502膠熏顯指紋對DNA提取的影響

許 勇 馬培玉

1.濮陽市公安局刑偵支隊刑事科學(xué)技術(shù)研究所，河南 濮陽 457000；2.焦作市公安局刑偵支隊刑事科學(xué)技術(shù)研究所，河南 焦作 454002

近年來，隨著生化技術(shù)的高速發(fā)展，DNA檢驗技術(shù)已經(jīng)相當靈敏，最低檢出線可以達到pg級水平，在案件偵破中的應(yīng)用越來越廣泛，可以檢驗的檢材種類也越來越多，特別是接觸性的微量DNA檢材。在某些重點案件特別是命案兇器等重要檢材的處理過程中，我們經(jīng)常會遇到這樣的問題：物證表面的指紋印跡(屬于接觸性微量檢材)，若是直接擦拭提取DNA則對指紋造成了破壞，而使用502膠熏顯法對指紋進行顯現(xiàn)又擔心會對DNA的檢驗造成影響。那么502膠熏顯到底會對DNA提取造成怎樣的影響？這種問題如何解決?本文通過實驗對這一問題進行深入分析探討。

一、材料和方法

(一)樣本

選10個隨機個體，年齡段在20-50歲之間(犯罪高危年齡段)，將手洗凈擦干，十分鐘后在載玻片上摁壓兩個右手拇指指紋，分別標記為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J。

(二)儀器試劑

使用儀器：德國eppendorp公司Centrifuge5424高速離心機、中國黑馬公司恒溫金屬浴、美國AB公司AUTOMATE核酸提取儀、美國AB公司9700A型PCR擴增儀、美國AB公司7500 PCR定量儀、美國AB公司3500xl測序儀。

配套試劑：美國AB公司Quantifiler○RDuo試劑盒、美國AB公司ID-plus擴增試劑盒。

(三)實驗方法

第一步用植絨拭子擦拭載玻片上的一枚指紋，將棉簽頭剪下置于1.5ml離心管內(nèi)，加入200ul裂解液(BTA)，20ul的PK溶液。56℃震蕩保溫1小時，離心去載體，取上清液，使用美國AB公司AUTOMATE核酸提取儀提純DNA；將剩下的另一枚指紋送至痕跡檢驗實驗室進行502熏顯。用植絨拭子擦拭熏顯后的指紋，之后步驟同第一步。兩組溶液標記為熏顯前及熏顯后，分別進行PCR實時定量操作與PCR擴增、熒光測序。

二、實驗結(jié)果

(一)電泳分析結(jié)果

熏顯前及熏顯后兩組樣本的DNA溶液經(jīng)在美國AB公司3500xl測序儀電泳分析均獲得ID-plus體系的15個STR基因分型，峰高、域值在熏顯前后無明顯差異。

(二)PCR定量結(jié)果

項目編號定量結(jié)果(ng/ml)ABCDE熏顯前0.00250.06500.00720.02450.0032熏顯后0.00400.05130.00650.04060.0022

項目編號定量結(jié)果(ng/ml)FGHIJ熏顯前0.00380.00260.05720.04150.0067熏顯后0.00310.00350.04650.03780.0044

三、討論

首先本實驗通過中國實驗室國家認可委員會(CNAL)認證，所有實驗操作均符合規(guī)范且具有可靠性與權(quán)威性，從本次實驗結(jié)果來看，排除實驗中的不可控因素(指紋分割的不均勻性)及定量操作中的誤差因素等，其他影響實驗結(jié)果的因素均在可控范圍之內(nèi)。其次熏顯前后的檢驗結(jié)果數(shù)值相差<0.01ng/ml，對PCR擴增及電泳分析影響很小可忽略不計，由此得出結(jié)論：一是常用的502膠熏顯法對接觸性的微量DNA檢材不存在破壞作用；二是對法醫(yī)DNA檢驗普遍采用的PCR擴增試劑，電泳測序影響不大。

分析其原因：一是502膠熏顯法是一種物理顯現(xiàn)方法，通過對502膠加熱熏蒸，使502膠蒸汽對指紋紋線進行包裹凝固從而達到顯現(xiàn)指紋的目的，其過程并沒有對指紋上的DNA進行破壞，所以使繼續(xù)對熏顯過的指紋進行DNA檢驗成為可能。二是502膠的主要成分為α-氰基丙烯酸乙酯，加入增粘劑、穩(wěn)定劑增韌劑、阻聚劑等，通過一定反應(yīng)形成的單組分瞬間固化劑[1]，和空氣中微量水催化下發(fā)生加聚反應(yīng)，迅速固化而將被粘物粘牢。其化學(xué)成分為樹脂，在高溫下可以由有機溶劑溶解，從而釋放出被膠包裹的人體細胞DNA，進行PCR反應(yīng)，最終電泳測序，檢出DNA結(jié)果。三是對PCR擴增有顯著影響的抑制劑有重金屬離子和某些有機溶劑如：苯酚，EDTA，尿素等。而502膠不含有上述成分，所以對PCR擴增沒有顯著影響。四是本實驗采用的是磁珠法提取DNA，所用磁珠對DNA特異性吸附，通過配套洗脫液再從磁珠中釋放出來，最終得到相對純度較高的DNA樣本，避免了502膠殘留成分對電泳測序的影響。

綜上所述，502熏顯過程并不會對指紋上DNA檢驗造成影響，只是要做好物證保管工作，另外在熏顯過程中也要避免外源污染。