快速檢測片在食品微生物檢測中的應(yīng)用

張陽

摘要：近年來，食品安全問題日漸嚴峻，人們對食品安全檢測的要求也越來越高，微生物污染問題是食品安全中很重要的一部分，如何讓微生物檢測在實踐中獲得準確度高的結(jié)果，并且實現(xiàn)快速檢測成了人們關(guān)注的問題。快速檢測片的出現(xiàn)為我們提供了檢測新思路，本文將對快速檢測片在食品微生物檢測中的應(yīng)用做個簡單概括。

關(guān)鍵詞：快速檢測片；食品微生物檢測

一、快速檢測片在食品微生物檢測中的應(yīng)用優(yōu)點

第一，快速檢測片可以實現(xiàn)少樣檢測，相較于傳統(tǒng)方法而言，快速檢測片不再需要繁雜的檢測過程---不斷按順序加入試劑，需要的檢測玻璃器具少，這樣就減少了對器具的清洗消毒和保存等繁復(fù)的工作。快速檢測片體型小、對保存條件也不嚴苛，利于市場運輸，也節(jié)省了人力物力財力。快速檢測片檢測后不會對環(huán)境產(chǎn)生二次污染，沒有試驗廢液或廢渣。與其他檢測方法相比，快速檢測法不僅適用于實驗室檢測，也同樣可以用在戶外或生產(chǎn)現(xiàn)場多種環(huán)境中使用。

第二，快速檢測片檢測時，取樣和接種工作幾乎無間隔交替進行，這樣避免了不必要的微生物污染，避免接種時間過長出現(xiàn)微生物大量繁殖對檢測結(jié)果造成大的誤差，這樣使得檢測結(jié)果更加準確。

第三，傳統(tǒng)檢測方法檢測速度較慢，而且對檢測條件也有較高要求，一般的小企業(yè)和基層單位不具備這樣的檢測條件，所以很難開展檢測工作，或者即便開始了檢測工作也難以達到既定的檢測效果。快速檢測片的檢測時間被大大縮短，而且用快速檢測法與傳統(tǒng)方法檢測金黃色葡萄球菌、霉菌酵母菌、大腸桿菌等的實驗數(shù)據(jù)表明，快速檢測法的檢測結(jié)果準確有效，說明檢測片法的確可以通過縮短接種時間而防止微生物繁殖，從而達到優(yōu)良的檢測屬性。

二、在食品微生物檢測中較為常見的測試片[2]

1.以濾紙為載體的檢測片

以濾紙為載體的檢測片是目前市面上最常見也是使用最多的一種，濾紙要選白色、密度分布均勻、無毒且吸附能力合適的作為檢測的載體。

菌落總數(shù)檢測片的檢測是利用氯化三苯四氮唑的氧化還原性，它在接受氫后可以形成不溶水的紅色產(chǎn)物，濾紙上的紅色點狀物的多少即為細菌總數(shù)。但由于濾紙纖維較大，所以部分菌株會在纖維縫隙中生長，所以檢測結(jié)果會比實際結(jié)果小。

大腸桿菌檢測片的檢測原理同樣也是氯化三苯四氮唑的氧化還原性，以及指示劑的顯色，大腸桿菌生長時產(chǎn)生的酶可以將氯化三苯四氮唑還原生成不溶水的物質(zhì)，即紅色菌落；細菌分解代謝產(chǎn)酸，使得指示劑變黃。所以結(jié)果如果是在黃色背景上有紅色菌落或者紅色菌落有黃色暈圈，即可顯示為陽性；反之為陰性。

大腸菌群、大腸桿菌紙片熒光法通過在檢測片上構(gòu)建一個理想化的酶反應(yīng)系統(tǒng)，加入待測菌所需營養(yǎng)物質(zhì)、酶促底物以及抑制雜菌生長的成分，檢測微生物產(chǎn)生的相關(guān)酶的活性來判斷菌的數(shù)量。

2.以Petrifilm為載體的檢測片

由美國3M公司發(fā)明的Petrifilm的檢測片載體，是兩層薄膜組成，上層薄膜為聚丙烯薄膜，下層為有網(wǎng)格且覆蓋有培養(yǎng)基的聚乙烯薄膜，培養(yǎng)基中含有微生物生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)和試樣所需要的試劑，兩層薄膜通過一種特殊的凝膠劑連接。用該Petrifilm作為載體的檢測片檢測待測物時，不需要再培養(yǎng)增菌，直接將檢測片放入適宜的環(huán)境中一定時間，既可計數(shù)。

細菌總數(shù)檢測只需要將樣品地道檢測片中央，用壓板輕壓，是樣品均勻布滿培養(yǎng)基，直接培養(yǎng)既可計數(shù)，該方法也可以用來做乳酸菌數(shù)量的檢測。

霉菌、酵母菌檢測片與細菌總數(shù)檢測有所不同的地方在于，需要在培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)來判斷是什么菌落，酵母菌菌落通常為小菌落，菌落邊緣清晰，顏色通常為灰色或藍綠色，菌落凸起，而霉菌菌落一般為大菌落，菌落邊緣模糊不清，顏色不均，中間顏色暗，菌落為扁平狀。

大腸菌群、大腸桿菌檢測片的檢測原理是利用大腸桿菌能產(chǎn)生葡萄糖苷酸酶，檢測片中含有葡萄糖苷酶指示劑，若樣品中含有大腸桿菌，指示劑會顯示為藍色圍繞在菌落周圍，因為表面覆蓋的膠膜會將乳糖代謝產(chǎn)生的二氧化碳圈住，形成一個個氣泡和菌落；而大腸菌群產(chǎn)酸，會使指示劑變紅，因此根據(jù)菌落顏色即可一次分辨出大腸桿菌和大腸菌落。

金黃色葡萄球菌檢測片中的培養(yǎng)基對金黃色葡萄球菌有很高的選擇性，培養(yǎng)后可看到暗紫色菌落。如發(fā)現(xiàn)可疑菌落，可利用金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生耐高溫的脫氧核糖核酸酶的特性，對可疑菌落進行高溫處理，如果是金黃色葡萄球菌則會顯示粉紅色環(huán)。

三、快速檢測片在食品微生物檢測的研究進展

近幾年來，雖然快速檢測片在食品微生物檢測上有很大的成就和進步，但仍然存在許多缺點等待解決。比如濾紙縫隙過大，用濾紙作為載體時，濾孔中的菌落與濾紙背面的菌落無法計數(shù)；濾紙持水力差，難以維持微生物生長所需要的濕度，濾紙上營養(yǎng)物質(zhì)不能均勻分布，所以菌落生長也會不均，造成計數(shù)難度以及最后結(jié)果的不準確。Petrifilm載體檢測片面積小，菌數(shù)量較多時難以計數(shù)，兩層薄膜在產(chǎn)氣產(chǎn)粘液過多是會影響菌落的生長，還有就是如果人力條件下為能在培養(yǎng)前將樣品擠壓均勻，樣品會從邊緣漏出，影響最后結(jié)果[2]。

因此為了彌補快速檢測片的缺點，我們將快速檢查法與其他方法想結(jié)合，做到取長補短、互為補充的檢測方法。如果待測物DNA中有目的基因，需要結(jié)合聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）對目的基因進行復(fù)制，該方法檢測結(jié)果精確度極高[1]。

參考文獻：

[1]張瑛.快速檢測片在食品微生物檢測中的應(yīng)用[J].食品安全導(dǎo)刊，2018（13）：62-63.

[2]吳清平，孫永，蔡芷荷，郭偉鵬.快速測試片在食品微生物檢測中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006（05）：635-637.