8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑的HPLC分析

郭明程，王曉軍，聶東興，張 楠，何 靜，楊 峻

（農業農村部 農藥檢定所，北京 100125）

呋蟲胺是由日本三井化學株式會社研發的第三代新煙堿類殺蟲劑。其主要作用于昆蟲煙堿乙酰膽堿受體，通過影響昆蟲的神經傳遞系統引起害蟲麻痹從而發揮殺蟲作用。呋蟲胺主要用于水稻、玉米、小麥、蔬菜和果樹等多種作物上的飛虱、蚜蟲、蝽象、潛葉蠅、粉虱、薊馬等害蟲防治[1-3]。苯醚甲環唑是由瑞士汽巴-嘉基公司開發的三唑類內吸性殺菌劑，其通過抑制細胞壁甾醇的生物合成，阻礙半知菌、擔子菌和子囊菌等真菌的生長。苯醚甲環唑殺菌廣譜，可用于葉面處理或種子處理，能有效提高作物的產量和品質[4-6]。二者復配制得的8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑，適用于水稻、小麥、玉米、花生和大豆等作物種子處理，處理種子時既可機械操作，也可人工拌種。其滿足不同生產層次的需要，推廣應用前景廣闊[7]。目前，有關呋蟲胺、苯醚甲環唑復配制劑的高效液相色譜分析方法尚未見報道。本文采用反相高效液相色譜法測定8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑中有效成分，方法快速、簡便，準確度和精密度高，適用于該制劑的檢測分析。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜，帶可變波長紫外檢測器和自動控溫進樣器；色譜柱：Venusil XBP-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；過濾器：過濾膜孔徑約0.45 μm；離心機；超聲波清洗器。

1.1.2 試劑

乙腈（色譜純）；超純水；呋蟲胺標樣（99.0%）、苯醚甲環唑標樣（99.0%），農業農村部農藥檢定所提供；8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑（5%呋蟲胺＋3%苯醚甲環唑）。

1.2 高效液相色譜操作條件

流動相：V（乙腈）∶V（水）=85∶15；柱溫：25℃；流速：0.5 mL/min；紫外吸收波長：270 nm；進樣量：20 μL。

以上操作條件系典型操作參數，可根據不同的儀器特點，對給定的操作參數進行適當調整，以期獲得最佳的分離效果。

1.3 測定步驟

1.3.1 標樣溶液的配制

分別稱取呋蟲胺標樣0.01 g和苯醚甲環唑標樣0.01 g（精確至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超聲助溶10 min，使標樣完全溶解。冷卻至室溫，乙腈定容，搖勻后放于4℃冰箱備用。實驗中根據需要用乙腈將儲備液稀釋為適當濃度的標樣溶液。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑0.01 g（精確至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超聲助溶10 min。冷卻至室溫，乙腈定容，搖勻后離心，取上層清液過濾膜。

1.3.3 測定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，當相鄰2針響應值變化小于1.5%時，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液順序進樣，進行分離與測定。

1.3.4 計算

根據標樣溶液和試樣溶液中呋蟲胺和苯醚甲環唑的峰面積，按下列公式外標法計算試樣中呋蟲胺和苯醚甲環唑質量分數w（%）。計算公式如下。

式中：A1為標樣溶液中呋蟲胺或苯醚甲環唑峰面積的平均值；A2為試樣溶液中呋蟲胺或苯醚甲環唑峰面積的平均值；m1為呋蟲胺或苯醚甲環唑標樣的質量（g）；m2為試樣的質量（g）；P為呋蟲胺或苯醚甲環唑標樣的質量分數（%）。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

呋蟲胺和苯醚甲環唑最大吸收波長分別為270 nm和210 nm，在210 nm吸收波長下，樣品溶液中的多種雜質均有吸收，產生干擾。因此，為避免雜質干擾和提高檢測靈敏度，最終選擇270 nm為檢測波長。在270 nm波長條件下，呋蟲胺、苯醚甲環唑和其他雜質能有效分離，且兩組分均有較強的吸收峰。

2.2 流動相的選擇

以不同比例的乙腈和水為流動相，采用Venusil XBP-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）進行分析。當乙腈體積分數降低時，呋蟲胺與苯醚甲環唑保留時間延長，色譜峰變寬。經反復測試，乙腈＋水（體積比85∶15）在流速0.4 mL/min時，組分和雜質能較好地分離，且色譜峰對稱，分離時間適中，可滿足分析需要。在此條件下，呋蟲胺保留時間約為3.75 min，苯醚甲環唑保留時間約為5.41 min。典型的呋蟲胺、苯醚甲環唑標樣及懸浮種衣劑樣品的高效液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 呋蟲胺、苯醚甲環唑標樣液相色譜圖

圖2 8%呋蟲胺·苯醚甲環唑FS液相色譜圖

2.3 線性相關性測定

將呋蟲胺和苯醚甲環唑配制成系列質量濃度的標樣溶液，按上述色譜操作條件測定其峰面積，每濃度測定2次，取平均值。以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，得線性回歸方程和相關系數。呋蟲胺線性回歸方程為y=133.35 x-6.855 8（R2=0.999 7）；苯醚甲環唑線性回歸方程為y=254.30 x-0.488 8（R2=0.999 9）。方法的線性關系良好，具有較好的定量線性關系。

2.4 方法的精密度測定

從同一8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑中稱取5份試樣，測定呋蟲胺和苯醚甲環唑的質量分數，考察定量分析方法的精密度，并計算其標準偏差和變異系數（見表1）。結果表明，呋蟲胺和苯醚甲環唑的標準偏差分別為0.069和0.036，變異系數分別為1.32%和1.18%，均低于CIPAC（國際農藥分析協作委員會）規定的要求（＜1.71%）。

表1 8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑精密度測定結果

2.5 方法的準確度測定

在已知含量的8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑試樣中，分別加入一定量呋蟲胺和苯醚甲環唑標樣溶液，按上述色譜操作條件進行5次重復測定，結果見表2。呋蟲胺的回收率為97.75%～102.68%，平均回收率為99.68%；苯醚甲環唑的回收率為98.72%～102.12%，平均回收率為100.76%。

表2 8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑回收率測定結果

3 結論

以Venusil XBP-C18反相柱為分離柱，乙腈＋水（體積比85∶15）為流動相，270 nm為檢測波長，測定8%呋蟲胺·苯醚甲環唑懸浮種衣劑中有效成分質量分數。方法操作簡便，分離度高，線性關系良好，且具有較高的精密度和準確度，適用于該制劑的質量檢測。