中藥復(fù)方多糖提取工藝研究進(jìn)展

陳慧娟，唐芳瑞，陳燕，舒青龍，曾樂

（1.亳州市人民醫(yī)院藥學(xué)部，安徽亳州 236800；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西南昌 330004）

中藥復(fù)方是由兩味或兩味以上藥物組成的方劑，有相對規(guī)定性的加工方法和使用方法，針對相對確定的病證而設(shè)、講究七情和合及君臣佐使的方劑，是中醫(yī)方劑的主體組成部分，體現(xiàn)了中醫(yī)藥理論的精華，是臨床醫(yī)用最主要的手段，也是中醫(yī)藥研究的重點(diǎn)方向［1-2］。中藥復(fù)方多糖是從中藥復(fù)方中提取而得到的一種高分子碳水化合物總稱，由糖苷鍵連接構(gòu)成的超過10個單糖分子的大分子長鏈［3］。多糖及其復(fù)合物在生物體中不僅是作為能量資源和構(gòu)成材料，更重要的是它存在于一切細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)中，參與生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動。現(xiàn)代研究表明［4-5］，中藥復(fù)方多糖具有廣泛的生物活性，主要有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗輻射、抗疲勞、降血糖、抑菌等藥理作用。中藥復(fù)方成份復(fù)雜，雜質(zhì)多、干擾大，使得多糖分離純化比較困難，加之近年來中藥復(fù)方多糖的藥理活性研究越來越熱，對樣品制備、成分提取技術(shù)要求也越來越高，本文對近年來中藥復(fù)方多糖的提取工藝進(jìn)行綜述，以期為中藥復(fù)方多糖相關(guān)研究與應(yīng)用提供參考。

1 多糖類化合物常用定量分析方法［6-7］

多糖類化合物測定時常先將多糖還原為單糖或寡糖，常用的方法是用硫酸或鹽酸酸化水解，主要的測定方法有以下幾種，其中比色法操作簡單，成本低，應(yīng)用最廣泛。

1.1 比色法 常用有硫酸-蒽酮、硫酸-苯酚法，其原理是根據(jù)多糖在硫酸的作用下水解成單糖，并脫水生成糖醛衍生物，再與苯酚或蒽酮縮合成有色化合物，在一定濃度范圍內(nèi)和適當(dāng)波長下，糖濃度與吸收值呈線性關(guān)系，從而測定其含量。

1.2 滴定法 多糖通過加酸、加熱水解成單糖或寡糖后，以次甲基蘭做指示劑，用經(jīng)過標(biāo)定的堿性酒石酸銅滴定，根據(jù)樣液消耗的體積計算其含量。此外，滴定法還有間接碘量滴定法、氧化還原滴定法。

1.3 色譜法 主要有高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜法（GC），多糖水解后作為供試品，與對照品溶液注入高效液相儀或氣相色譜儀，在相應(yīng)檢測器下測定峰面積，從而計算出多糖含量。

2 中藥復(fù)方多糖的提取工藝

中藥復(fù)方含有多種不同極性的化合物，提取時常利用多糖類化合物與其他化合物的極性不同，選用不同的溶劑處理達(dá)到去除雜質(zhì)的目的。多糖類化合物極性較大，可先用石油醚、高濃度乙醇等對復(fù)方進(jìn)行脫脂，然后用水或稀醇提取糖類成分，再除去蛋白質(zhì)等非糖雜質(zhì)［8］。目前報道的關(guān)于中藥復(fù)方多糖的提取方法主要有以下幾種。

2.1 水煎煮法 水煎煮法操作簡單，設(shè)備條件要求低，是傳統(tǒng)的中藥提取方法。多糖因極性較大，易溶于水，常選用水煎煮法提取。蔣潔等［9］通過正交實(shí)驗(yàn)考察煎煮時間、料液比、煎煮次數(shù)對桂圓益氣補(bǔ)血湯（由龍眼肉、黃芪、當(dāng)歸、山藥、甘草組成）煎煮工藝的影響，得最佳煎煮工藝條件為：加12倍量水煎煮3次，每次36 min，煎煮前浸泡30 min，浸膏得率39.3%，多糖得率6.80%。優(yōu)選的煎煮工藝條件穩(wěn)定，提出了可適用于桂圓益氣補(bǔ)血湯工業(yè)生產(chǎn)的工藝依據(jù)。南帆等［10］對黃芪桂枝五物湯（由黃芪、桂枝、芍藥、生姜、大棗組成）多糖提取工藝進(jìn)行研究，以提取溫度、pH、料液比3個因素作為多糖提取的影響因素，通過正交實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論：提取溫度對黃芪桂枝五物湯總多糖的提取有顯著影響，提取溶液pH值和料液比無顯著影響，確定最佳提取工藝為：提取溫度90℃，pH值為10的碳酸鈉水溶液按1∶10的料液比提取。Li等［11］對半夏厚樸湯（由半夏、厚樸、茯苓、干姜、紫蘇葉組成）中的多糖進(jìn)行提取，先用石油醚回流脫脂，80%乙醇回流2次洗脫單糖和寡糖，90℃下水提2次，無水乙醇沉淀多糖，最后采用Sevage法除蛋白，半夏厚樸湯多糖得率6.25%，該提取方法對極性較小的脂類、單糖、寡糖及蛋白進(jìn)行了有效去除，提高了多糖的提取率。

2.2 回流提取法 回流法是比較常用的提取方法，此方法簡單易操作，可不斷更新溶劑，浸提較完全，能提高有效成分的提取率［12］。宋棋芬等［13］采用回流提取法對復(fù)方桑黃顆粒（由桑葉、葛根、黃精、百合組成）中的總多糖進(jìn)行提取，得最佳提取工藝為：料液比1∶8，浸提溫度90℃，浸提1.5 h，提取3次，總多糖提取率2.85%。該提取工藝穩(wěn)定，方法簡單，提取率較高。許義紅等［14］采用中心組合設(shè)計-響應(yīng)面法對當(dāng)歸補(bǔ)血湯（由當(dāng)歸、黃芪組成）中的多糖進(jìn)行回流提取，以多糖提取率為響應(yīng)值，選取液固比、提取溫度、提取時間為考察因素，得最佳提取工藝為：液固比13∶1，93℃下提取2次，每次2.4 h，多糖平均得率為4.16%。另外，該研究還對同批次藥材采用正交設(shè)計法進(jìn)行提取工藝的優(yōu)選，多糖得率3.92%，低于中心組合設(shè)計-響應(yīng)面法優(yōu)選的提取工藝。

潘瓊等［15］應(yīng)用回流提取和超聲提取對二精方中枸杞和黃精進(jìn)行了合提和分提。結(jié)果：二精方回流提取多糖含量45.4%；二精方超聲提取多糖含量57.4%；枸杞回流黃精超聲提取二精方多糖含量70.0%；枸杞超聲黃精回流提取二精方多糖含量48.5%，最終確定二精方多糖最佳提取工藝為枸杞回流提取和黃精超聲提取，合并提取多糖。該研究對二精方中多糖的提取方法進(jìn)行了比較，并提出了兩味藥材采用不同的提取方法提取后再合并多糖，該方法雖提取多糖含量較高，但是中藥復(fù)方的配伍不是各個組分簡單的加和，各成分之間相互作用，相互協(xié)調(diào)，在提取的過程中各藥材之間的相互作用也是影響藥材功效的因素之一，不能僅以多糖含量作為提取工藝的考察指標(biāo)，還需考慮中藥復(fù)方的整體性及藥效。

2.3 超聲提取法 超聲提取的原理主要包括機(jī)械作用、熱學(xué)作用及空化作用，能夠增加物質(zhì)分子運(yùn)動的頻率和速度、溶劑的穿透力，從而加速目標(biāo)成分進(jìn)入溶劑。超聲提取可極大地提高提取效率，節(jié)約溶劑，避免高溫對提取成分的影響［16］。

徐飛等［17］采用超聲法提取六味地黃丸（由熟地黃、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉組成）總多糖，通過正交實(shí)驗(yàn)確定最佳提取工藝：10倍量初始溫度60℃的60%乙醇對復(fù)方藥材粗粉浸泡6 h后，超聲提取2次，每次30 min，超聲頻率25 kHz，總多糖得率為17.19 mg·g－1，并與傳統(tǒng)回流提取法比較（回流提取法總多糖得率為8.53 mg·g－1），效果明顯優(yōu)于回流提取法。張英等［18］考察了復(fù)方十子代平方（由菟絲子、枸杞子、五味子、車前子、去覆盆子、萊菔子、蘇子、去白芥子、茺蔚子、梔子、女貞子、決明子組成）超聲提取工藝條件，確定最佳提取工藝條件為：溫度70℃，超聲提取60 min，超聲功率40%，提取 3次，料液比 1∶20，總多糖提取率11.44%。該研究者還對提取的復(fù)方多糖進(jìn)行了分離純化，去蛋白后多糖含量為43.93%，醇沉提高到52.97%，透析后達(dá)到63.19%，通過純化總多糖的純度逐步提高。周帥飛等［19］采用超聲輔助法提取四君子湯（由紅參、白術(shù)、茯苓、炙甘草組成）多糖研究中，通過正交設(shè)計實(shí)驗(yàn)對提取溫度、提取時間、提取次數(shù)3個因素進(jìn)行考察，結(jié)果：影響多糖提取的主次因素為：提取次數(shù)＞提取溫度＞提取時間，最佳提取工藝為80℃提取3次，30分鐘／次，復(fù)方多糖的提取率可達(dá)17.1%。該研究還比較了Sevage法和Sevage-酶法純化多糖的效果，并進(jìn)行了單因素考察，得脫蛋白的最佳工藝條件為：胰蛋白酶添加量為1%，37℃水浴，酶解3 h，Sevage試劑處理3次，多糖脫蛋白處理后純度達(dá)到80.00%，多糖的保留率為92.69%。

2.4 微波輔助提取法 微波提取法是利用微波的高頻電磁波穿透提取介質(zhì)，加速被提取成分向溶劑的擴(kuò)散速率，及縮短擴(kuò)散時間，提高提取速率，該法具有操作簡單、提取快速、提取率高的優(yōu)點(diǎn)［20］。李桂銀等［21］采用微波輻射萃取補(bǔ)陽還五湯（由黃芪、川芎、赤芍、桃仁、地龍、當(dāng)歸、紅花組成）中多糖成分，采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)法，探討了不同微波輻射時間、微波功率及料液比等條件對多糖得率的影響。結(jié)果：微波輻射20 min，微波功率325 W，料液比為1∶7，補(bǔ)陽還五湯多糖得率為7.75%；另外，直接加熱萃取法在萃取時間240 min，料液比1∶20條件下，多糖得率僅為5.56%，且提取時間是微波輔助提取法的12倍。微波輔助提取法顯著縮短了提取時間，節(jié)省了溶劑，提高了多糖收率。

2.5 超微粉碎技術(shù)輔助提取法 超微粉碎技術(shù)是近年發(fā)展起來的一項應(yīng)用現(xiàn)代物理或化學(xué)方法對材料進(jìn)行微粉化的新技術(shù)，中藥經(jīng)超微粉碎后，粉末粒徑小且分布均勻，球性度及均質(zhì)度明顯改善，松密度及比表面顯著提高，而且細(xì)胞壁大部分被破壞，有效成分不需要通過細(xì)胞壁和細(xì)胞膜就能釋放出來，從而提高了有效成分的溶出速度及溶出率［22］。劉洪娜等［23］采用超微粉碎技術(shù)把芪苓制劑（由黃芪、茯苓、金銀花組成）加工成普通粉（60～100目）、超微粉（300目），以水提醇沉法提取總多糖，結(jié)果普通粉、超微粉樣品中多糖提取率分別為0.56%、4.5%，且多糖純度分別為 44.71%、75.03%。結(jié)果表明超微粉碎技術(shù)能顯著提高芪苓總多糖的溶出度。

3 結(jié)語

目前針對中藥復(fù)方多糖藥理活性研究較多，但因復(fù)方成分復(fù)雜，成分之間不易分離，純化難度較大，復(fù)方多糖提取工藝的研究比較薄弱。目前報道的中藥復(fù)方多糖提取方法多為水煎煮法、回流提取法及超聲波輔助提取法，而對于一些新的提取技術(shù)，如在單味中藥多糖提取中使用的酶法、超臨界流體萃取技術(shù)、半仿生提取法、雙水相萃取等，中藥復(fù)方多糖提取工藝中未見有報道，復(fù)方多糖的提取也可以嘗試采用新技術(shù)、新方法來提高多糖的提取率及純度。另外，為了達(dá)到更好的提取效果，針對中藥復(fù)方的復(fù)雜的成分，可采用不同提取方法協(xié)同應(yīng)用，如超聲-微波、超聲-酶法、超聲-微波-酶法、超聲波／微波-臨界流體等協(xié)同提取［24-25］，通過兩種或多種提取方式的優(yōu)勢互補(bǔ)，彌補(bǔ)單個提取法的不足，最大限度的提高復(fù)方多糖的得率。相信隨著中藥復(fù)方多糖的提取處理、純化工藝及新的提取技術(shù)研究的不斷深入，復(fù)方多糖的提取工藝將不斷得到優(yōu)化，藥材的利用率也將得到提高，進(jìn)一步促進(jìn)中藥復(fù)方多糖的藥理活性研究并將更多研究成果應(yīng)用到臨床中。

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