雞甲胺磷中毒性遲發性神經病的電生理特點及藥物干預研究

胡軼虹， 周 艷， 邢英琦， 孫宏俠

急性有機磷中毒后引起遲發性周圍神經病(organophosphate induced delayed neuropathy，OPIDN)多發生于急性中毒后20 d左右，發生率5%左右[1]，主要表現為感覺-運動性多發性神經病，其特點為運動重于感覺，遠端重于近端，下肢重于上肢。以往許多文獻報告OPIDN選用大劑量B族維生素、ATP、地巴唑、硝酸一葉秋堿治療，但療效不確切。目前普遍認為糖皮質激素早期應用可以加速OPIDN的恢復，但副作用較大。三磷酸胞苷二鈉(CTP)，在機體內參與磷脂類及核酸的合成和代謝，具有營養神經，支持神經細胞存活，延緩死亡，提高神經細胞抗損傷能力，增強神經細胞活性，促進神經突起生長的作用。在臨床上廣泛應用于糖尿病性及酒精性周圍神經病，但缺乏科學的實驗研究。本研究用甲胺磷使leghorn雞染毒，將在出現遲發性神經病臨床表現前進行神經電生理檢測并觀察其動態變化，并通過神經電生理研究評估地塞米松及CTP的療效。

1 材料與方法

1.1 動物來源及分組 萊亨母雞(長春市生物制品所免疫室)75只，雞齡8～14 m，體重(1.5±0.5) kg，營養良好。隨機分為3組，每組25只，從染毒后第2 d起給A組地塞米松(長春圣泰動物藥業有限公司1 mg/kg)，B組CTP(北京三九萬東藥業有限責任公司 3 mg/kg)，C組生理鹽水(1 ml/kg)，肌肉注射，每天1次，連續7 d。

1.2 動物模型的建立 這些Leghorn雞實驗前稱重，單只飼養于底是鐵絲網眼的鐵絲籠(0.5 m×0.5 m×0.8 m)之中，房間的溫度控制在21～23 ℃，每12 h光照/12 h黑暗為一個循環，甲胺磷(湖北沙隆達股份有限公司)用植物油溶解，濃度為5 mg/ml，按2 ml/kg體積通過套管直接灌入已斷食24 h的雞素囊中，染毒的雞用阿托品(河北省鄭州獸藥廠)保持度過急性期，染毒前20 min(8 mg/kg)肌注，染毒后3、6、10 h(4 mg/kg)肌注。

1.3 標本的留取 分別于染毒后1 w、2 w、3 w、4 w、8 w隨機取各實驗組2～6只進行標本取樣。雞在腹腔注射水合氯醛麻醉下，固定在特制木板上，室溫25 ℃，下肢去皮，在髂關節處沿坐骨神經走行鈍性剝離肌肉，用玻璃分針游離坐骨神經，至膝關節分為脛神經和腓神經，于髂關節及膝關節兩處用小剪刀剪斷，取坐骨神經長約3 cm浸于臺式液中，除去周圍脂肪組織，進行電生理檢測。

1.4 主要儀器及電生理學檢測方法 連接Powerlab生物信號記錄儀(澳大利亞艾德公司生產，吉林大學生理實驗室提供)各組件，打開電源開關，予熱20～30 min。將神經屏蔽盒的所有電極用臺氏液棉球擦拭，然后用一臺氏液浸濕的棉線調試記錄儀。其后將神經粗的一端放在刺激電極上，細的一端放在記錄電極上。蓋上屏蔽盒，在50 Hz交流干擾小的情況下進行實驗。調節刺激強度，從0.1 v開始，逐漸增加刺激強度至產生雙向動作電位，當刺激強度增至1 v，動作電位不再加大，記錄刺激偽跡前沿到動作電位起始處時間間隔即為潛伏期，動作電位的上相波頂點與下相波的最低點之間的距離即為波幅。運動神經傳導速度的測定基本同前，近端置于刺激電極上，遠端置于兩個記錄電極上，兩記錄電極間距離為2.5 cm，放大器有A、B兩組，示波器Y上和Y下條件一致(放大倍數均為500)，按刺激器起動鈕可產生上下兩個動作電位，用兩記錄電極間距離除以兩動作電位潛伏期差即為神經傳導速度。

1.5 臨床觀察指標 每日觀察雞流涎，流淚，呼吸，瞳孔及肌束顫動、步態等遲發性神經毒性的臨床體征，臨床OPIDN的分級標準依照1987年Robertson的分級標準[2]，0級：沒有體征；1級：步態異常；2級：動物用后臀休息后但還能站立；3級：完全癱瘓。

2 結 果

2.1 模型死亡、體征變化 雞經甲胺磷染毒后5～10 min即表現萎靡、流涎、瞳孔縮小、喜臥，從第2 d開始有動物死亡，共死亡10只，死亡時間為2～6 d，另2只分別死于染毒后12 d及40 d，3組間死亡率無顯著性差異。之后經過1 w左右的潛伏期，出現周圍神經病的癥狀和體征，動物的表現開始呈全身無力狀態，喜臥，后出現步態不穩，逐漸發展為站立困難，此期肌力下降表現為1級及2級，無完全癱瘓者，至第4 w肌力恢復正常，3組間發病率無顯著性差異。

表1 各實驗組死亡及發病情況的比較

各實驗組死亡及發病差異無顯著性P>0.05

2.2 電生理檢測結果 染毒后1 w，波幅有明顯降低，而運動神經傳導速度無明顯改變，提示周圍神經早期以軸索損害為主。其后2，3 w波幅逐漸升高，至第4 w波幅已近恢復正常。染毒后2 w出現運動神經傳導速度減慢，提示出現脫髓鞘改變，至第8 w運動神經傳導速度已恢復正常。3個實驗組相比較差異無顯著性(見表2、表3)。

表2 各實驗組運動神經傳導速度變化

注：組內比較1 w、8 w與2 w、3 w、4 w間有顯著性差異P<0.05；組間比較差異無顯著性P>0.05

表3 各實驗組波幅變化

注：組內比較1 w、2 w、3 w與4 w、8 w間有顯著性差異P<0.05；組間比較差異無顯著性P>0.05

3 討 論

OPIDN發生與有機磷農藥的種類，中毒途徑及中毒量有關。甲胺磷(又名多滅磷或克螨隆：Methamidophos/Tamaron，化學名OS-二甲基-硫代磷酰胺：OS-dimethylphosphoramidothiolate)屬硫代磷酸酯類化合物，高毒，是一種高效、內吸、觸殺、低殘留、廣譜性有機磷殺蟲劑，對人、畜高毒[3]。不同的有機磷農藥引起的OPIDN有種屬特異性，以人類和雞最為敏感，而嚙齒動物則不敏感。鑒于消化道染毒毒物劑量易于控制，雞對甲胺磷的敏感性高，我們選用萊亨母雞進行甲胺磷染毒制成遲發性神經病的動物模型。本實驗發現電生理改變(染毒后1 w)明顯早于臨床體征(染毒后2 w)的出現，電生理檢測的陽性率(90%)也明顯高于臨床體征的陽性率(14.7%)，這更加客觀地說明甲胺磷染毒萊亨雞是一種成功的OPIDN模型。

1987年Senanayake首次報道急性有機磷中毒后1～4 d可發生一種以肌無力為突出表現的綜合征，因發病時間居于急性膽堿能危象和遲發性周圍神經病之間被稱為中間綜合征[4]，為有機磷中毒的主要病死原因。本實驗死亡動物染毒后已用阿托品搶救度過急性期，死亡時間主要在2～6 d，主要原因可能是中間綜合征。曾有學者就早期使用激素治療中間綜合征進行過臨床研究[5]，發現其未降低發病及死亡率，這與我們的實驗結果相一致。有學者[6]提出中毒引起的周圍神經變性，先影響最長神經的末稍端，而后慢慢地向中樞段擴布。中毒性變性的原發病變主要在胞體，是代謝性障礙，導致軸漿流中營養成分減少，供應末梢減少，很少有脫髓鞘變化。因此中毒變性時，主要表現為動作電位波幅劇減，而運動神經傳導速度大多正常或輕度減慢[7]。本實驗電生理檢測顯示染毒后1 w出現波幅明顯降低，2 w出現運動神經傳導速度減慢，但比波幅改變輕，這與上述理論完全吻合。

以往許多文獻報告OPIDN選用大劑量B族維生素、改善微循環及針灸理療等治療，但療效不確切，中醫以各種活血化淤方劑為主[8～10]，臨床取得一些療效，但缺乏實驗證據。虞炳慶等應用激素治療25例OPIDN患者，發現其能顯著提高遲發性神經病1 y內痊愈顯效率[11]。王敏等[12]對22例有機磷中毒后遲發性神經病患者進行為期10～14 d的CTP治療，發現總有效率達77%。本實驗中應用地塞米松及CTP進行干預治療，但各時間點組間比較差異無顯著性。至第8 w，電生理檢測結果已近恢復正常，提示本病有自愈傾向，且激素副作用大，因此不主張臨床應用。CTP也未得到陽性結果，可能與用藥劑量及治療療程有關。為了在OPIDN治療上有所突破，還應進行發病機制方面的相關研究。