微創外科技術建立犬胃內異物和膀胱結石疾病模型的研究

張 華，童津津，王軍輝，王曉英，王洪斌

(1.北京農學院動物科學技術學院，北京 昌平 102206；2.山東省威海市文登畜牧獸醫局，山東 威海 264400；3.東北農業大學動物醫學學院，黑龍江 哈爾濱 150030)

目前，隨著腹腔鏡技術的不斷發展，腹腔鏡手術已向外科的各個領域不斷發展。腹腔鏡技術在胃、膀胱外科領域應用中也在不斷擴大。對于腹腔鏡切除臟器手術進行的研究表明腹腔鏡手術相對于開腹手術，在術后應激反應、炎癥反應、免疫反應等反應上具有相對的優勢，而臨床研究報道也表明，腹腔鏡技術相比于開腹手術有術后疼痛輕，住院時間短、恢復快等優點，同時還具有術中出血少、痛苦小、恢復快、并發癥少、免疫保護的優勢[1-2]。而對于腹腔鏡手術建立病例模型目前仍處于探索階段，相關的臨床及基礎研究仍需要進一步研究?，F如今建立疾病模型大都使用分子手段，如基因轉移、基因敲除[3]，但這些手段具有一定局限性，因其大多針對臟器原發病的建立，需要較長的建模周期。而腹腔鏡技術可以通過可視化微創的方法建立動物臟器的繼發性疾病，發病快、周期短，可以立即觀察到結果。目前還有通過開腹的方法進行疾病建立，此方法雖然術野開闊，器官定位直觀，但術后常伴有嚴重的并發癥，如腹腔臟器粘連、出血過多、創口感染、動物恢復時間過長、手術時間較長，不符合疾病模型的建立原則[4]。

獸醫臨床教學中對常見疾病的認識與學習大多停留在理論理解、圖片和視頻觀察階段，造成這種現象的原因主要是在教學階段較難找到帶有特定疾病的動物以供學習觀察。而腹腔鏡技術目前廣泛的應用，利用腹腔鏡技術在實驗動物身上人為的制造疾病，如胃內異物、膀胱結石等，進行簡要的術后護理之后，待皮膚傷口愈合便可將動物應用到臨床教學中。帶有特定疾病的模型動物，會使學生在學習過程中有更直觀的觀察，這種教學方式會對學生的學習具有事半功倍的效果。因此，本實驗目的是建立一個簡單、易行、可操作性強，可大量復制的動物疾病模型，以便在相關的教學和科學研究中應用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 本試驗選用普通雜種實驗犬，雄性、年齡3～9歲，體重為10～13 kg。犬只呼吸、脈搏、體溫、黏膜顏色、淺表淋巴結檢查均正常，營養狀態良好。

1.2 器械與藥品 常規手術器械，腹腔鏡器械，腹腔鏡，氣腹機，高頻電刀，吸引器，呼吸麻醉機，醫用氧氣，二氧化碳，雞骨，碎石，7號縫合絲線，醫用縫合針，酒精棉、碘酊棉；丙泊酚，異氟烷，阿托品，止痛劑，500 mL生理鹽水，青、鏈霉素。

1.3 犬胃內異物疾病模型 術前準備：實驗犬3只，術前禁食12 h，禁水4 h。腹部剃毛備皮。

麻醉與保定：采用呼吸麻醉的方式用以維持手術的順利進行，丙泊酚4～6 mg/kg·bw，靜脈注射誘導麻醉，迅速進行氣管插管，連接呼吸機，打開麻醉劑，并連接好呼吸監護儀和循環監護儀，全程實驗犬進行動態監測。

充入氣腹：術部常規大面積消毒，將氣腹針在臍下刺入腹腔，連接自動氣腹機進行氣腹的建立，氣腹壓選擇10 mmHg。

建立手術通路：第一套管位置為氣腹針位置(進入腹腔鏡通路)，兩個輔助套管(進入腹腔鏡器械)分別安置在兩側側腹壁(見中插彩版圖1)。

胃內置入異物：助手從前腹壁扎進一帶線圓針于腹腔中，術者用針扎進胃漿膜肌層，再將針穿出腹壁，將胃吊起，用腹腔鏡電凝電切刀在胃大彎血管較少處做一小切口(見中插彩版圖2)，然后使用腹腔鏡器械從腹壁套管口，將長約5 cm經高壓蒸汽滅菌后的雞骨，置入實驗犬胃內(見中插彩版圖3)，最后縫合胃壁切口，胃黏膜層做兩道簡單結節縫合，漿膜肌層做3道簡單結節縫合，用腹腔鏡吸引器沖洗腹腔，吸出血液以及滲出物，檢查縫線是否結實，撤出腹腔鏡及器械，閉合腹壁套管口，對創緣進行碘伏消毒。

1.4 膀胱結石疾病模型 術前準備、麻醉與保定和建立氣腹同1.3。

建立手術通路：第一套管位置為氣腹針位置(腹腔鏡通路)，兩個輔助套管(腹腔鏡器械)分別安置在兩側側腹壁(見中插彩版圖4)。

膀胱內置入結石：助手從腹股溝扎進一帶線圓針于腹腔中，術者用針扎進膀胱漿膜肌層，再將針穿出腹壁，將膀胱吊起，用腹腔鏡電凝電切刀在膀胱腹側做一小切口，然后使用腹腔鏡器械，從腹壁套管口，將數顆米粒大小經過滅菌的砂石置入實驗犬的膀胱內(見中插彩版圖5)，最后縫合膀胱切口，黏膜層行兩針簡單結節縫合，漿膜肌層行三針結節縫合，沖洗腹腔吸出血液與滲出液，撤出腹腔鏡及器械，閉合腹壁套管口，對創緣進行碘伏消毒。

1.5 術后護理和監測 將實驗犬放置于溫暖干燥處蘇醒，待完全蘇醒6～8 h后自由飲食，飲水。術后8 h內密切監護實驗犬的體溫、心率、呼吸頻率、精神狀態等生命指標，防止麻醉并發癥的產生。給犬只佩戴伊麗莎白圈，以防過分舔舐傷口。犬胃內異物疾病模型實驗犬，飲食主要以流食易消化為主，觀察嘔吐物的顏色及性狀并注意胃內異物是否吐出；定時牽遛，觀察是否有排便異?；蚰c梗阻。膀胱結石模型實驗犬要控制飲水量以防嚴重尿儲留使膀胱二次損傷；注意觀察排尿姿勢、尿液的顏色和排尿量。每天兩次對傷口進行碘伏消毒，每天1次皮下注射1支青霉素加半支鏈霉素，持續3 d。

2 結果與分析

2.1 犬胃內異物模型結果

2.1.1 一般狀態及手術效果 實驗犬精神沉郁，飲水減少，厭食伴有嘔吐，創口恢復后腹壁完好(見中插彩版圖6)。術后3只犬均表現出嘔吐，厭食，腹部觸診敏感的癥狀。

2.1.2 影像學結果 經X線檢查，發現犬胃內有高密度長方形不規則顯影，同時胃內伴有大量氣體，并且十二指腸前段有氣體蓄積(見圖7)?？梢宰C實胃內有異物存在，證明模型建立成功。

圖7 術后胃部X線影像

2.1.3 白細胞和體溫結果 從數據中可以看出術后1 d炎癥反應最高，然后逐漸減輕。體溫變化幅度不大，均趨于正常。

時間/dWBC(×109/L)BT/℃術前12.83±3.6638.79±0.58術后119.97±7.99?38.89±0.48術后313.66±3.4538.78±0.49術后512.57±3.3338.84±0.35術后711.68±2.6938.61±0.14

注：與術前相比，*：P<0.05

2.2 犬膀胱結石模型結果

2.2.1 一般狀態及手術效果 模型犬精神沉郁，下腹圍增大，厭水，食欲減退，創口恢復后腹壁完好。術后3只犬均出現尿淋漓，尿潴留，尿血，排尿姿勢異常，后腹部觸診敏感的癥狀。對尿沉渣進行瑞士-姬姆薩染色，可見大量紅細胞，以及嗜中性粒細胞，另外還有管型、鱗狀上皮、移行上皮出現。

2.2.2 影像學結果 經X線檢查，膀胱以及尿道中出現高亮密度黃豆大小不規則影像，膀胱中有尿液儲留；經B超檢測可見清晰膀胱輪廓，內有高密度回聲(如圖8)。

圖8 術后B超影像

2.2.3 白細胞與體溫結果 從數據中可以看出術后1 d炎癥反應最高，然后逐漸減輕。體溫變化幅度不大，均趨于正常。

時間/dWBC(×109/L)BT/℃術前11.39±3.1138.65±0.34術后120.98±6.15??39.61±0.38??術后313.34±2.4838.79±0.54術后512.43±1.6638.60±0.38術后711.69±1.3338.58±0.35

注：與術前相比，**：P<0.01

3 討論

在模型建立的手術過程中，植入物通過套管送入腹腔時，扶鏡手應將鏡頭對準植入物，以防掉進腹腔深處，無法找尋，延長手術時間；同時也應格外注意縫合針不要遺留在腹腔，對臟器造成不必要的損傷。對于縫合針的選擇，盡量選擇小號針，方便在腹腔狹小空間操作?？p線以剛好縫合完創口為宜，太長不便于在腹腔里打結。在膀胱切開和胃切開前，若臟器內有尿液或氣體，應從套管下一穿刺針外連吸引器，將尿液吸出或放出氣體，以免尿液污染腹腔，或有氣體影響操作。在造胃內異物模型時，由于臍部前方有鐮狀韌帶，容易影響手術視野，尤其體型肥胖的犬，所以應用電刀先將鐮狀韌帶切除；切除的鐮狀韌帶可作為胃內異物材料，與其他材料一同放入胃中。插入側腹壁套管時由于側腹壁肌層較薄，腹膜也較薄，套管容易滑脫，當充氣腹時，應避免造成皮下氣腫。在放置左側腹壁套管時，扶鏡手應把影像對準左側脾臟，避免套管針扎壞脾臟造成損傷。在插右側套管時，應注意避免扎壞腸管等臟器。用電凝電切刀切割臟器時，會產生大量氣體，應及時放氣，否則煙霧會影響腹腔內手術視野的觀察和操作，同時也應及時清洗鏡頭，清洗時將鏡頭前端浸泡在加有5%碘伏的熱水中10～20 s，用無菌紗布自上而下將鏡頭擦干。腹腔鏡器械和普通手術器械相比更精密，且結構復雜，活動軸節多及管腔細小，所以腔鏡類手術器械在使用后應立即按要求進行預處理[5-6]。

套管穿刺孔部位的感染是最常見的并發癥之一，其發生率約 1%[7]。需要注意的是，5 mm 的穿刺孔同樣有出現疝的可能，尤其是手術時間過長或者在穿刺孔內反復進出操作，此時腹膜和筋膜擴大，關腹時需要進行縫合[8]。全身麻醉患犬在手術結束拔除氣管插管時，突然的咳嗽或各種原因產生的腹壓增高也會誘發疝的發生[9]。腹腔鏡手術對機體的影響原因是多方面的，主要集中在CO2氣腹、保定姿勢、電刀損傷、麻醉藥物及方式、神經內分泌、缺血再灌注、細菌移位等[10]。Gut等[11]報道，腹腔鏡膽囊CO2氣腹可使減少門靜脈血流30%以上，手術體位也會加重門靜脈血流的減少。胃內異物模型最常見的并發癥就是胃內異物通過幽門進入腸管造成腸梗阻，一旦發展成腸梗阻就會對動物造成嚴重影響，不及時手術甚至會威脅生命。頻繁嘔吐也經常會發生，嘔吐過程中很容易把異物材料吐出，更值得注意的是，過分嘔吐，會使機體失去大量水分，容易引起動物脫水，如果出現這種情況必須采取輸液療法。膀胱結石模型最常見的并發癥是結石堵塞尿道，由于公犬存在陰莖骨，結石很容易造成嚴重尿潴留，甚至會引起切口破裂、腹腔積尿、腹膜炎或腎臟損傷，嚴重會造成尿毒癥，最終威脅生命。因此，在模型制作時應盡可能選擇較大的鵝卵石作為膀胱內植入物。

本試驗采用腹腔鏡微創技術成功建立犬的胃內和膀胱異物模型，將其投入到臨床教學中，學生可以更直觀的看到疾病的癥狀、發展以及轉歸，然后學生自主選擇診斷方法，并對患犬進行治療，效果比給予學生圖片或視頻更直觀，進而提高獸醫臨床教學水平。