復合酶3。

3.3 復合酶在肉雞生產上的應用效果

李成良等（2009）研究表明，在4～6周齡和全期時，非淀粉多糖酶和抗生物素有所提高采食量和日增重、降低料肉比的趨勢，但是都沒有達到顯著水平（P＞0.05），這與本試驗結果一致。Osei等（2000）在含小麥麩17%的肉雞日糧中添加0.1%和0.2%的復合酶制劑，42日齡體重較對照組分別提高了1.9%和5.8%。飼料消耗率降低了10%～15%。韓正康（2006）試驗表明，在飼料大麥基礎日糧下添加適量的粗酶制劑可以不同程度的提高雄雛雞（7～21日齡）、肉仔雞（1～42日齡）、生長鵝（7～60日齡）及肉鴨（1～42日齡）的增重和飼料利用率。王修啟等(2002)試驗評定添加0.12%木聚糖酶對雞AME值和養分消化率的影響。結果顯示,木聚糖酶使雞的AME(干物質基礎)分別提高7.07%(P＜0.05)和 6.53%(P＜0.01);干物質消化率分別提高7.10%(P＜0.05)和7.67%(P＜0.01)，有機物消化率分別提高6.07%(P＜0.05)和7.23%(P＜0.01)。

習海波等（2006）研究表明，添加適量復合酶制劑可改善肉雞低能量日糧的料肉比。本試驗中，在低能量水平日糧中添加復合酶可不同程度提高黃羽肉雞在11～21日齡和22～42日齡的平均體重和平均采食量，其中與負對照組和正對照組相比，復合酶2組提高的程度較大，但差異不顯著（P＞0.05）；3個加酶組的料肉比比負對照組降低了約2%，和上述報告相一致。李永義等(2000)研究表明：添加復合酶能提高肉雞的增重，降低料肉比，提高經濟效益。但日增重和料肉比都不顯著,和本次試驗研究結果一致。

4 結論

①通過體外消化試驗表明，添加復合酶組的干物質表觀消化率、粗蛋白質表觀代謝率和能量代謝率都有顯著的提高。

②在降低消化能的黃羽肉雞日糧中添加不同配比的復合酶制劑有提高黃羽肉雞平均日增重、料肉比的趨勢。添加復合酶2的試驗組2表現最佳。