雛菊無菌實生苗叢芽誘導培養

李云海 黃丹琴 陳麗華

摘要 以MS+6-BA 1.0 mg/L培養基中培養的雛菊無菌實生苗為試驗材料，設置4個不同濃度6-BA的培養基處理，探究雛菊無菌實生苗叢芽誘導培養的 6-BA 適宜濃度。結果表明，在培養基6-BA濃度為0.3 mg/L、溫度為25 ℃左右、光照強度為1 500～2 000 lx、光照時間為12 h/d的條件下，雛菊無菌實生苗初代培養的叢芽增殖數最高，長勢也最好。

關鍵詞 雛菊；組織培養；實生苗；叢芽誘導

中圖分類號 S681.9 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）19-0183-01

雛菊（Bellis perennis），又稱延命菊、春菊、馬頭蘭花等，屬菊科翠菊屬一年生或兩年生草本植物[1]。雛菊植株花色各異，早春開花，植株矮小旺盛，生機勃勃，天真爛漫，可作為花壇、花境、花帶以及盆景和室內裝飾等的較好材料[2]。雛菊的常用繁殖方式有分株法、播種法、扦插法和嫁接法等。其中嫁接法和播種方法技術要求較高，繁殖過程復雜，且雛菊為典型的異花傳粉植物，易發生變異，難以保證其優良品性和純度。過去人們常采用分株法進行栽培繁殖，但分株法也有繁殖速度慢和繁殖效率不高等不足。目前，隨著植物組織培養技術的成熟完善及其在花卉優質種苗快速繁殖上的大量應用，已有眾多學者對菊科觀賞植物的組織培養技術進行了探索和研究。侯玉杰等[3]在觀賞菊的組織培養研究中發現，6-BA與NAA配合使用且6-BA的濃度不超過1.0 mg/L時，誘導叢生芽分化的效果最佳。楊 微等[4]以雛菊的根尖為材料，進行誘導分化和生根培養等的研究，最終建立起了雛菊試管種苗快速繁殖體系。

本試驗以雛菊成熟種子為試驗起始材料，通過外植體無菌處理培養方法得到雛菊無菌實生苗后，設計了4種不同6-BA濃度的培養基，對無菌實生苗進行叢芽誘導培養。擬通過比較在不同濃度6-BA上培養的實生苗的叢芽增殖數、葉寬和株高等指標，篩選出適宜雛菊實生苗叢芽誘導培養的6-BA濃度。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗初始材料為雛菊成熟種子，種子萌發培養基：MS+6-BA 1.0 mg/L+瓊脂粉5 g/L+蔗糖30 g/L（pH值5.8）。實生苗叢芽誘導培養基：以MS+瓊脂粉5 g/L+蔗糖30 g/L為基礎，添加6-BA的濃度分別為0.1、0.3、0.6、0.9 mg/L，調至pH值5.8，將培養基分裝到培養瓶中（每瓶30 mL左右）后，用封口膜封口并用棉線扎緊，經過121～125 ℃高溫高壓濕熱滅菌后備用[5-6]。

1.2 試驗方法

將雛菊種子在超凈工作臺中用蒸餾水浸泡30 min后，用0.1%升汞溶液浸泡消毒15 min，并不時搖動，然后用無菌水蕩洗4次，用無菌濾紙吸干水分。將種子接種到種子萌發培養基上進行發芽培養，2 周后將由種子萌發形成的長勢基本一致的無菌小苗去根，分別接種到 6-BA 濃度為 0.1、0.3、0.6、0.9 mg/L 的培養基中，分別用M1、M2、M3、M4表示，每個處理接種4瓶，每瓶培養基中接種 4 株。將上述接種好的各處理培養瓶苗，放置于光照強度1 500～2 000 lx、光照12 h/d及溫度25 ℃左右的培養室條件下培養。

1.3 調查指標

定期觀察無菌苗的生長和叢芽誘導情況等。至第45天時，對各處理瓶苗進行叢芽增殖數、株高和葉寬等指標考察測量和生物統計學分析。

2 結果與分析

2.1 不同處理下叢芽芽數統計與分析

種子接種2周后，發芽率達到87.5%。將無菌實生苗接種在含不同6-BA濃度的培養基中后，第45天時從培養瓶外觀察發現，培養瓶中的無菌實生苗叢芽以處理M2和處理M3生長較好，植株旺盛，葉片寬大，葉色較深。

如表1所示，各處理叢芽增殖的平均值隨著6-BA濃度的升高呈先升高后降低的趨勢；而新生叢芽的長勢與此趨勢成正相關。經方差分析和多重比較發現，處理M2的叢芽增殖數與其他處理之間差異顯著，其他各處理之間差異不顯著。因此，就叢芽增殖數指標而言，處理M2較有利于雛菊實生苗叢芽誘導增殖。

2.2 不同處理下實生苗叢芽葉寬統計分析

如表2所示，葉片寬度隨著6-BA濃度升高呈先升高后下降的趨勢。各處理間葉寬差異不顯著，表明6-BA濃度在0.1～0.9 mg/L之間時對實生苗叢芽葉片寬度的影響不明顯。

2.3 不同處理下實生苗叢芽株高統計分析

由表3可以看出，處理M2與處理M1、M4之間差異顯著，與處理M3差異不顯著；處理M1與處理M4之間差異不顯著。對此指標的分析進一步說明，6-BA濃度為0.3 mg/L時較適宜雛菊實生苗叢芽株高生長。

3 結論與討論

綜合上述，本試驗以MS+6-BA 1.0 mg/L培養基培養的雛菊無菌實生苗為試驗材料，通過設置4個不同濃度6-BA的培養基處理，探究雛菊無菌實生苗叢芽誘導培養的6-BA適宜濃度。結果表明，在溫度為 25 ℃左右、光照強度1 500～2 000 lx、光照時間 12 h/d的條件下，培養基中6-BA濃度為0.3 mg/L時，較適宜雛菊無菌實生苗初代培養的叢芽增殖，具體表現為實生苗叢芽增殖數最多、葉片寬大、植株高，與其他濃度處理的長勢相比差異顯著。

4 參考文獻

[1] 中國科學院植物研究所.中國高等植物圖冊（4冊）[M].北京：科學出版社，1980：417.

[2] 李書心.遼寧植物志（下冊）[M].沈陽：遼寧科學技術出版社，1991：447.

[3] 侯玉杰，朱濤，王曉濤.菊花的組織培養研究[J].信陽師范大學學報（自然科學版），2005（3）：323-325.

[4] 楊微，賈寶林，鐘程，等.雛菊組織培養及快速繁殖研究[J].北方園藝，2011（12）：110-113.

[5] 徐青華.雛菊的繁殖與栽培[J].科學種養，2012（12）：21.

[6] 唐正富.雛菊栽培及采種技術[J].云南農業科技，2008（5）：35.