謝瑜，黎承平，譚琳，武坤

(昆明醫科大學第一附屬醫院，昆明650032)

彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)屬于侵襲性較強的成人非霍奇金淋巴瘤(NHL)，病死率極高，且個體預后差異較大。DLBCL的治療和預后重點在于分期評價，盡管國際預后指數為NHL的危險分級和制定治療方案提供了廣泛認可的標準，但是對于NHL的預后仍無法明確[1]。因而，探尋準確的DLBCL評價和預后指標已成為現臨床研究的重要方向。白細胞介素11(IL-11)由骨髓基質細胞分泌，具有調控造血功能的生物學活性，可直接刺激巨核系組細胞和骨髓造血干細胞的增殖并誘導巨核細胞的分化和成熟。研究發現，IL-11與腫瘤的發生及發展關系密切[2]。IL-10對機體的免疫應答抑制具有重要作用，對淋巴瘤具有一定的調節作用[3]。但是，目前關于IL-10、IL-11與DLBCL的相關研究較少。因此，我們觀察了DLBCL組織中IL-11、IL-10 mRNA表達變化，并探討其意義。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2015年1月～2017年7月確診的DLBCL患者80例(DLBCL組)[4]、反應性淋巴增生患者40例(對照組)。DLBCL組，男48例、女32例，年齡(49.8±16.2)歲;臨床分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期27例、Ⅲ期27例、Ⅳ期6例；病理學分型：生發中心(GC)型53例，非GC型27例；有B細胞癥狀50例，無B細胞癥狀30例；淋巴瘤國際預后指數(IPI)：0～2分39例，3～5分41例;檢測前未行放化療、免疫治療。對照組男26例、女14例，年齡(48.0±14.9)歲。兩組性別、年齡比較，差異無統計學意義。兩組均排除其他血液系統疾病、其他部位的惡性腫瘤、全身感染性疾病、精神及認知功能疾病、風濕性疾病、結締組織疾病。本研究獲得醫學倫理委員會的批準，受試者均簽署知情同意書。

1.2 淋巴結組織中IL-11、IL-10 mRNA檢測方法 采用qPCR法。用TRIzol試劑盒提取淋巴組織標本總RNA，于20 μL體系添加總RNA 2 μg合成cDNA；qPCR反應使用2×SYBR GREEN PCR MASTER Mix試劑盒(北京中杉生物有限公司)進行，適量cDNA為模板，15 μL體系擴增，0.4 μmol/L引物濃度，每個待測樣本均設置平行樣本3個并根據IL-11和IL-10具體引物行PCR擴增，GAPDH為內參，具體反應于PCR儀進行。引物序列：IL-11上游5′-AGTCGAATTCATGAGCAGCAGCTGCTCAGGGG-3′，下游5′-AGTCCTCGAGTAGGACTGTCTTCTTCCTGTA-3′；IL-10上游5′-ACCTGCCTAACATGCTTC-3′，下游5′-AGTCCCACCGCTGAGATA-3′。PCR反應條件：10 min 95 ℃；15 s 95 ℃；30 s 60 ℃；30 s 72 ℃，共計40個循環。實驗重復3次，以2-ΔΔCt計算目的基因的相對表達量。

2 結果

2.1 兩組IL-11、IL-10 mRNA表達比較 DLBCL組IL-11、IL-10 mRNA表達均高于對照組(P均<0.05)。見表1。

表1 兩組IL-11、IL-10 mRNA表達比較

2.2 不同臨床病理因素DLBCL患者腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達比較 Ⅲ～Ⅳ期、非GC型、有B細胞癥狀、IPI指數3～5分DLBCL患者腫瘤組織中IL-11 mRNA表達高于Ⅰ～Ⅱ期、GC型、無B細胞癥狀、IPI指數0～2分者(P均<0.05)，有B細胞癥狀、IPI指數3～5分DLBCL患者腫瘤組織中IL-10 mRNA高于無B細胞癥狀、IPI指數0～2分者(P均<0.05)。見表2。

2.3 DLBCL腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達的關系 相關性分析顯示，DLBCL腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達呈正相關(r=0.577，P<0.01)。

表2 不同臨床病理因素DLBCL患者腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達比較

3 討論

DLBCL是最常見的NHL，約占30%。在我國DLBCL發病率更高，可達50%左右[5]。DLBCL沒有特殊的臨床表現，也沒有特征性的生物學特點，多以無痛性淋巴結腫大起病，但也有以淋巴結以外器官侵犯為主要表現起病，如胸、腹腔積液、中樞侵犯、生殖系統侵犯等[6,7]。因此，本研究探尋DLBCL患者的評價和預后的有效指標，旨在提高DLBCL的治療效果。

IL-11屬于新發現的細胞因子，具有多種生物學功能。研究提示，乳腺癌組織具有分泌IL-11的功能，乳腺癌的骨轉移和預后與IL-11的表達水平關系密切[8，9]。文獻提示，IL-11與腫瘤的發生、發展亦具有密切聯系，已成為臨床惡性腫瘤研究的重要方向[10]。IL-10能夠對細胞的生長與分化進行調節，參與炎性反應和免疫反應，是一類多細胞來源、多功能的細胞因子，亦是現階段公認的炎癥與免疫抑制因子，在腫瘤、感染、器官移植、造血系統及心血管系統中發揮重要作用[11～13]。此外，研究發現IL-10可作為強效免疫抑制劑調節B淋巴細胞的功能，進而影響HIV相關性NHL的發生發展過程[14,15]。

本研究結果顯示，DLBCL組腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達均高于對照組淋巴結組織，差異具有統計學意義。上述結果提示，DLBCL患者腫瘤組織中IL-11、IL-10 mRNA表達水平高于淋巴增生患者，證實IL-11、IL-10水平與DLBCL腫瘤的發生發展關系密切，結果與上述研究一致。IL-11、IL-10屬于機體誘導免疫耐受抑制細胞，由于腫瘤抗原的封閉和裝飾作用，加上自身免疫原性較弱，進而導致機體無法識別腫瘤抗原而出現免疫逃逸現象，上述原因可能是導致DLBCL患者機體IL-11、IL-10表達過高的主要原因。

本研究發現，Ⅲ～Ⅳ期、非GC型、有B細胞癥狀、IPI指數3～5分的DLBCL腫瘤組織中IL-11 mRNA表達均高于Ⅰ～Ⅱ期、GC型、無B細胞癥狀、IPI指數0～2分的DLBCL腫瘤組織，差異有統計學意義。這提示IL-11 mRNA具有作為DLBCL的臨床分期、病理分型及預后評估指標的潛力，可作為評價和評估DLBCL預后的獨立指標之一。針對IL-10 mRNA的研究結果顯示，不同臨床分期、不同病理學分型DLBCL腫瘤組織中IL-10 mRNA差異無統計學意義，有B細胞癥狀、IPI指數3～5分DLBCL腫瘤組織中IL-10 mRNA表達高于無B細胞癥狀、IPI指數0～2分的DLBCL腫瘤組織。IL-10 mRNA對DLBCL的臨床分期和病理分型并不具有重要意義，但可作為DLBCL預后的重要指標。IL-10屬于重要炎癥因子，但炎癥因子與多種影響因素有關，因此IL-10 mRNA對DLBCL的臨床分期和病理分型并不具有重要意義。這提示DLBCL的病理分期介導機制復雜，不僅僅與炎癥因子有關；但炎癥因子參與了本病的發生發展過程，因而IL-10 mRNA可作為DLBCL預后重要評估指標。因此，我們認為IL-11、IL-10 mRNA在DLBCL腫瘤組織中高表達，可作為DLBCL預后判斷的重要指標。