小鼠大腦缺氧后Mybbp1a在神經細胞中的表達變化及其意義

張林慶　高艷斌　馬　可　李家宏　任　強　陳志明　宋春來

(長春市公安局刑警支隊，吉林　長春　130000)

?

小鼠大腦缺氧后Mybbp1a在神經細胞中的表達變化及其意義

張林慶高艷斌馬可1李家宏任強2陳志明2宋春來3

(長春市公安局刑警支隊，吉林長春130000)

摘要〔〕目的探討小鼠顱腦損傷后Myb結合蛋白1a(Mybbp1a)隨時間變化的免疫組織化學表達改變。方法將50只昆明系小鼠隨機分為10組，采用手術結扎右側頸總動脈，分別于術后1、4、12、24 h、3、6、9、12、16 d處死，應用免疫組織化學方法檢測Mybbp1a的表達變化，神經細胞內平均灰度值以CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統進行測量。結果Mybbp1a在腦缺氧3 d后表達減少且差異有統計學意義(P<0.05)。結論Mybbp1a在小鼠腦缺氧3 d后增高，說明Mybbp1a可作為腦缺氧的中晚期指標，另外，Mybbp1a作為核糖體蛋白的重要轉錄因子，其在小鼠腦缺氧后中晚期表達減少，提示我們核糖體合成障礙很可能在神經細胞退行性變過程中發揮重要作用。

關鍵詞〔〕腦缺氧；Myb結合蛋白1a，核糖體

1吉林大學第一醫院兒科急診2吉林大學基礎醫學院法醫教研室

3內蒙古興安盟突泉縣公安局

第一作者：張林慶(1971-)，男，副主任法醫師，主要從事法醫學研究。

Myb結合蛋白1a(Mybbp1a)是重要的核仁轉錄調節因子，其在核糖體DNA合成過程中發揮重要作用〔1，2〕。研究證實，Mybbp1a 在細胞老化過程中發揮著重要功能，首先，Mybbp1a可調節細胞老化過程中的兩個關鍵因子的表達，包括P53以及RelA/p65，后者為核轉錄因子(NF)-κB的構成因子之一〔3〕。另外，研究還發現Mybbp1a可調節一些細胞周期調節因子及DNA損傷修復調節因子的改變，而上述因子也在細胞老化過程中發揮重要作用〔4〕。本研究采用手術方法制造小鼠腦缺氧模型，應用免疫組織化學方法檢測小鼠腦缺氧后Mybbp1a表達情況，就P53表達與小鼠腦缺氧后不同時間段的關系進行評價。

1材料與方法

1.1動物分組及模型建立采用昆明系雄性小鼠50只，隨機分為腦缺氧實驗組及正常對照組。實驗組分別于術后1、4、12、24 h、3、6、9、12、16 d處死。實驗過程中結扎右側頸總動脈，用10%水合氯醛(0.35 g/kg體重)腹腔內注射麻醉，剪去頸部皮毛并消毒皮膚后，沿中線切開皮膚，分離右側頸總動脈后結扎，手術縫合皮膚后，置鼠籠喂養。正常對照組不結扎頸部動脈但僅切開頸部皮膚。

1.2方法

1.2.1蘇木素-伊紅(HE)染色腦組織標本用10%甲醛溶液固定2 d，采用石蠟包埋，4 μm厚連續切片，進行常規HE染色。

1.2.2免疫組織化學染色采用Mybbp1a(購自武漢博士德生物工程有限公司)一抗進行組織化學染色，按試劑盒說明書應用SP法對腦組織中Mybbp1a進行檢測，操作。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗為陰性對照，對已知陽性的切片做陽性對照。神經細胞內平均灰度值采用CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統測量

1.3統計學方法應用SPSS3.0軟件進行單因素方差分析和t檢驗。

2結果

2.1常規HE染色腦缺氧2 h后，損傷灶周圍神經細胞尼氏體溶解消失，神經細胞及血管周圍間隙增寬，缺氧24 h后，腦實質內出現嗜神經細胞現象，缺氧3 d后，可見有膠質神經細胞增生。見圖1。

圖1　小鼠大腦缺氧后Mybbp1a免疫組織化學表達變化(DAB，×20)

2.2顱腦損傷后Mybbp1a表達量隨時間延長而下降在對照組神經組織中，Mybbp1a呈一致性表達，實驗組腦組織中Mybbp1a在傷后3 d開始表達減少，表現為平均灰度值降低，且隨缺氧時間延長后持續降低，缺氧9 d后達峰值。其中缺氧0 min，平均灰度值為165±3.5，1 h為178±7.2，4 h為157±7.9，12 h為159±5.2，1 d為136±8.9，3 d為91±6.9，6 d為76±8.2，9 d為79±9.1，12 d為73±2.3,16 d為71±6.2。

3討論

Mybbp1a作為重要的核仁轉錄調節因子，其在老化過程中的重要作用日益受到眾多學者的認識〔5〕。盡管目前研究已經發現Mybbp1a可調節細胞老化過程中P53以及RelA/p65兩個關鍵因子的表達，但其在神經細胞退行性變中的作用卻鮮有報道。腦組織作為體內最大的耗氧器官，對缺氧極為敏感，一旦發生腦組織缺氧，會發生一系列嚴重的臨床癥狀。本研究結果發現，在正常腦組織中，Mybbp1a在神經細胞中呈廣泛表達，這

與Mybbp1a功能密切相關，作為核糖體合成重要調節蛋白，其在神經細胞正常細胞行為過程亦發揮重要作用。本研究說明Mybbp1a可作為腦缺氧的中晚期指標，另外，Mybbp1a作為核糖體蛋白的重要轉錄因子，其在小鼠腦缺氧后中晚期表達減少，提示核糖體合成障礙很可能在神經細胞退行性變過程中發揮重要作用。這也意味著Mybbp1a可作為臨床神經細胞退行性變治療的潛在靶點。

參考文獻4

1Hochstatter J，Holzel M，Rohrmoser M，etal.Myb-binding protein 1a (Mybbp1a) regulates levels and processing of pre-ribosomal RNA〔J〕.J Biol Chem，2012；287(29)：24365-77.

2Yamauchi T，Keough RA，Gonda TJ，etal.Ribosomal stress induces processing of Mybbp1a and its translocation from the nucleolus to the nucleoplasm〔J〕.Genes Cells，2008；13(1)：27-39.

3Holmberg-Olausson K，Nister M，Lindstrom MS.p53-Dependent and-Independent Nucleolar Stress Responses〔J〕.Cells，2012；1(4)：774-98.

4Mori S，Bernardi R，Laurent A，etal.Myb-binding protein 1A (MYbbP1A) is essential for early embryonic development，controls cell cycle and mitosis，and acts as a tumor suppressor〔J〕.PLoS One，2012；7(10)：e39723.

5Kang H，Shin JH.Repression of rRNA transcription by PARIS contributes to Parkinson's disease〔J〕.Neurobiol Dis，2014；73C：220-8.

〔2015-02-15修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

通訊作者：宋春來(1975-)，男，主檢法醫師，主要從事法醫病理學研究。

中圖分類號〔〕R36〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)21-6063-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.025