乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條在無償獻血篩查中的應用探討

馬曉軍 楊文勇 李治鵬 楊帆 蔡海艷

（廣元市中心血站 四川 廣元 628017）

膠體金免疫層析技術，其原理為將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，當移動至固定的抗原或抗體的區域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合，聚集在檢測帶上，形成可肉眼觀察到的顯色結果。該種檢測方法具有結果判定清晰快速、具有較好的特異度和靈敏度且操作簡便等特點[1]。為進一步保證臨床用血安全，降低血液HBV及TP陽性報廢率，我站于2017年2月開始采用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條（膠體金法），進行獻血前快速篩查。

1.材料與方法

1.1 標本來源

所有檢測標本均來自廣元市2015年7月—2018年7月的84141例無償獻血者，獻血者年齡18至55歲，均體檢合格，ALT試紙條篩查ALT＜50U/L，硫酸銅比重法測量血紅蛋白，結果均符合要求。其中2015年7月—2017年1月獻血者樣本，為未開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合快速篩查項目前的樣本；2017年2月—2018年7月的獻血者樣本，為經乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條快速篩查后HBsAg及TP陰性樣本。

1.2 儀器與試劑

儀器：低溫低速離心機、冰箱、冰柜、Hamilton STAR全自動加樣儀、FAME全自動酶免檢測儀。

試劑：獻血前篩查采用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試劑（廈門英科創新），進行HBsAg、抗-TP快速檢測，試劑批號：2016123354、2017043311、2017113338、2018023308。ELISA采用兩種不同廠家的酶免試劑進行HBsAg、抗-TP檢測，HBsAg 檢測試劑：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒，批號：B20160823、B20170102（北京萬泰生物）6G0215、6M0223（法國伯樂）；TP檢測試劑：梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒，批號：N20170309、N20170309、N20161130（北京萬泰生物），2017020308、2017041108、2016092108（珠海麗珠）。

1.3 方法

1.3.1 快速篩查方法 對2017年2月—2018年7月無償獻血者樣本，采用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條進行快速檢測。

1.3.2 ELISA檢測方法 對快速檢測合格且其他篩查結果均符合要求的無償獻血者樣本進行ELISA試驗。試驗嚴格按照《血站技術操作規程（2015版）》要求，同時采用2種不同廠家生產的ELISA試劑樣本進行HBsAg及TP抗體檢測，檢測過程按照SOP及試劑使用說明書進行。

1.3.3 統計分析開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條進行快速檢測前、后的血液HBV及TP陽性報廢率。

2.結果

2015年7月—2017年1月，未開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條快速篩查項目前，41674例無償獻血者樣本中共計檢出HBV陽性樣本336例，占比0.81%，TP陽性樣本409例，占比0.98%。見表1。

表1 41674例標本中HBV、TP陽性標本比例

2017年2月—2018年7月，開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條快速篩查項目后，42467例初篩合格無償獻血者樣本中共計檢出HBV陽性樣本317例，占比0.75%，TP陽性樣本200例，占比0.47%。見表2

表2 42467 例標本中HBV、TP陽性標本比例

3.討論

酶聯免疫吸附試驗 （ELISA）是指將抗原抗體的特異性免疫反應與酶的催化反應相結合的檢測技術。其具有靈敏度高，特異性強，利于自動化操作等特點。ELISA檢測具有比膠體金法更高的靈敏度及特異度，但ELISA檢測需要借助特定的檢測設備，對環境、溫度等有較高的要求，且耗時較長[2]，因此采供血機構對獻血者標本的檢測一般為血液標本采集結束后進行。膠體金法具有操作簡便、結果判定清晰快速等優點，但相比于ELISA法，其靈敏度差，弱陽性多，容易出現漏檢；溶血及脂血的影響也會造成現假陰性[3]。

長久以來，減少對不合格血液采集所造成的資源浪費，降低成本，提升獻血服務效率及水平，進一步保障了臨床用血安全，一直是采供血機構的關注熱點，因此對無償獻血者獻血前采用操作簡便、結果判定清晰快速的膠體金法進行快速篩查就顯得尤為重要。文獻表明，HBsAg、TP金標試紙條技術在獻血前檢測中得到了廣泛應用，有效降低了血液檢測不合格率[4-5]。

我站檢測結果，2015年7月—2017年1月，未開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條進行快速篩查前，41674例無償獻血者樣本中共計檢出HBV陽性樣本336例，占比0.81%，TP陽性樣本409例，占比0.98%。2017年2月—2018年7月，開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條進行快速篩查后，42467例初篩合格無償獻血者樣本中共計檢出HBV陽性樣本317例，占比0.75%，TP陽性樣本200例，占比0.47%。對比可知，開展聯合快速篩查項目后，HBV及TP陽性率均低于項目開展前，其中TP陽性率降低最為明顯。

因我站開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條進行快速篩查前，對HBV采用了HBsAg單項目檢測試紙條進行快速篩查，所以HBV陽性率降低不多，但仍使HBV陽性率由0.81%降低到0.75%。可見乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條與HBsAg單項目試紙條相比，具有更高的靈敏度。其原因為乙型肝炎病毒表面抗原/ 梅毒聯合檢測試紙條采用膠體金，其分子量大、穩定、顯色持久、遷移速度慢，具有更好的潛在穩定性、精確性及可重復生產性等特點使得其適合于在快速檢測中的應用[6]。

綜上所述，乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試紙條有一定的特異性及敏感性，能有效降低采供血機構對不合格血液采集所造成的資源浪費，進一步保障了臨床用血安全，對于獻血前篩查具有重要意義。