多重PCR快速檢測技術在食品致病微生物檢測中的應用

摘 要：目前來說食品行業發展勢頭迅猛，食品行業的衛生狀況沒有得到很好的控制。導致很多有害的微生物和細菌，在嚴重危害著食品的品質和人們的身體健康。所以監管人員需要采取更先進更專業的微生物檢測技術，快速準確地檢測食品中致病微生物的含量，本文介紹現代食品檢測技術和多重PCR技術的技術原理，同時介紹多重PCR技術運用在食品致病微生物檢測的具體應用形式，以供同行參考研究。

關鍵詞：多重PRC快速檢測技術；食品致病微生物檢測；技術原理；檢測方式

中圖分類號：TS207.4 文獻標識碼：A 文章編號：1004-7344（2018）26-0375-02

1 引 言

食品致病微生物的種類數量在逐年增長，對于微生物的檢測方法也在不斷增多，同時得到一定的創新和改善。在實際的食品致病微生物檢測當中，采用傳統的常規培養法、免疫學方法等都存在著操作復雜、菌落培養時間長等種種問題。而采用多重PCR技術，其具有快速、簡便等多個優點，和傳統的檢測手段相比克服了操作繁瑣、時間長的缺點，同時相關檢測結果也表明，采用多重PRC技術效果顯著、準確率高，所以目前正在致病菌檢測、轉基因產品等方面的研究中被廣泛運用。

2 現代食品檢測技術和多重PCR快速檢測技術淺析

2.1 現代食品檢測技術

食品指的是不經過加工、或經過一定加工后，具有營養價值可供人們食用的物質。食品當中致病細菌含量的多少直接影響到了人們的身體健康，所以食品一定要經過嚴格的現代食品檢測技術檢驗。

運用生物、物理或化學等學科技術對食品工業當中生產的食物成品、半成品、原料等物質進行微生物的分析檢測，是食品檢測的首要任務。現代食品檢測技術根據被檢測樣本種類的不同，由微生物分析法、儀器分析法、感官檢驗法等多種檢測方式。隨著時代的進步和科學技術水平的提升，國際上在現代食品檢測技術方面的研究成果日新月異，先進的檢測技術在不斷用于實踐當中，新技術的產生使得食品行業可以運用更高精尖的食品檢測儀器來進行食品安全的檢測，不僅縮短檢測時間、降低檢測成本，還能提升檢測準確率，可謂一舉多得。目前主要有電子傳感檢測技術、生物傳感檢測技術、PCR基因擴增檢測技術等，本文就將針對多重PCR快速檢測技術展開分析和探討。

2.2 多重PCR快速檢測技術原理探究

在多重PCR快速檢測技術的實際運用當中，PCR技術主要依靠的是聚合酶的鏈式反應，采用主要模板為RNA，此外還需要使用的輔助工具是DNA聚合酶，以此來實現DNA片段的擴增。針對多重PCR技術來說，主要包括變性、退火和延伸三個步驟，是按從DNA單鏈轉化成DNA雙鏈的過程。我們把這個DNA雙鏈叫做模板，進行多次相同的操作之后，就可以實現循環擴增。多重PCR檢測技術是在傳統PCR檢測技術的基礎上，把引物的數量從兩對增加到多對，這樣可以實現多個序列同時擴增，提升擴增的速度和效率。

2.3 多重PCR快速檢測技術優勢

多重PCR快速檢測技術十分高效，在同一PCR反應管當中可以一次性檢測出多種病原微生物，甚至對病原微生物的具體型號進行分型，不僅檢測速度非常快，而且可以通過微量的樣本就得到準確的數據。對于成組病原體的檢測，比如戰傷感染厭氧細菌、腸道致病細菌、無芽孢厭氧細菌等多種細菌進行同時檢驗，既經濟又簡便。多種病原體在同一個樣本中被檢測出來，可以節省檢測的開支和時間耗費，為臨床提供更多有價值的信息。

3 多重PCR快速檢測技術用于檢測食品致病微生物方法

我國食源性病原菌的種類和數目十分多，其中以腸道致病細菌為主要病原，引起中毒的食物主要是動物性食品。根據目前我國的食品安全管理條例看來，針對食品病原菌的檢測通常包括：大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等，下面本人對常見的、危害性比較大的同時列在國家法律規定檢測清單中的有害菌進行描述，同時介紹多重PCR快速檢測技術在這些菌落檢測上的具體應用方式和應用特點：

3.1 腸出血性大腸菌群

大腸菌群是一群好氧和兼性厭氧的細菌，在人體正常的體溫下，24h內能夠發酵乳糖產酸產氣的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，大腸菌群的主要來源是人畜的排泄物，除了大腸埃希氏桿菌之外，還有腸桿菌科的腸桿菌屬等。我國食品衛生檢驗檢疫標準中提出要對大腸菌群的含量進行檢測，該菌群的檢出情況代表了食品中是否存在糞便污染。大腸菌群數量的高低代表食物受到糞便污染的程度和對人體健康威脅程度的大小。

對于大腸桿菌來說，它會產生毒素，這種毒素很難通過現有的檢測技術進行針對性的檢測，但是通過多重PCR快速檢測技術則可以在溶血素基因等基因為目的基因的基礎之上，準確發現食品中是否含有大腸桿菌。目前對于進口牛肉的質量檢疫當中采用多重PCR快速檢測技術，以此嚴格保障進口牛肉的質量合格。總而言之對于大腸菌群的檢測，采用PCR檢測技術和傳統的血清檢測相比，準確度提升了不少。

3.2 沙門氏菌

沙門氏菌同屬腸桿菌科，是革蘭氏陰性腸道桿菌。目前已經發現的沙門氏菌種類達到1000余種根據國家要求，因為沙門氏菌毒性較強，對人體的危害程度較大，所以比較容易遭受沙門氏菌感染的食品比如生雞蛋等，都需要進行嚴格的分類管理，進行嚴格標準的微生物致病菌檢測，讓這些常見的食物遠離沙門氏菌的侵擾，從而有效預防相關疾病對于沙門氏菌的檢測，由于食物中沙門氏菌的含量很低，在生產加工的過程中又由于各種因素的干擾讓該病原菌的檢測準確率進一步降低。而通過多重PCR快速檢測技術，可以有效明確沙門氏菌的血清類型，甚至還可以掌握實際的突變情況。目前常用血清型特異性引物rfb基因來專門針對沙門氏菌的致病菌檢測，根據檢測的實際數據表明，這不但可以運用在常規的血清檢測當中，還可以在別的肉品檢測當中運用。

3.3 金黃色葡萄球菌

金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬，是人類重要的一種病原菌，如果攝入量過多可以引發嚴重的微生物感染，甚至導致人類的死亡。這種細菌在自然界的分布十分廣泛，所以其危害食品安全性的可能性也很大。其可以通過食品加工者、銷售員等，間接引發食物的微生物感染，造成食物污染。

針對金黃色葡萄球菌來說，在蔬菜和腌制肉食當中都能夠大量存在并快速繁殖，最終形成大量的腸毒素導致人類中毒。對于金黃色葡萄球菌的微生物檢測技術早已有之，檢測方法比如動物實驗、血清學實驗、免疫熒光蛋白實驗和酶聯免疫吸附方法等，目前已經相當成熟，相關學者在采用了多重PCR快速檢測技術對金黃色葡萄球菌進行微生物檢測后發現，準確率和傳統方法比沒有明顯差異，二效率卻可以得到提升。

4 結 語

總而言之，多重PCR快速檢測技術在食品的微生物檢測中應用優勢和傳統檢測技術相比十分大，不僅可以提升檢測的準確度和效率，還能夠降低檢測的操作復雜程度，最終還可以擴增多方面基因的效果，為促進食品致病微生物的檢測提供十分重要的依據，由此作為基礎保障了食品安全的健康和質量，保障廣大人民群眾的身體健康，值得大范圍推廣和應用。

參考文獻

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收稿日期：2018-8-3