乳腺癌根治術患者miRNA-23a表達水平與術后復發轉移的關系

周永安,趙德慶

(鄂東醫療集團黃石巿中心醫院(湖北理工學院附屬醫院)，1.乳腺腫瘤外科，2.胸部腫瘤內科，湖北 黃石435001)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，乳腺由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成，其原位癌不致命，但若未及時治療，其易發生轉移而侵襲心、腦、肺等重要器官，危及女性生命健康[1]。目前，外科根治手術是乳腺癌主要的治療方法，可有效的切除患者的腫瘤組織而抑制癌細胞擴散，但仍有部分患者因病情惡化而出現復發轉移，因此評估其預后逐漸受到關注和重視[2]。近年來，相關研究顯示，miRNA乳腺癌的發生、發展及治療、預后關系密切[3]。而miRNA-23a是機體中常見的miRNA之一，其在調節細胞增殖、存活、腫瘤血管生成、入侵和轉移中具有重要作用，但關于其與乳腺癌根治術后復發轉移的關系研究較少[4]。對此，本研究通過檢測乳腺癌根治術患者miRNA-23a表達水平，探討其與術后復發轉移的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1研究對象選取2013年3月至2016年3月本院收治的乳腺癌根治術患者160例，納入標準：①術后病理學證實為乳腺癌，②無其他原發性惡性腫瘤，③年齡>18歲、無精神病病史，④簽署知情同意書；排除標準：①妊娠及哺乳特殊人群，②乳腺癌根治術失敗或未獲得癌癥組織者，③有心、肝、腎等嚴重性原發性疾病，④資料均收集不完整；本次研究已經我院倫理委員會審批且通過，通過電話、復診等方式隨訪2年并依據復發轉移情況分為復發組(n=50例)和未發組(n=110例)。

1.2方法

1.2.1主要試劑和儀器 miRNA-23a和內對照引物、cDNA第1鏈合成試劑盒、miRNA提取分離試劑盒及熒光定量檢測試劑盒均購自北京天根生化科技有限公司，反轉錄試劑盒、Perfect Real time染料法實時熒光定量試劑盒均購自美國Invitrogen有限公司，其余試劑和儀器均購自美國Invitrogen公司，其中各基因引物序列及擴增產物長度見表1。

表1 不同基因引物序列及其擴增產物長度

1.2.2miRNA-363檢測 從冷藏庫選取病理科提供的乳腺癌組織解凍后，采用液氮研磨法磨成粉末，取3 ml通過miRNA提取分離試劑采用TRIzol一步法提取總RNA、反轉錄合成cDNA，將1 μl的cDNA置于10 μl反應體系中94℃擴增2 min，膠回收法純化 DNA 片段為標準品，通過實時熒光定量聚合酶聯反應法(RT-PCR)[5]檢測miRNA-23a表達水平，以U6為內參物，標準曲線法計算miRNA-23a相對表達量(U6校正值)，所有操作均由同一組醫護人員在嚴格依據試劑盒相關說明書的規定下進行。

1.2.3觀察指標和標準 觀察和比較兩組臨床資料及miRNA-363表達水平，其中miRNA-363相對表達量以 U6sn RNA 作為內參，以2-△△CT法計算相對表達量， △△CT=(CT目的-CT內參)實驗-(CT目的-CT內參)對照，CT 值為反應過程中實時熒光強度達到設定的閾值時所經過的擴增循環數[5]。

2 結果

2.1患者術后復發轉移關系的單因素分析

單因素分析結果顯示，復發組和未發組腫瘤類型、直徑、TNM分期、淋巴結轉移、雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)、miRNA-23a表達水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)，兩組年齡、月經狀態比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.2乳腺癌根治術患者術后復發轉移獨立影響因素的Logistic回歸性分析

Logistic回歸性分析顯示，腫瘤類型、直徑、TNM分期、淋巴結轉移、ER和PR、miRNA-23a表達水平是患者術后復發轉移的獨立影響因素，且在校正腫瘤類型、直徑、TNM分期、淋巴結轉移、ER和PR等因素后，miRNA-23a表達水平仍是患者術后復發轉移的獨立影響因素(P<0.05)，見表3。

表2 患者術后復發轉移關系的單因素分析[n(%)]

表3 乳腺癌根治術患者術后復發轉移獨立影響因素的Logistic回歸性分析

2.3miRNA-23a表達水平評估患者術后復發轉移的ROC曲線

ROC曲線顯示，miRNA-23a表達水平以<1.0評估患者術后復發轉移的敏感度、特異度、準確度、曲線下面積為92.00%(46/50)、96.36%(106/110)、95.00%(152/160)、0.882，一致性良好(K=0.821，P<0.001)，見圖1。

3 討論

乳腺癌是發生在女性乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，其病因尚未明確，但在我國的發病率呈上升及年輕化趨勢，已成為當前社會的重大公共衛生問題[6,7]。目前，乳腺癌根治術是乳腺癌有效的治療方法，通過切除腫瘤組織，可有效改善患者病情，其臨床療效已逐漸被認可，但因乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性、手術難以徹底切除所有癌組織、術后綜合治療技術等因素影響，部分患者會出現復發轉移，故如何有效評估患者術后復發轉移是人們關注的熱點[8,9]。

圖1 miRNA-23a表達水平評估患者術后復發轉移的ROC曲線

目前，乳腺癌根治術后復發轉移的評估主要依靠病理學分型，其中腫瘤類型、TNM分期、淋巴結轉移、ER和PR等已被大量研究證實與患者術后復發轉移有關，但其無法反映腫瘤組織基因表達情況的差異[10,11]。而近年來，隨著分子生物學理論和技術的迅猛發展相關研究顯示，miRNA是一類短序列、非編碼的單鏈小分子RNA，通常由22個堿基組成，其在乳腺癌、甲狀腺癌等腫瘤中均有異常表達，提示其對腫瘤的發生發展具有重要作用，且其對指導臨床治療有著重要作用[12,13]。而有研究表明，miRNA-23a是存在脊椎動物的基因組中的一種抑癌因子，在參與基因轉錄表達后，具有調控細胞增殖、存活等作用，其過表達可能可抑制腫瘤細胞的生長并促進細胞凋亡，從而起抑制腫瘤細胞增殖、侵襲的作用[14,15]。

本研究單因素分析結果顯示，復發組和未發組腫瘤類型、TNM分期、淋巴結轉移、ER和PR比較有統計學差異，此結果與王偉、Clarice等[16,17]研究基本一致，也說明了腫瘤類型、TNM分期、淋巴結轉移、ER和PR等乳腺癌根治術與患者術后復發轉移。同時，本研究中，復發組miRNA-23a表達水平明顯低于未發組，Logistic回歸性分析顯示，在校正腫瘤類型、直徑、TNM分期、淋巴結轉移、ER和PR等因素后，miRNA-23a表達水平是患者術后復發轉移的獨立影響因素，表明miRNA-23a表達水平與術后復發轉移的關系密切，其低表達水平可能提示患者術后復發轉移。在術后復發轉移患者中，可能其體內殘留乳腺癌細胞組織或再次惡化的過程中，需維持其異常快速增殖、生長及轉移等行為[18]，會抑制miRNA-23a表達水平，使miRNA對靶基因的降解或者抑制其翻譯的負性調控能力降低而抑制了其調控細胞增殖、存活等作用，導致難以有效抑制腫瘤細胞的生長及轉移，從而導致復發轉移的發生。此外，本研究ROC曲線顯示，miRNA-23a表達水平以<1.0評估患者術后復發轉移的敏感度、特異度、準確度、曲線下面積為92.00%、96.36%、95.00%、0.882，一致性良好，則提示檢測其表達水平能夠作為評估患者術后復發轉移的重要指標。因此，本研究認為乳腺癌根治術患者應加強監測miRNA-23a的表達水平，對miRNA-23a表達水平<1.0者應警惕其存在高復發轉移風險，并應及時加強患者復發轉移的監測檢查，以及時發現并作出相應有效的處理。

而本研究也存在一定的不足，如者miRNA-23a表達水平對乳腺癌根治術后復發轉移的作用機制復雜，且本次研究納入病例數較少，不足以代表所有病患情況，但乳腺癌根治術患者miRNA-23a表達水平與術后復發轉移的關系密切，其低表達水平可能提示患者術后復發轉移，檢測其表達水平可作為評估患者術后復發轉移的重要指標，并推測miRNA-23a可能是防治乳腺癌根治術后復發轉移的靶點，期待臨床更大樣本、更深入的研究。