復合腸道保護劑對良鳳花肉雞生長性能、腸道發育及腸道菌群的影響

■李園園 李海英王俊花 彭 簫 孫蘇皖 段玉青

（新疆農業大學動物科學學院，新疆烏魯木齊830000）

近年來，隨著現代畜禽養殖業規模化和集約化的迅速發展，動物疾病的發病率逐漸升高，致使腸道條件性致病菌帶來的腸道問題日益突出。抗生素可以較快地治療腸道疾病，但由于抗生素的長期使用會導致病原菌產生耐藥性、藥物殘留、環境污染等問題[1-4]。因此，尋求綠色、安全的抗生素替代品已成研究的熱點[5]。研究發現，復合制劑可以發揮多菌種的協同作用，比單一菌劑更有效、更穩定[6]。飼用腸道保護劑有益于畜禽腸道健康，增強畜禽免疫力，改善畜禽生產性能[7]。張彩鳳等[8]研究表明，用乳酸菌和酵母菌復合制劑可以改善肉雞腸道健康，促進肉雞生長。

研究發現，葡萄糖氧化酶（GOD）能改善動物腸道微生態平衡、腸道酸性環境、去除霉菌毒素等作用；多酚類提取物具有抗菌、抗寄生蟲的作用；抗應激維生素能增加機體免疫機能、提高抗應激能力；枯草芽孢桿菌發酵物具有改善動物腸道菌群、增強免疫力、促進生長發育、提高生產性能等功能[9-13]。本試驗選用的復合腸道保護劑含有GOD、多酚類植物提取物、抗應激維生素、枯草芽孢桿菌發酵物等成分，旨在研究飼糧中添加不同水平復合腸道保護劑對良鳳花肉雞生長性能、腸道發育及腸道菌群的影響，為該復合腸道保護劑替代抗生素在肉雞養殖生產中的合理應用提供試驗依據。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

復合腸道保護劑由北京博仕奧生物技術有限公司提供，其有效成分為固定化GOD、多酚類植物提取物（類單寧）、抗應激類維生素、枯草芽孢桿菌發酵物。基礎飼糧（不含任何抗生素成分）由天康畜牧生物技術股份有限公司提供。

1.2 試驗動物與設計

本試驗選用1日齡的良鳳花肉雞375只，隨機分成5組，每組5個重復，每個重復15只雞。試驗分為陰性對照組，飼喂不添加抗生素的基礎飼糧；陽性對照組，在基礎飼糧中添加0.3 g/kg那西肽和0.25 g/kg硫酸黏桿菌素；試驗Ⅰ組，在基礎飼糧中添加1.5 g/kg復合腸道保護劑；試驗Ⅱ組，在基礎飼糧中添加2 g/kg復合腸道保護劑；試驗Ⅲ組，在基礎飼糧中添加2.5 g/kg復合腸道保護劑，試驗期為70 d，基礎飼糧參照NRC（1994）肉雞營養標準配制，其組成及營養水平見表1，各組試驗飼糧均采用粉狀飼料。

1.3 飼養管理

采用疊層籠養方式飼養，育雛期采用育雛火爐保溫。0～7 d光照23 h（黑暗1 h），8 d后光照16 h，白天進行自然光照，晚上再增加2～3 h光照，以方便雞群的采食和飲水，試驗全期自由采食和飲水，試驗前雞舍進行充分沖洗和嚴格消毒，試驗期間每周帶雞消毒2次，免疫依常規進行。記錄每天的飼料消耗量、死亡率、雞舍溫濕度等。時刻監控雞群的健康狀況。試驗期間除陽性對照組外不再使用任何抗生素。

1.4 測定指標及方法

表1 基礎飼糧組成及營養水平（風干基礎）

1.4.1 生產性能

在試驗第14、28、42、56、70 d早晨8∶00對肉雞空腹稱重，以重復為單位。每天記錄采食量，若雞中途死亡，對增重和飼料消耗進行校正。統計試驗期內每組雞不同日齡的平均體重、平均日采食量、平均日增重、平均料重比。

1.4.2 腸道指標

在試驗第56 d，以組為單位，每個組隨機選取7只體重相近，健康狀況良好的肉雞，頸靜脈放血屠宰后，依次剝離十二指腸、空腸、回腸、盲腸、直腸，測量各腸段長度后，剝離腸系膜和結締組織，用氯化鈉注射液沖洗腸段，用濾紙將液體吸干，稱各腸段重量，計算各腸段的相對長度和相對重量。

腸道相對長度(cm/kg)=腸段長度(cm)/肉雞活體重(kg)

腸道相對重量(g/kg)=腸段重量(g)/肉雞活體重(kg)

1.4.3 腸道形態

試驗第56 d，以組為單位，每組隨機選取7只體重相近，健康狀況良好的肉雞，頸靜脈放血屠宰后，依次剝離十二指腸、空腸、回腸，各自截取中段約1 cm的腸道組織，用生理鹽水緩緩沖洗干凈，浸入配制好的Bouin氏液固定液中固定，固定后制作石蠟切片，經蘇木素-伊紅美藍（HE）染色后，用中性樹膠封片，在光學顯微鏡下觀察，拍照保存，用圖像分析軟件（Image）進行統計，每個切片選取5個非連續性視野，每個視野統計2組數據，絨毛高度是指從絨毛頂端至隱窩開口處的垂直距離，隱窩深度是指隱窩開口處至隱窩，測量絨毛高度、隱窩深度，計算絨毛高度/隱窩深度（V/C）值。

1.4.4 腸道微生物菌群的測定

①腸道內容物的采集：試驗第56 d，以組為單位，每組隨機選取3只體重相近，健康狀況良好的肉雞，頸靜脈放血屠宰后，取盲腸段食糜1 g左右，倍比稀釋到10-6。

②菌群的培養：將上述腸道內容物10-4、10-5、10-6濃度的稀釋液分別接種于麥康凱培養基、MRS培養基、雙歧桿菌BS培養基、亞硫酸鉍培養基中，37℃恒溫培養，乳酸桿菌和雙歧桿菌培養48 h，大腸桿菌和沙門氏菌培養24 h，其中乳酸桿菌和雙歧桿菌厭氧培養，每克肓腸內容物的菌落數以lgCFU/g表示，試算公式如下：

每克內容物中菌落總數=lg[（菌落數×稀釋倍數×每次稀釋取樣體積）/（接種用樣品體積×樣品質量）]。

1.5 試驗數據統計分析

試驗數據用Excel 2007軟件進行數據整理，采用SPSS19.0統計軟件進行單因素方差分析，采用Dun?can's法進行各組之間的多重比較。試驗結果均以“平均值±標準差（Mean±SD）”表示。

2 結果與分析

2.1 添加不同水平復合腸道保護劑對良鳳花肉雞生產性能的影響(見表2)

表2 飼糧中添加復合腸道保護劑對良鳳花肉雞生產性能的影響

由表2可知，在飼糧中添加不同水平復合腸道保護劑對良鳳花肉雞平均體重、平均日增重均無顯著影響（P＞0.05）；在平均日采食量方面，1～14 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著降低4.71%（P＜0.01）、5.64%（P＜0.01）和 4.51%（P＜0.01），與陽性對照組相比差異均不顯著（P＞0.05）；15～28 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別顯著降低1.06%（P＜0.05）、1.10%（P＜0.05）和 1.02%（P＜0.05），與陽性對組相比，分別極顯著提高2.63%（P＜0.01）、2.59%（P＜0.01）和2.68%（P＜0.01）；29～42 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著降低7.03%（P＜0.01）、3.63%（P＜0.01）和6.17%（P＜0.01），與陽性對照組相比，分別降低 3.90%（P＜0.01）、0.39%（P＞0.05）和3.01%（P＜0.05），試驗Ⅰ組與試驗Ⅱ組相比，極顯著降低3.53%（P＜0.01）；1～70 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著降低2.48%（P＜0.01）、1.94%（P＜0.01）和2.66%（P＜0.01），與陽性對照組相比，分別降低1.32%（P＜0.01）、0.78%（P＜0.05）和1.51%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與試驗Ⅱ組相比顯著降低0.74%（P＜0.05）。

在料重比方面，1～14 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著降低4.35%（P＜0.01）、7.07%（P＜0.01）和7.07%（P＜0.01），與陽性對照組相比，均差異不顯著（P＞0.05）；15～28 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，均差異不顯著（P＞0.05），試驗Ⅲ組與陽性對照組相比，顯著提高2.58%（P＜0.05）；29～42 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別極顯著下降9.66%（P＜0.01）、8.21%（P＜0.01）和10.63%（P＜0.01）；1～70 d，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，分別降低3.31%（P＜0.05）、3.72%（P＜0.05）和4.55%（P＜0.01），與陽性對照組相比，均差異不顯著（P＞0.05）；其余各日齡段，各組之間均差異不顯著（P＞0.05）；在死亡率方面，試驗全期陰性對照組死淘率為6.67%，陽性對照組、試驗Ⅰ、Ⅱ組死淘率均為1.33%，試驗Ⅲ組未出現死亡。

2.2 添加不同水平復合腸道保護劑對良鳳花肉雞腸道發育的影響(見表3)

表3 飼糧中添加復合腸道保護劑對良鳳花肉雞腸道發育的影響

由表3可知，添加不同水平復合腸道保護劑在腸道發育方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組、陽性對照組相比，十二指腸、空腸、回腸、盲腸、直腸的相對長度和相對重量差異均不顯著（P＞0.05），各試驗組之間小腸各段相對長度、相對重量差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 飼糧中添加不同水平復合腸道保護劑對良鳳花肉雞腸道形態的影響(見表4)

表4 飼糧中添加復合腸道保護劑對良鳳花肉雞腸道形態的影響

由表4可知，在十二指腸形態方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，V/C值分別提高6.28%（P＜0.05）、10.68%（P＜0.01）和13.33%（P＜0.01）；試驗Ⅲ組與陽性對照組、試驗Ⅰ組相比，V/C值分別提高8.43%（P＜0.01）和6.63%（P＜0.05），其余各組之間均無顯著差異（P＞0.05）。在空腸形態方面，試驗Ⅱ組與陰性、陽性對照組相比，V/C值分別顯著提高11.51%（P＜0.05）和12.03%（P＜0.05）；其余各組之間均無顯著差異（P＞0.05）。在回腸形態方面，試驗Ⅲ組與陰性、陽性對照組相比，V/C值分別極顯著提高27.39%（P＜0.01）和26.71%（P＜0.01）；試驗Ⅲ組與試驗Ⅰ、Ⅱ組相比，V/C值分別顯著提高19.77%（P＜0.05）和18.59%（P＜0.05）。各組之間腸道絨毛高度、隱窩深度均無顯著影響（P＞0.05），各試驗組絨毛高度均有增加趨勢，隱窩深度有降低趨勢。圖1為56 d十二指腸切片圖譜，由圖1可觀察到，陰性、陽性對照組十二指腸絨毛不均勻并且有斷裂現象，絨毛間界限及隱窩模糊不清；試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組絨毛結構較完整，絨毛間界限及隱窩清晰可見。

2.4 飼糧中添加不同水平復合腸道保護劑對良鳳花肉雞腸道菌群的影響（見表5）

圖1 56 d十二指腸切片圖

表5 飼糧中添加復合腸道保護劑對良鳳花肉雞腸道菌群的影響(lgCFU/g)

由表5可知，添加不同水平復合腸道保護劑，在大腸桿菌方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，大腸桿菌數分別極顯著降低3.83%（P＜0.01）、5.23%（P＜0.01）和8.80%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與陽性對照組相比，大腸桿菌數極顯著降低3.25%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與試驗Ⅰ、Ⅱ組相比，大腸桿菌數分別極顯著降低5.17%（P＜0.01）和3.77%（P＜0.01）。

在沙門氏菌方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，沙門氏菌數分別降低2.28%（P＞0.05）、4.16%（P＜0.05）和8.58%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與陽性對照組相比，沙門氏菌數極顯著降低5.15%（P＜0.01），試驗Ⅰ、Ⅱ組與陽性對照組相比，差異均不顯著（P＞0.05），試驗Ⅲ組與試驗Ⅰ、Ⅱ組相比，沙門氏菌數均極顯著降低6.45%（P＜0.01）和4.62%（P＜0.01）。

在乳酸桿菌方面，試驗Ⅲ組與陰性對照組相比，乳酸桿菌數顯著提高3.36%（P＜0.05），試驗Ⅰ、Ⅱ組與陰性對照組相比，均無顯著性差異（P＞0.05），試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陽性對照組相比，乳酸桿菌數分別提高了3.48%（P＜0.05）、3.61%（P＜0.05）和7.23%（P＜0.01），試驗Ⅲ組與試驗Ⅰ、Ⅱ組相比，乳酸桿菌數顯著提高了3.62%（P＜0.05）和3.49%（P＜0.05）。

在雙歧桿菌方面，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陽性對照組相比，雙歧桿菌數分別提高了2.89%（P＜0.05）、4.20%（P＜0.01）和5.65%（P＜0.01）。試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與陰性對照組相比，均差異不顯著（P＞0.05），各試驗組之間差異均不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 飼糧中添加不同水平復合腸道保護劑對良鳳花肉雞生產性能的影響

平均體重、平均日增重、平均日采食量和料重比是評價肉雞生產性能的重要指標，研究發現，GOD、多酚類植物提取物、抗應激維生素、枯草芽孢桿菌等添加劑具有促進動物生長發育，提高生產性能、提高飼料利用率的作用[14-17]。

湯海鷗等[14]研究發現，在肉雞飼糧中添加不同劑量GOD，能顯著降低料肉比，提高平均日增重；肖傳明等[15]在肉雞飼糧中添加200 g/t植物提取物，結果顯示日增重提高、料重比降低、死亡率顯著降低。張敏等[18]研究顯示在肉雞基礎飼糧中添加維生素E，可降低肉雞料重比、提高生產性能。賈久滿等[19]指出在飼糧中添加枯草芽孢桿菌與復合酶制劑，可顯著提高產蛋率和蛋殼厚度，提高蛋雞生產性能。本試驗研究表明，在肉雞飼糧中添加復合腸道保護劑可顯著或極顯著降低全期料重比、平均日采食量，使平均體重、平均日增重均有上升趨勢，死淘率有所下降。由此可知，添加不同水平復合腸道保護劑可以提高肉雞生產性能，促進生長發育。

3.2 添加不同水平復合腸道保護劑對良鳳花肉雞腸道發育及形態的影響

禽類的腸道包括小腸和大腸兩個部分，營養物質的消化和吸收主要在小腸中進行，因此，家禽的小腸發育將直接影響到腸道對營養物質的消化、吸收和代謝，進而影響家禽的生產性能。小腸絨毛高度、隱窩深度、V/C值是反映小腸消化吸收的重要指標，當絨毛高度增加時，會增強小腸消化吸收的功能，隱窩深度與小腸上皮細胞更新換代速度有關，隱窩深度降低表明細胞成熟率升高，更新換代速度快，V/C值綜合反映小腸的吸收功能，V/C值越大，吸收能力越強[20-22]。宋海彬等[23]在飼糧中添加GOD，結果顯示GOD可提高肉雞十二指腸和空腸絨毛高度、降低隱窩深度、增加V/C值。Mahmoud等[24]研究發現，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可改善肉雞空腸形態。李茜等[25]報道，肉雞飼糧中添加水解單寧酸，可以使空腸絨毛高度升高，隱窩深度降低，V/C值升高，十二指腸V/C值升高。

本試驗條件下，添加不同水平復合腸道保護劑可顯著或極顯著提高十二指腸、空腸和回腸V/C值，其中添加2.5 g/kg的復合腸道保護劑可極顯著提高十二指腸和回腸V/C值，絨毛高度均有提高趨勢、隱窩深度有降低趨勢，但腸道相對長度無顯著變化。分析可能的原因是：復合腸道保護劑可抑制腸道細菌產生抗生長毒素，減少消化道問題，促進腸道絨毛高度增加、隱窩深度降低、V/C值升高，進而提高腸絨毛對營養物質的接觸表面積，減輕食物對腸道的刺激，促進肉雞腸道消化、吸收，提高生產性能，但對其發揮的作用機理有待進一步研究。

3.3 飼糧中添加不同水平復合腸道保護劑對良鳳花肉雞腸道菌群的影響

家禽腸道中寄居著500多種微生物且大多數是有益的，有益微生物對動物腸道菌群健康、殺滅外來有害物質起著重要作用[27]。腸道內的有益菌和有害菌處于相對平衡的狀態，當有益菌處于優勢菌群狀態時，有益菌可利用寡糖發酵產生短鏈脂肪酸，降低腸道內pH值，從而抑制大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌的增殖，保護腸道內環境的健康，維持畜禽機體健康生長；當有害菌占主導時，畜禽的機體生長會受到抑制，表現出疾病狀態[28-29]。研究發現，飼糧中添加GOD、枯草芽孢桿菌、植物提取物等有益物質可以提高機體有益菌的數量，促進乳酸菌、雙歧桿菌等有益菌的繁殖，抑制大腸桿菌、沙門氏菌等病原菌增殖，進而改善腸道微生態平衡[30-32]。Sen等[33]研究指出，飼糧中添加枯草芽孢桿菌，可以減少肉雞腸道內大腸桿菌的數量，提高雙歧桿菌的數量。李茜等[34]在肉雞飼糧中添加水解單寧酸，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組大腸桿菌數顯著低于對照組（P＜0.05），試驗Ⅱ、Ⅲ組乳酸桿菌數、雙歧桿菌數顯著高于對照組（P＜0.05）。呂遠蓉等[35]用復合微生態制劑飼喂肉雞，結果顯示其能夠顯著提高肉雞腸道內乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量，降低大腸桿菌和沙門氏菌的數量。

本試驗結果顯示，在肉雞飼糧中添加不同水平復合腸道保護劑，可有效增加有益菌數量（乳酸桿菌、雙歧桿菌），減少有害菌數量（大腸桿菌、沙門氏菌），其中2.5 g/kg復合腸道保護劑可顯著增加肉雞盲腸內容物中乳酸桿菌數量，極顯著減少大腸桿菌數和沙門氏菌數量，表明肉雞飼糧中添加復合腸道保護劑，在調節腸道微生物菌群方面起到促進作用，提高乳酸桿菌、雙歧桿菌數量的同時，降低了大腸桿菌、沙門氏菌的數量，規避了抗生素在殺滅腸道有害菌的同時也殺滅了有益菌，使腸道優勢菌群被破壞，畜禽腸道微生物菌群環境紊亂[36]。

4 結論

本試驗條件下，在肉雞基礎飼糧中添加不同水平復合腸道保護劑，可調節腸道菌群，改善腸道微生物環境，提高腸道絨毛V/C值，進而降低良鳳花肉雞平均日采食量、料重比，提高飼料轉化率，降低死淘率，綜合考慮，復合腸道保護劑可有效避免抗生素弊端，替代抗生素，以添加2.5 g/kg復合腸道保護劑為最佳劑量。