TC型維生素D受體基因增加房顫發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

欒正云， 黃燕， 沙敏， 徐捷， 郭婷， 葉軍， 丁蔚,*

(1. 江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院， 江蘇 鎮(zhèn)江 212013； 2. 泰州市人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室， 江蘇 泰州 225300)

心房顫動(dòng)(房顫)是臨床上最常見的持續(xù)性快速心律失常，可產(chǎn)生嚴(yán)重的臨床事件。目前，藥物治療房顫的效果有限，并且對(duì)房顫并發(fā)癥的療效也不佳。維生素D受體(vitamin D receptor,VDR)表達(dá)于多種免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和激活的T細(xì)胞表面，另外在心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等表面也有表達(dá)。VDR基因位于常染色體12q12-14，是甾體類受體超家族中的一員，由14個(gè)外顯子和數(shù)個(gè)內(nèi)含子組成，總長(zhǎng)度約75 kb。近年來國(guó)內(nèi)外有關(guān)VDR等位基因頻率的研究表明，VDR的基因型與身高[1]、骨質(zhì)疏松[2-3]、糖尿病視網(wǎng)膜病變[4-5]等相關(guān)，且VDR等位基因分布因人種不同也存在較大差異[6]。本研究通過檢測(cè)房顫患者外周血VDR基因rs2228570單核苷酸多態(tài)性(SNP)，探討VDR基因多態(tài)性對(duì)房顫發(fā)病的影響，為該疾病的臨床治療提供理論依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

房顫患者173例來源于泰州市人民醫(yī)院2016年2月至2017年1月的住院患者，其中男104例，女69例，平均年齡(60.09±19.59)歲。另選擇同期在泰州市人民醫(yī)院體檢中心健康體檢者173例作為健康對(duì)照組，其中男92例，女81例，平均年齡(54.50±15.01)歲。

1.2 引物的設(shè)計(jì)與合成

在NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中找出VDR的序列信息(http:∥www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_000376.2)，再找出rs2228570部分的序列信息(http:∥www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=2228570)，根據(jù)基因序列及參考文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)VDR基因rs2228570位點(diǎn)擴(kuò)增引物，由南京一道生物科技有限公司合成。rs2228570位點(diǎn)引物序列：上游5′-GCACCAAGGATGCCAGCTGGCCCTGGCACT-3′；下游5′-CACCTTGCTTCTTCTCCCTCCCTTTCCACT-3′。

1.3 血液樣本基因提取

清晨空腹采集EDTA-K2抗凝靜脈血，混勻。使用Blood Gen Mini Kit血液基因組柱式提取試劑盒(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)提取VDR基因。

1.4 VDR基因的PCR擴(kuò)增及測(cè)序

反應(yīng)體系：基因組模板3 μL 、DEPC水39 μL、10×Tag緩沖液 5 μL、2.5 mmol/L dNTP(江蘇省弗泰生物科技有限公司，Cat No.：BS004)1 μL、正向引物(50 pmol/L)0.5 μL、反向引物(50 pmol/L)0.5 μL、Taq酶(江蘇省弗泰生物科技有限公司，Cat No.：RD003)1 μL。然后進(jìn)行PCR：預(yù)變性95 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s, 55 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s,35個(gè)循環(huán);72 ℃ 5 min。將PCR產(chǎn)物測(cè)序、分析，結(jié)果見圖1。

圖1 VDR基因rs2228570的多態(tài)性測(cè)序圖

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般資料

見表1。與健康對(duì)照組比較，房顫組白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比、總膽固醇、三酰甘油、C反應(yīng)蛋白均顯著升高(P<0.05或<0.01)，而淋巴細(xì)胞百分比顯著降低(P<0.01)。

表1 健康對(duì)照組、房顫組一般資料比較

2.2 兩組VDR基因rs2228570多態(tài)性

VDR基因 rs2228570的SNP的差異分析結(jié)果顯示，房顫組VDR基因的CC型占20.2%(35/173)、TC型占68.8%(119/173)、TT型占11.0% (19/ 173)；對(duì)照組 CC型占31.2%(54/173)、TC型占43.4%(75/173)、TT型占25.4%(44/173)，兩組基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.956，P<0.01)。

2.3 房顫組VDR基因rs2228570不同基因型患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的差異

VDR基因rs2228570的TC型房顫患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比顯著高于CC型和TT型(P<0.05)，而淋巴細(xì)胞百分比、單核細(xì)胞百分比顯著低于CC型和TT型(P<0.05)。而不同基因型房顫患者肌酸激酶、CK-MB、總膽固醇、三酰甘油、C反應(yīng)蛋白均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表2。

3 討論

房顫的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，心臟的電生理、炎癥、心房重構(gòu)、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)等在房顫的發(fā)病機(jī)制中都具有重要的作用。VDR屬于類固醇激素/甲狀腺受體超家族成員，表達(dá)于心臟中的心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞表面，由427個(gè)氨基酸殘基組成，其與25-OH-VD3結(jié)合后的復(fù)合物可與靶基因上游啟動(dòng)子區(qū)或調(diào)控區(qū)域上的特定DNA序列相結(jié)合，進(jìn)而對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。

表2 VDR基因rs2228570不同基因型房顫患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)差異

a：P<0.05，與TC型比較

本研究顯示，房顫組VDR基因rs2228570的TC型比例顯著高于健康人群，且TC型房顫患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞比例顯著高于CC型和TT型，而淋巴細(xì)胞比例、單核細(xì)胞比例顯著低于CC型和TT型。該結(jié)果提示rs2228570位點(diǎn)的TC型是房顫發(fā)病的危險(xiǎn)因素，可能與炎癥的發(fā)生相關(guān)，從而導(dǎo)致房顫的發(fā)病。本研究為回顧性研究，且樣本數(shù)偏少，VDR基因多態(tài)性與房顫發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后之間的關(guān)系，仍有待于進(jìn)一步大規(guī)模的前瞻性研究證實(shí)。