交叉污染對全自動血凝分析儀SYSMEX CS2000I活化部分凝血活酶時間的影響

葛頌 王新芹

（南京鼓樓醫院集團宿遷市人民醫院 江蘇 宿遷 223800）

全自動血凝分析儀SYSMEX CS2000I測定凝血指標部分項目存在交叉污染現象[1]。我們在工作中發現凝血試劑通過試劑針的攜帶污染對血漿APTT測定存在一定的影響[2]，所做值偏低，造成負誤差[3]，針對這一現象，進行如下實驗。

1.儀器與試劑

1.1 儀器

日本SYSMEX CS2000I全自動血凝分析儀。

1.2 試劑

日本SYSMEX公司配套試劑由美國德靈公司（DADE BEHRING）生產，主要包括：FIB試劑（Thrombin reagent，批號：547541）；PT測定試劑（Thromborels，批號：562837）；APTT測定試劑（Actin，批號：557254）；配套緩沖液（OV Buffer，批號：554615）；氯化鈣試劑（Cacl2，批號：563812）；TT測定試劑（Test Thrombin，批號：47718）。清洗液（CleanⅠ，批號：A8035）。定值質控血漿（Control 1 Plasma，批號：548052）；定值質控血漿（Control 2 Plasma，批號：548271）。嚴格按照試劑說明書溶解保存使用試劑。

2.方法與結果

2.1 方法

2.1.1 交叉污染排查實驗 取當日標本若干，混合成混合血清，在無污染條件下單獨測定PT，APTT，FIB，TT各三次為對照組，再將PT，FIB，TT分別與APTT組合重復測三次[4]。

2.1.2 干擾分析實驗 將混合血漿400微升分別與10微升生理鹽水（NS），OVB，Thrombin試劑混合，作為標本進行APTT測定，確定對APTT造成干擾原因的查詢[5]。

2.1.3 設計避免交叉污染程序 取一份足量多的正常混合血清，重復測APTT20次[6]，FIB與APTT組合重復測20次，重設儀器設置[7]，使試劑針在吸取Thrombin 試劑后進行CLⅠ清洗和Cacl2前進行CLⅠ清洗后再對FIB與APTT組合重復測20次。定值質控1，2均重復測定10次。

2.1.4 統計學方法 采用SPSS21.0統計學軟件進行數據處理分析，定量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗，定性資料的組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2.2 結果

2.2.1 交叉污染排查結果 經過交叉污染排查實驗，發現FIB對APTT存在負干擾，具有非常顯著性的意義（P＜0.01）。其他項目無影響，根據資料顯示，為FIB測定后對APTT測定存在干擾檢測結果的物質。結果見表1。

表1 交叉污染排查情況對APTT的影響

2.2.2 干擾實驗結果 加生理鹽水組，加OVB組兩組數據與對照組進行比較無統計學意義（P＞0.05）。而加Thrombin reagent組與對照組相比，其直接立即變為凝塊，即APTT值趨近于0，差異具有非常顯著性的意義（P＜0.01）。結果見表2。

表2 分別與生理鹽水、OVB、Thrombin reagent混合后測定APTT的結果

2.2.3 避免交叉污染實驗 避免交叉污染實驗設計如下，與對照組作比較。經全自動血凝分析儀SYSMEX CS2000I測定凝血指標，再由該批號定值質控給定的靶值，算得一系列偏倚值，即單測定值質控1，FIB+APTT（設置前）組合，FIB+APTT（設置后）組合所得APTT偏倚分別為0.062，0.457，0.064；質控2分別為0.011，0.503，0.0098。由上分析可知，單測定值質控1,2血漿FIB+APTT（設置后）組合所得APTT偏倚在允許范圍內，而FIB+APTT（設置前）組合所測APTT偏倚超過允許范圍，進一步說明設置前FIB+APTT組合所得到的APTT結果偏低，存在負干擾。混合血漿及質控品1,2 FIB+APTT（設置前）與對照組之間的差異具有非常顯著性的意義（P＜0.01），FIB+APTT（設置后）與對照組之間無統計學意義（P＞0.05）。所作數據如下表3、4、5所示。

表3 避免交叉污染實驗[APTT與FIB+APTT（設置前）、FIB+APTT（設置后）混合血漿APTT值的比較]

表4 避免交叉污染實驗[APTT與FIB+APTT（設置前）、FIB+APTT（設置后）質控1血漿APTT值的比較]

表5 避免交叉污染實驗[APTT與FIB+APTT（設置前）、FIB+APTT（設置后）質控2血漿APTT值的比較]

3.討論

全自動血凝分析儀SYSMEX CS2000I在使用過程中存在較大的交叉污染現象，本文通過實驗發現FIB+APTT（設置前）組合所測APTT值偏低，其偏倚值超過允許范圍，說明FIB+APTT（設置前）組合所測APTT值存在明顯的負誤差（表4，表5，P＜0.01）。而進一步實驗發現FIB中的Thrombin試劑對APTT測定存在較大負干擾（表2，P＜0.01）。分析是由于Thrombin試劑中含有較高濃度的凍干凝血酶制劑，而SYSMEX CS2000I血凝分析儀只有一根試劑針和一個樣本針，僅靠去離子水清洗試劑針一次，很難去除前一種試劑的殘余成分，從而使Thrombin試劑對APTT測定造成較大負干擾。

綜上所述，由上一種試劑中含有與下一個標本反應的成分是導致凝血反應交叉污染的主要原因。因此，使用此儀器時要注意防止交叉污染，用CLⅠ清洗試劑針可有效避免交叉污染對APTT測定的影響。