高效液相色譜法測定洗浴產品中6—姜醇和6—姜酚含量

譚焯針　余丹瑤　魏海峰　張沛林　李慧怡　郭長虹

【摘 要】建立測定洗浴產品中6-姜醇、6-姜酚2種生姜活性成分的高效液相色譜分析方法。洗發水和沐浴露樣品經甲醇渦旋混勻及超聲提取后，用AQ-C18反相色譜柱進行分離，以乙腈-水作為流動相，梯度洗脫，采用二極管陣列檢測器（PDA）進行檢測，檢測波長為280nm。在優化的實驗條件下，6-姜醇和6-姜酚在2.5～50.0mg/L范圍內線性關系良好，相關系數均為0.9997。在12.5、50.0、250.0mg/kg 3個添加濃度水平下，加標回收率為87.5%～102.8%，相對標準偏差為0.8%～4.2%。6-姜醇和6-姜酚的方法檢出限（S/N=3）為4.0 mg/kg，定量限（S/N=10）為12.5mg/kg。該方法簡單、準確、穩定性高，適用于洗浴產品中6-姜醇、6-姜酚的測定。

【關鍵詞】6-姜醇、6-姜酚；洗浴產品；高效液相色譜法

中圖分類號： R284；O657.72 文獻標識碼： A 文章編號： 2095-2457（2018）23-0287-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.23.130

【Abstract】A method of high performance liquid chromatography was developed for the simultaneous determination of 6-gingerol and 6-zingiberol in bath products.The samples of shampoo and body wash were extracted with methanol by ultrasound extraction technology.Chromatographic separation was performed on reversed phase column of AQ-C18，with gradient elution using acetonitrile and water as the mobile phases.The detection was performed with a Photo-Diode Array（PDA）detector.The ultraviolet detection wavelength was set at 280nm.With this method，6-gingerol and 6-zingiberol had good linear crossing range from 2.5 to 50.0mg/L with the same correlation coefficient 0.9997.The average recoveries of 6-gingerol and 6-zingiberol were 87.5%～102.8% with the relative standard deviation in the range of 0.8%～4.2%.The method limits of detection（S/N=3） were 4.0mg/kg，and the method limits of quantification（S/N=10） were 12.5mg/kg.With the advantages of simple，rapid and accuracy，this method was suitable for the determination of 6-gingerol and 6-zingiberol in bath products.

【Key words】6-gingerol and 6-zingiberol；Bath products；High performance liquid chromatography （HPLC）

生姜是一種世界范圍內廣泛使用的香辛調味料，生姜在中醫藥有止嘔止咳的功效，我國具有悠久的生姜入藥和食用生姜傳統。姜辣素是構成生姜中辛辣口感的主要生物活性成分。研究表明：姜酚類和姜醇類物質是姜辣素的主要構成成分之一[1]，姜酚實驗證明具有強心、保肝利肝、抗血小板凝膠等多種保健作用[2-3]，姜醇也同樣具有抗氧化、抗炎等生理功效[4]。6-姜酚是生姜中姜酚類物質的主要成分，約占75%[5]。生姜以及姜油提取物廣泛應用于食品、保健品、化妝品，姜根提取物常添加于洗發水和沐浴露產品中，增強其香氣及功效作用。

高效液相色譜法是最常用于測定姜醇和姜酚的方法，目前文獻報道的檢測對象主要是生姜及姜根提取物，并沒有檢驗方法可用于洗浴產品中姜醇和姜酚含量的檢測。生姜及生姜提取物中姜醇和姜酚的含量較高（0.59～7.91mg/g）[6]，故文獻報道的方法檢出限均較高。劉雯等建立了生姜提取物中6-姜酚含量HPLC檢測方法[7]，線性范圍為25～350mg/L，6-姜酚的儀器檢出限為0.8mg/L。張科衛等建立高效液相色譜法測定小半夏湯中6-姜酚和6-姜醇的檢測方法[8]，6-姜酚的線性范圍127.3～1445.7mg/L，6-姜酚的線性范圍44.4～399.6mg/L。本研究采用高效液相色譜法檢測洗浴產品中的6-姜醇和6-姜酚，6-姜醇和6-姜酚方法檢出限均達到4.0mg/kg，該方法操作簡單、準確、穩定性高，對洗浴產品中姜辣素的檢測有重要意義。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Waters 2988（配有PDA檢測器）；超純水系統：Milli-Q型；

6-姜醇（純度98.7%），6-姜酚（純度95.5%）標準品來源于ChromaDEX；

甲醇（色譜純），乙腈（色譜純）；超純水（18.2MΩ），實驗室自制。

1.2 標準溶液制備

標準儲備溶液：分別準確稱取6-姜醇，6-姜酚標準品10mg（精確至0.1mg），用甲醇定容到刻度，搖勻，配制成濃度為1.0mg/mL的標準儲備液，-20℃存放。

標準工作液：分別移取一定量的標準儲備液于10 mL比色管中，用甲醇定容到刻度，搖勻，配制成濃度分別為2.5，5.0，10.0，25.0，50.0mg/L的標準工作液。

1.3 樣品前處理

準確稱取2.0g（精確至0.001g）樣品，置于10mL比色管中，用甲醇定容至刻度線，渦旋混勻，超聲提取15min，以10000r/min高速離心8min，取部分樣品溶液，過0.22μm濾膜，待測。

1.4 色譜條件

色譜柱：AQ-C18（月旭科技（上海））4.6mm×250mm，5μm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進樣體積：20L。流動相：水+乙腈，梯度洗脫；梯度洗脫程序：0～8min，20%乙腈，8～9min，70%乙腈，9～18min，70%乙腈，19～25min，20%乙腈；檢測波長為：280nm。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

6-姜醇和6-姜酚在220nm和280nm處有均有較強紫外吸收。280nm處波長吸收溶劑、基質的干擾較小，滿足靈敏度要求，綜合考慮，選擇280nm作為檢測波長。

2.2 液相色譜分離條件的優化

洗發水和沐浴露中添加抗菌抑菌的功效成分和多種天然成分提取物，未知物對6-姜醇和6-姜酚的液相分離干擾較大，采用梯度洗脫能提高分離度，降低未知物對目標化合物的干擾；乙腈有較強的洗脫能力，能使色譜峰有更好的對稱峰形同時能節省色譜分析時間，所以采用乙腈-水作為流動相，梯度洗脫分離。經試驗優化，有效的實現目標化合物在洗浴產品中的色譜分離，且峰形對稱（見圖1）。

2.3 提取溶劑的選擇

本方法優化階段選用化妝品中有機小分子常用的提取溶劑甲醇作為目標物的提取溶劑，甲醇可以完全溶解水基化妝品和香波，6-姜醇和6-姜酚在甲醇均有較高溶解度，方法的提取回收率高，所以確定甲醇作為提取溶劑。

2.4 方法的線性關系與檢出限

在優化實驗條件下，對1.2中的系列標準工作溶液進行測定，以橫坐標為洗浴產品中-姜醇和6-姜酚的質量濃度（X，mg/L），縱坐標為6-姜醇和6-姜酚的色譜響應峰面積（Y）繪制標準曲線，得線性回歸方程及相關系數。實驗結果：在2.5～50.0mg/L范圍內，6-姜醇和6-姜酚的線性關系良好，線性方程分別為y=13809x-11675和y=13695x-10001，相關系數（R2）均為0.9997。

采用空白基質樣品加標，通過計算得到6-姜醇和6-姜酚的方法檢出限（MLOD，S/N=3）為4.0mg/kg，方法定量限（MLOQ，S/N=10）為12.5mg/kg，其靈敏度滿足分析要求。

2.5 方法的回收率與精密度

分別選用洗發水空白樣品為加標基質，按本試驗條件進行低、中、高（12.5、50.0、125.0mg/kg）3個添加水平的添加回收率試驗，每一水平設6個平行，測定結果見表1。結果顯示，沐浴露產品的平均回收率為87.5%～102.8%，相對標準偏差為0.8%～4.2%，表明方法具有較高的回收率，準確度和精密度。

3 結語

本研究建立了高效液相色譜法測定洗浴洗滌產品中6-姜醇和6-姜酚的分析方法，對色譜分離條件進行了優化，樣品采用甲醇溶液進行提取，采用AQ- C18柱進行分離，分離度良好。本方法靈敏度高、重現性好、操作簡單、準確可靠，為洗浴產品中6-姜醇和6-姜酚的定性定量檢測提供可靠的分析方法。

【參考文獻】

[1]余珍，巫華美，丁定塏.生姜的揮發性化學成分[J].云南植物研究，1998，20（1）：113-118.

[2]趙文竹，于志鵬，勵建榮等.生姜的化學成分及生物活性研究進展[J].食品工業科技，2016，36（11）：383-389.

[3]姜程曦，宋嬌，程錦國等.姜中姜酚和姜醇的研究進展[J].中草藥，2015，46（16）：2499-2504.

[4]Mo K，Liu S，Cheng C.Study on Antioxidant Activity of the Ginger Flavonoid[J].Food Science.2006，27（9）：110-115.

[5]楊健，王兆進，李海偉等.不同干燥方法對生姜6-姜酚含量的影響[J].中國食品添加劑，2012，11：111-114.

[6]張永鑫，李俊松，蔡寶昌等.高效液相色譜法同時測定姜及其不同炮制品中5種姜辣素的含量[J].中國藥學雜志，2012，47（6）：471-474.

[7]劉雯，劉佳樂，張利萍等.HPLC法測定生姜提取物中6-姜酚含量的研究.廣東化工[J].2014，41（17）：169-170.

[8]張科衛，吳皓，崔小兵.HPLC法測定小半夏湯中6-姜酚和6-姜醇.中草藥[J]，2009，40（10）：1579-1581.