河南地方品種雞禽白血病病毒感染狀況的調查

姬向波，楊朋坤，陳中衛，許紅霞，高小寒，黃炎坤

(1.河南牧業經濟學院，河南 鄭州 450046；2.河南省畜禽遺傳資源保護工程技術研究中心，河南 鄭州 450046)

禽白血病(Avian leukosis, AL)是由禽白血病/肉瘤病毒群(Virusesofavianleukosis/sarcomagroup, ALV/ASV)中的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的總稱。根據禽白血病病毒與宿主細胞特異性相關的囊膜蛋白的抗原性，將其分為A～J等10個亞群，其中E亞群為內源性病毒，致病力較弱或無致病性。目前，在中國雞群中普遍存在ALV-A/B亞群和J亞群單獨或共感染現象，且J亞群對肉雞致病力較強，誘發腫瘤率較高[1-2]。該病的主要危害為：一、可導致感染雞直接發生腫瘤性疾病而死亡；二、可導致感染雞產生免疫抑制和多組織器官發育遲緩，機體抵抗力下降，造成繼發其他病原的多重感染；還可通過垂直傳播危害子代雞。鑒于禽白血病對養雞業的巨大危害，“國家中長期動物疫病防治規劃(2012-2020年)”將其列為必須消滅或控制的主要疫病之一[3]。

禽白血病p27抗原檢測是開展禽白血病的流行病學調查和感染風險評估的重要手段之一[4]，但該檢測無法區別外源性病毒和內源性病毒感染，ALV-A/B抗體、J抗體亞型檢測可確定檢測雞只是否感染過相應的外源性病毒[5-6]。為了了解河南地方品種雞群的禽白血病病毒感染狀況，分別從河南不同地區的9個種禽場，采集了5個不同地方品種雞群的樣本，對其泄殖腔拭子、血清和蛋清進行p27抗原或ALV-A/B抗體、J抗體亞型檢測，為河南省地方品種雞的禽白血病凈化和品種資源保護提供依據。

1 材料與方法

1.1 試劑 禽白血病p27 ELISA檢測試劑盒為荷蘭Biochek公司生產，禽白血病A/B、J亞型抗體ELISA檢測試劑盒為美國IDEXX公司生產，分別購自北京天之泰生物科技有限公司和北京愛德士元亨生物科技有限公司。

1.2 樣品采集與處理 從2015年10月至2017年4月，至河南省不同地區9個種禽場、隨機選取1450只5個地方品種的開產母雞群，分別采集其泄殖腔、血清、蛋清樣品。泄殖腔棉拭子采集方法為，在樣品管中加入1 mL樣品稀釋液、無菌棉簽采集雞泄殖腔分泌物，放入稀釋液中；血清采集方法是每只雞采集全血0.5 mL于滅菌離心管中，待凝固后3 000 r/min離心10 min，收集血清；蛋清的采集方法是，收集待檢雞種蛋，每只種蛋取0.5 mL濃蛋白至無菌離心管。以上樣品均進行編號，低溫運輸，-80 ℃冷凍保存。

1.3 ALV-p27抗原及A/B、J亞型抗體檢測 采用ELISA方法對采集的樣品進行檢測。對泄殖腔棉拭子、血清和蛋清樣品均進行ALV-p27抗原檢測，檢測前反復凍融3次；同時對血清樣品還進行了ALV-A/B亞型、J亞型抗體檢測。

1.4 不同地方品種雞ALV感染狀況統計 根據檢測結果和采樣編號，將同1只雞泄殖腔、血清、蛋清任一樣品ALV p27抗原檢測陽性者計為V+，3種樣品p27抗原檢測均為陰性者計為V-；ALV-A/B亞型、J亞型抗體任一檢出陽性者計為A+，兩種均為陰性者計為A-。

2 結果與分析

2.1 不同地方品種雞禽白血病病毒感染狀況調查結果 由表1可知，同一雞群不同樣品的p27抗原檢出率不完全一致，其中以血清樣品的陽性率最高。1 450只地方品種雞的ALV群特異性抗原p27蛋清的陽性率分別為泄殖腔22.62%、血清26.83%、蛋清12.90%；ALV-A/B亞型和J亞型抗體陽性率分別為24.76%和19.52%。結果表明，河南地方品種雞ALV感染現象較為普遍，且不同地方品種雞群之間的ALV p27抗原陽性率和ALV抗體陽性率均差別較大，其中河南斗雞和淅川烏骨雞血清中的p27抗原陽性率分別達84.48%和53.78%；5個地方品種雞群中僅淅川烏骨雞的ALV-J亞型抗體陽性率高于ALV-A/B亞型抗體陽性率。

表1不同地方品種雞ALVp27抗原和抗體亞型檢測結果

品種樣品數量p27抗原陽性率/%ALV抗體陽性率/%泄殖腔血清蛋清A/B亞型J亞型固始雞74716.6019.8110.1721.4214.46三黃雞18011.6717.228.8917.7813.33盧氏雞24013.7516.677.0820.0010.42淅川烏骨雞22553.3353.7824.0035.1149.78河南斗雞?5851.7284.4841.3868.9724.14總計145022.6226.8312.9024.7619.52

*：因河南斗雞雞群數量較少，本試驗對同一河南斗雞雞群進行了兩次采樣檢測，被采樣母雞分別為160日齡和250日齡(下表同)。第1次檢測結果p27抗原和ALV抗體檢出率均為0,此表數據僅計入了第2次檢測結果

2.2 同一品種雞在不同場區感染情況 由表2可知，同一品種雞在不同場區的ALV p27抗原陽性和ALV抗體陽性差異率均有較大差異，如固始雞和盧氏雞兩個地方品種雞，不同場區的血清ALV p27抗原陽性率差別分別為12.45%和18.33%，這可能和不同雞場的飼養管理水平和生物安全防控措施有關。ALV抗體亞型檢測結果顯示，除淅川烏骨雞外，4個地方品種雞血清樣品中ALV-A/B亞型抗體陽性率均高于ALV-J亞型抗體陽性率，表明河南地方品種雞群ALV-A/B亞型感染率高于ALV-J亞型。結果還顯示，河南斗雞同一雞群在160日齡和250日齡的泄殖拭子、血清、蛋清3種樣品的p27抗原抗體陽性率分別為0、0、0和46%、54%、34%；ALV抗體陽性率分別為0和44%，表明該雞群在此期間感染了ALV。

2.3 不同品種雞在不同場區ALV感染狀況 雞感染ALV有4種情況，分別為：無病毒血癥、無抗體(V-A-)；無病毒血癥，而有抗體(V-A+)；有病毒血癥又有抗體(V+A+)；有病毒血癥無抗體(V+A-)。按此分類對檢測樣本的統計結果見表3。由表3可知，正陽三黃雞的兩個場區雞群感染狀況主要為V-A-，占比分別為74.17%和71.67%，固始雞和盧氏雞兩個品種在不同場區的感染狀況差別較大，V-A-分別為51.16%、86.15%和55.83%、86.67%，淅川烏骨雞和河南斗雞兩個品種雞群V-A-占比較低，分別為22.86%、18%和13.79%。同時，固始雞A場的ALV V+A-感染狀況占比最高，達22.68%，與同品種B場的2.16%相差達20.52%；河南斗雞同一雞群的ALV感染狀況在不同時間的差別極大。

表2 不同雞場的雞ALV p27抗原和抗體亞型檢測結果

表3 不同地方品種和場區的雞ALV感染狀況統計結果

3 討論

近10年的報道顯示，禽白血病病毒已傳入中國的地方品種雞群，且在國外已基本凈化的ALV-A/B亞群在中國雞群的感染有明顯上升趨勢[7-8]。考慮到禽白血病病毒的垂直傳播特點，本次調查采集了河南地方品種開產母雞的泄殖腔拭子、血清和蛋清為檢測對象。調查結果顯示，同一批雞的3種檢測樣品ALV-p27抗原陽性率有較大差異，其中以血清的陽性率檢出率最高，蛋清的陽性檢出率最低。結果還表明，1 450只母雞的血清ALV p27抗原陽性率平均為26.83%，血清ALV-A/B亞型和ALV-J亞型抗體陽性率平均分別為24.76%、19.52%，說明河南5個地方品種雞群中均存在不同程度的ALV感染，且ALV-A/B亞群和ALV-J亞群的單獨或共感染已在河南地方品種雞群中普遍存在。另外，結果還顯示，不同品種雞群間的ALV p27抗原陽性率差別較大，這是否和不同地方品種雞對ALV的抗性差異有關，還有待進一步研究。

本次調查同時對比了4個不同地方品種雞群在不同場區的ALV感染狀況，結果顯示，固始雞和盧氏雞在不同場區的ALV p27抗原陽性率和ALV-A/B、J亞型抗體陽性率均差別極大，而正陽三黃雞和淅川烏骨雞在不同場區的ALV p27抗原陽性率差別較小。該結果表明，雞群ALV的感染與生物安全措施、飼養管理等因素有較大關系。此次調查還發現，河南斗雞同一母雞群不同日齡的ALV p27抗原陽性率和ALV-A/B亞型、J亞型抗體陽性率發生了極大變化，據了解，該場在兩次檢測期間沒有引種情況，且目前雞群未見發生腫瘤性疾病，是否因生物制品污染導致該結果還有待進一步調查。

研究表明，先天感染ALV的胚胎對病毒發生免疫耐受，出殼后表現為V+A-雞，其血液和組織含毒量很高，是重要的ALV傳染源，且該類型雞只成年后發病率和死亡率都較高[1]。本次調查顯示，固始雞A場和淅川烏骨雞A場的雞群V+A-感染雞占比分別為22.68%和20.57%，據了解這兩個場區已有較為典型的禽白血病病例，且發生率較高。這說明ALV引起的先天性感染確實對雞群健康有較大影響。

因目前尚無控制禽白血病的有效疫苗，故開展凈化工作是控制該病發生和傳播的最有效途徑，但由于凈化工作是一項長期任務，且凈化成本較高，而當前河南地方品種雞場的規模都比較小，僅有極個別場區開展了此項工作。但本次調查結果表明，河南地方品種雞群禽白血病的預防和凈化工作迫在眉睫。