江西某黑山羊養殖場布魯菌病感染調查

張偉鋒，唐慕德.2，伍 鋼，鄭路程，徐智亮，溫宇婷，吳青青，劉 犇

(1.宜春學院生命科學與資源環境學院，湖北 宜春 336000；2.廣西大學動物科學技術學院，廣西 南寧 530004)

布魯菌病(以下簡稱“布病”)不僅會對畜牧業的發展帶來不利影響，而且對于人類的健康也存在著一定的安全隱患。每年我們都要消耗大量的動物性產品，因而在養殖場中控制、凈化該病是十分重要的。本次進行調查的山羊養殖場是一個建場兩年左右的新場，所飼養的山羊多從外地購進，未進行相關疾病的檢測和疫苗的接種，進行此次布病的調查對于該場安全性的評估、日后免疫程序的設置以及相關疾病的防治提供一定的指導意見，同時也對于該場日后建成為無規定疫病的規范性合格性養殖場有一定的幫助。

1 材料與方法

1.1 血清樣品 贛西某規模化黑山羊養殖場隨機選取345只黑山羊進行頸靜脈采血，采血管靜置數分鐘，3 000 r/min離心15 min后用移液槍將上層清亮液體吸出至滅菌EP管，并用記號筆寫上對應羊的耳標號，4 ℃冰箱保存待檢。

1.2 主要試劑 虎紅平板凝集診斷專用抗原、布魯菌診斷專用陽性血清和陰性血清(批號為201709)、試管凝集試驗診斷抗原、標準陽性血清、標準陰性血清，以上試劑，均購自中國獸醫藥品監察所；滅菌蒸餾水、滅菌生理鹽水和無水乙醇等由宜春學院肉牛(羊)疾病控制實驗室提供。

1.3 檢測方法 虎紅平板法和試管凝集法參照國標進行檢測，為保證虎紅平板法檢測的可靠度將檢測為陽性的血清按此方法再檢測一遍。試管凝集法檢測對象為虎紅平板法檢測結果為陽性的血清，依據說明書上的評判標準進行結果的判讀并記錄，當待測血清的4號管出現“++”以上凝集現象時記檢測結果為陽性，若3號管出現“++”以上凝集現象時應進行重復檢測，若出現相同結果則判定為陽性。

2 結果

2.1 虎紅平板凝集試驗 將診斷抗原加入標準陽性血清和標準陰性血清4 min后，標準陽性血清出現明顯肉眼可見的凝集小顆粒，而陰性血清未出現凝集顆粒，延長觀察時間也未出現凝集反應；待檢300余份血清中有的出現凝集現象和陽性對照相似。統計發現在345份血清中，第1次檢測出155份陽性血清，為排除假陽性再對這155份陽性血清進行二次虎紅平板凝集試驗，二次檢測出136份陽性血清，經過兩次虎紅平板凝集試驗后，篩查出136份陽性血清，陽性率為39.4%，見表1。

表1 虎紅平板凝集試驗結果

2.2 試管凝集試驗 采用試管凝集法對虎紅平板凝集試驗篩查出的136份陽性血清重新檢測，陽性血清在試管底部可見有明顯的白色沉淀上部液體清亮，陰性血清試管內部液體渾濁，靜置后無沉淀物析出，檢測結果發現有28份陰性血清。結合兩次檢測方法，最終檢測血清數總計345份，其中陽性血清108份，陽性率31.3%，詳見表2。

表2 試管凝集試驗檢測結果

3 討論

臨床上對于布病檢測的方法目前有血清學技術如采用 ELISA方法檢測蛋白Omp25[1]，采用分子生物學方法如PCR、RT-PCR等方法對布魯菌Omp31、ClpX 等基因進行檢測，雖然檢測的靈敏度高但是由于其成本高技術難度較大，不適于臨床和生產中大規模的使用[2-3]。虎紅平板凝集試驗是一種半定量的凝集反應試驗，是一種經典的布病檢測方法，此檢測方法具有敏感度較高、能快速大批量進行檢測和篩選工作、價格較為低廉、技術難度較低以及作用效果明顯等優點，十分適用于臨床和生產上大規模的檢疫[4]，但同時也存在一些缺點，容易出現非特異性凝集而造成的假陽性，以及對檢測時間把握不準使得在結果的判斷上存在著一定的主觀性。試管凝集試驗其原理是試管凝集試驗診斷抗原對IgM類抗體敏感性高，發生凝集反應[5]，相較于虎紅平板凝集試驗來說其發生非特異性凝集較低，準確度更高，但其操作繁瑣耗時長，需要較長的時間才能得出結果。本試驗采取平板法和試管法相結合對樣品進行檢測，先用虎紅平板凝集試驗(RPBT)對檢測血樣進行初步的篩選，再用試管凝集試驗(SAT)對陽性血清進行二次檢測，這樣既能夠在較短的時間內對大量樣品進行檢測，同時又可以保證檢測結果的準確性。這兩種方法的聯合使用適用于臨床實踐大范圍的檢疫及流行病學調查。

本次試驗從山羊養殖場隨機抽取了345份血樣，采用平板法和試管法相結合檢出含有布魯菌抗體的陽性血清108份，陽性率高達31.3%，通過對相關飼養人員的詢問得知該場成立至今還未進行相關疫苗的接種工作，表明該場所飼養的黑山羊存在著較為嚴重的布魯菌感染的情況。筆者分析該養殖場布病感染率高的原因主要有以下幾點：(1)羊場飼養的黑山羊來源復雜，該場羊只主要是從周邊縣市或者外地收購，沒有做到自繁自養，這樣有利于疫病的傳播；(2)外購的羊只未進行布病等相關疾病的檢疫與隔離觀察，就和原廠所飼養的羊只混養，同時該場自建場以來還沒有進行相關疫病的檢測和疫苗的接種，這很可能導致一些易感動物和健康動物被感染；(3)羊圈的衛生條件較差，雖然有漏糞板但是糞便未及時清理，極易滋生細菌；(4)該場生產管理方式有待改善，飼養員的防疫意識不強，存在串欄現象，各棟羊舍沒有單獨的消毒池。

通過這次檢測發現，該場存在較為嚴重的布魯菌感染，建議及早對全場羊只進行布病及其他疫病的檢測，按相關規定無害化處理感染羊，對檢測陰性的羊單獨飼養并進行疫苗的接種；定期進行檢測和接種后抗體水平的監測，對于檢測出陽性者要及時淘汰，對于抗體水平低的要及時補種，采取綜合防治措施做到徹底凈化該病；堅持自繁自養，外地引種時一定要做好隔離觀察與檢測工作，未攜帶特定病原體方可混養；改善優化管理措施，通過采取培訓等方法提升飼養員的相關專業知識和防范意識，定期對場區進行消毒工作，搞好衛生環境。