抗菌肽替代抗生素在斷奶仔豬中的應用研究

■宋延飛

（遼東學院農學院，遼寧丹東118003）

現代養豬生產中普遍采用抗生素來防治斷奶仔豬由于斷奶應激產生的生長抑制和腹瀉問題。但長期使用抗生素會產生藥殘留、耐藥性，并且我國農業部已禁止洛美殺星等抗生素使用，刪除了硫酸黏桿菌素的促生長用途，起草了《全國遏制動物源細菌耐藥行動計劃》，這說明在豬飼料中禁用抗生素已是必然趨勢，因此尋求新型綠色添加劑替代抗生素已成為研究熱點。抗菌肽是一種對外源病菌具有高效殺滅活性的肽類物質[1]，由12～100個氨基酸組成[2]，是由生物體自身產生的一類抵抗外界病原體感染的陽離子多肽，具備抗菌譜廣、無污染、無毒副作用，不易產生耐藥性，是抗生素的良好替代品[3]，本試驗探討了抗菌肽替代抗生素對斷奶仔豬生長性能及血清免疫指標的影響，以期為抗菌肽的進一步使用和推廣提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

抗菌肽，由中農穎泰生物技術有限公司提供。

1.2 試驗方法

選取28日齡斷奶仔豬45頭，預飼期5 d，試驗期為28 d，其中試驗期分為1～14 d、15～28 d兩個階段，采用單因素完全隨機化設計，隨機分成5組，每組設3個重復，每個重復3頭豬，其中Ⅰ組為對照組，全期飼喂基礎日糧，Ⅱ組在基礎日糧中添加160 mg/kg金霉素，Ⅲ～Ⅴ組分別在基礎日糧中添加160、320、480 mg/kg抗菌肽。試驗飼糧參照NRC（1998）標準配制，基礎日糧組成及營養水平見表1。

1.3 測定指標與方法

1.3.1 生長性能測定

試驗進行過程中每日

觀察仔豬精神狀況、排糞情況以及持續時間。預飼期的第5 d，試驗期的第14 d及第28 d 20∶00點停止喂料，照常供水，于次日早上對豬空腹逐個稱重。試驗結束后，以重復為單位稱剩料量，記錄耗料量，計算試驗期的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）及腹瀉率。

平均日增重(ADG，g)=增重/(試驗天數×試驗豬頭數)

平均日采食量(ADFI，g)=耗料量/(試驗天數×試驗豬頭數)

料重比(F/G)=飼料消耗量/增重

腹瀉率（%）=100×試驗期腹瀉仔豬總頭數/（試驗仔豬頭數×試驗期天數）

1.3.2 血清免疫指標測定

試驗期的第14 d及第28 d 20∶00點停止喂料，照常供水，于次日早上每個重復隨機選取1頭空腹仔豬進行前腔靜脈采血5 ml，收集于離心管中，不加抗凝劑，室溫靜置20 min后，3 000 r/min離心20 min，吸出上層血清置于-20℃保存。血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）采用酶聯免疫法測定，試劑盒購自南京建成弘大生物科技有限公司。

表1 斷奶仔豬基礎日糧組成及營養水平（風干基礎）

1.4 數據統計分析

試驗數據用SPSS 16.0統計軟件中的單因素方差分析法進行統計分析，用鄧肯法（Duncan's）進行多重比較，結果用“平均數±標準誤”表示。

2 結果與分析

2.1 抗菌肽替代抗生素對斷奶仔豬生長性能的影響（見表2）

由表2可見，1～14 d，抗菌肽組ADG、ADFI、F/G顯著優于對照組（P＜0.05），抗菌肽Ⅴ組比抗生素組ADG提高了 12.24%(P＜0.05)，F/G 降低了 3.25%(P＜0.05)。抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組分別比抗生素組ADFI提高了5.88%（P＜0.05）、8.62%（P＜0.05）。腹瀉率抗菌肽Ⅳ組和Ⅴ組與抗生素組顯著低于對照組（P＜0.05）。

15～28 d，各抗菌肽組ADG、ADFI顯著優于對照組和抗生素組(P＜0.05)，抗菌肽Ⅴ組F/G相比對照組降低了 9.71%(P＜0.05)，比抗生素組降低了 8.67%(P＜0.05)。抗菌肽組腹瀉率除Ⅲ組外均顯著低于對照組和抗生素組(P＜0.05)。抗生素組各項指標均與對照組差異不顯著(P＞0.05)。

表2 抗菌肽替代抗生素對斷奶仔豬生長性能的影響

1～28 d，各抗菌肽組ADG、ADFI顯著優于對照組和抗生素組(P＜0.05)，抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組F/G相比對照組分別降低了5.26%、9.36%(P＜0.05)，比抗生素組分別降低了1.82%(P＞0.05)、6.06%(P＜0.05)。抗菌肽Ⅴ組腹瀉率顯著低于對照組和抗生素組(P＜0.05)。抗生素組ADG顯著優于對照組(P＜0.05)，但ADFI、F/G均與對照組差異不顯著(P＞0.05)。其中以480 mg/kg抗菌肽組飼喂效果最好，ADG、ADFI、F/G均顯著優于其他各組(P＜0.05)。

2.2 抗菌肽替代抗生素對奶仔豬血清免疫指標的影響（見表3）

表3 抗菌肽替代抗生素對斷奶仔豬血清免疫指標的影響（mg/ml）

由表3可見，14 d，各抗菌肽組IgA、IgG、IgM均顯著優于對照組（P＜0.05），各抗菌肽組IgG顯著優于抗生素組（P＜0.05）。抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組IgA比抗生素組分別提升了25.74%（P＜0.05）、30.69%（P＜0.05），IgM比抗生素組提升了21.69%（P＜0.05）、29.32%（P＜0.05）。抗生素組IgM顯著優于對照組（P＜0.05），但IgA和IgG與對照組差異不顯著（P＞0.05）。

28 d，抗生素組與對照組差異不顯著（P＞0.05），各抗菌肽組IgA、IgG、IgM均顯著優于對照組和抗生素組（P＜0.05），其中以480 mg/kg抗菌肽組飼喂效果最好，IgA、IgG、IgM均顯著優于其他各組。

3 討論

試驗結果顯示，試驗各階段抗菌肽組ADG隨添加量的提高呈線性升高趨勢，1～28 d全期各抗菌肽組ADG均顯著優于對照組及抗生素組（P＜0.05）。抗菌肽之所以能夠促進仔豬生長，原因可能在于抗菌肽可從多方面改善了斷奶仔豬的吸收消化機能和腸道內環境。陳曉生等[4]研究顯示，在飼料中添加2.3 L/t的抗菌肽制劑，血清胰島素生長因子IGF-1顯著高于對照組（P＜0.05），而 IGF-1可以參與生長激素GH的調節，從而促進機體的生長和器官發育。鄧柏林等[5]用消化試驗估測糞排放量和氮排放量的方法來計算營養物質消化率，研究顯示，抗菌肽組糞便氮的排放量顯著低于對照組（P＜0.05），因此可提高育肥豬的營養物質消化率。H.Bao等[6]將豬源抗菌肽添加到肉雞基礎飼糧中，發現抗菌肽能顯著提高生長性能，增加腸道對營養物質的吸收，提高腸道免疫力。本試驗抗菌肽各階段對斷奶仔豬平均日采食量都有促進作用，顯著高于對照組及抗生素組（P＜0.05）。這可能是由于抗菌肽對體內激素水平起到了調節作用。都海明等[7]研究結果顯示在飼糧中添加抗菌脂肽可以顯著提升斷奶仔豬的胰島素水平。而胰島素能夠加強葡萄糖利用和生脂作用，可促進單胃動物采食量增加[8]。斷奶應激往往造成腸道菌群紊亂，大腸肝菌數量增多，這是斷奶仔豬腹瀉的重要原因。陳曉生等[9]研究表明，抗菌肽對大腸桿菌等腸道有害菌的抑殺能力要顯著大于金霉素（P＜0.05），有利于調節體內微生態朝有益方發展。張熠等[10]報道在飼糧中添加外源性抗菌肽能抑制病原菌，而對腸道正常菌群和機體細胞則無殺傷作用。王靜[11]在肉雞飼糧中添加不同水平抗菌肽能夠降低21、35日齡肉雞腸道大腸桿菌數量，300 mg/kg添加水平能提高肉雞35日齡腸道乳酸桿菌群數量，效果優于抗生素組。本試驗1～28 d抗菌肽Ⅴ組腹瀉率要顯著低于對照組和抗生素組，與上述結果一致。

IgA、IgG、IgM是由骨髓來源的B淋巴細胞所產生的免疫球蛋白，可介導機體的體液免疫，其在血清中含量的高低可反映機體體液免疫強弱[12]。IgA除了具有抗菌、抗病毒、抗毒素作用外，對機體呼吸道、消化道等局部黏膜免疫起著相當重要的作用，IgG有抗菌、抗病毒作用，且能中和毒素使其失去毒性，調理、凝聚和沉淀抗原，IgM是機體初次接觸抗原物質最早產生的抗體，也有抗菌、抗病毒和中和毒素的功能，在機體受到病原感染后與補體結合，溶解病原體。研究顯示，抗菌肽對腸道健康具有明顯促進作用，改善腸道結構，促進營養物質吸收；提高腸道屏障功能、改變腸道微生物菌群結構，從而提高機體免疫力[13]。劉莉如等[14]研究顯示，飼糧中添加不同水平抗菌肽可提高蛋用仔雞血液中IgA、IgG、溶菌酶和C3含量，并且隨添加量增加。各血液指標表達水平有上升趨勢。呂尊周等[15]在日糧中添加枯草芽孢桿菌抗菌肽可提升蛋雞血清中IgA、IgG、IgM和C3含量，其中添加量為400 mg/kg可顯著提高IgA和IgG含量（P＜0.05）。本試驗抗菌肽組IgA、IgG、IgM均顯著高于對照組（P＜0.05），后期28 d抗菌肽組相比抗生素組體現顯著優勢（P＜0.05），說明抗菌肽能夠提升斷奶仔豬免疫性能。這也是本試驗抗菌肽能夠提升斷奶仔豬生長性能降低腹瀉率的原因之一。

本試驗后期抗生素組豬出現被毛粗糙，精神不振的現像，并且ADG、ADFI、F/G相比對照組差異不顯著，腹瀉率有所上升，對IgA、IgG、IgM沒有顯著促進作用，并且在后期28 d，IgA、IgG、IgM反而要低于對照組，這可能是由于長期使用抗生素對斷奶仔豬自身臟腑功能造成了影響，導致生長和免疫性能下降。

4 結論

①在飼糧中添加抗菌肽能夠提高斷奶仔豬生長性能，降低腹瀉率，其中添加480 mg/kg抗菌肽顯著優于對照組和抗生素組。

②在飼糧中添加抗菌肽能夠提升斷奶仔豬IgA、IgG、IgM含量從而提高免疫力，其中添加480 mg/kg抗菌肽顯著優于對照組和抗生素組。

③綜合本試驗結果，抗菌肽可替代抗生素應用于斷奶仔豬飼糧中，且添加量為480 mg/kg時效果最好。